本发明专利技术提供了一种抗肿瘤活性肽变体，该蛋白变体相对于野生型具有更强的抑制肿瘤细胞生长的效果。这些变体蛋白质和它们的衍生物可以用于包括肝癌、肺癌、乳腺癌等多种肿瘤的治疗。
【技术实现步骤摘要】
相关申请 本申请是专利申请号为201410312285.2、名称为“一种抗肿瘤肽变体及其应用”的分案申请。
本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术涉及抗肿瘤肽变体。
技术介绍
ND100是由1Ala、1Glu、1Gly、1Leu、2Pro、1Thr、1Tyr组成的八肽。体外及体内试验均表明ND100具有明显的抑制肿瘤细胞生长的作用，可用来制备抗肿瘤药物，用于治疗肿瘤。在现有技术中，为了提高多肽的活性，针对多肽序列进行特异性的改变，从而寻找活性更高的变体是常规的做法。为了进一步提高该多肽的生物活性，申请人通过大量的实验，针对多肽序列进行了氨基酸的改变，从而获得了比原始多肽本身具有更高抑制活性的变体。
技术实现思路
本专利技术涉及的多肽，序列如下:NC： AlaGluGlyLeuProProThrTyr；（NC1）：AlaGluGlyLeuProProThrIle；（NC2）：AlaSerGlyLeuProProThrTyr；（NC3）：AlaGluGlyLeuProSerThrTyr；（NC4）：AlaGluGlyGlyLeuProProThrTyr；（NC5）：AlaGluGlyGlyLeuProProProThrTyr；（NC 6）：GlyAlaGluGlyLeuProProProThrTyr；（NC7）：AlaGlyGlyLeuProProThrTyr；（NC8）：GlyAlaGlyGlyLeuProProThrTyr；（NC 9）：AlaGlyGlyLeuProSerThrTyr；（NC 10）：GlyAlaGlyGlyLeuProSerThrTyr；（NC 11）：GlyAlaGlyGlyLeuProProProThrTyr；（NC 12）：AlaGlyGlyLeuProProProThrTyr；（NC 13）：AlaGlyGlyLeuProProProThrIle；对照1：AlaGluGlyLeuProGlyThrTyr；对照2：AlaLeuGlyLeuProProThrTyr；本专利技术的多肽合成后，可以做成游离态形式，也可以做成阳离子盐，如：TFA盐(三氟乙酸盐)，HCl盐(盐酸盐)，醋酸盐形式。本专利技术的多肽，可以选择和一种或多种药物载体组合，制成多种药物剂型，用于治疗。这些药物剂型涵盖：注射溶液、片剂、霜剂、胶囊、软膏、洗剂、舌含片等剂型局部或全身给药。具体实施方式实施例1：本专利技术多肽的人工化学合成本专利技术的肽的制备采用液相合成法和活化酯逐个增长法，将本专利技术的肽的C端的第二个氨基酸的氨基用Boc基(叔丁氧羰酰基)保护，羧基用HOSu(N-羟基琥珀酰亚胺)活化，然后在KHCO3溶液中与C端第一个氨基酸在30℃水浴，反应2天。抽去有机溶剂，在冰浴中用2mol/LHCl调pH3～4(沉淀最多时)，用乙酸乙酯抽提，饱和NaCl洗3次，无水Na2SO4干燥，抽干，无水乙醚研磨，得带保护基的二肽。用50％TFA(三氟醋酸)处理，脱去Boc基，再与N端带Boc保护基，C端用HOSu活化的C端的第三个氨基酸缩合，用同样的方法逐个接上氨基酸，最后用催化氢化法脱去Glu侧链上的保护基，用50％TFA脱去本专利技术肽N端的Boc基，得粗肽，粗肽用HPLC进行分离纯化，可得98％纯度的本专利技术的多肽。经过电喷雾质谱测定，其序列与目标序列完全一致。实施例2：ND100的抗肿瘤活性(1)体外活性测定：采用细胞培养和细胞计数的方法，人肝癌细胞7721、胃癌细胞MKN、肺癌细胞A549以各自常规的培养基，视不同情况加入10％左右的小牛血清， 用T-25培养瓶在37℃，5％CO2培养箱中单层培养。当细胞生长成单层后消化，用含1％小牛血清的培养液制成细胞悬液，按每孔 1ml接种到24孔培养板上，37℃、5％CO2培养箱中培养4h后，加入不同剂量的本申请的多肽， 对照组和实验组均设三个重复孔，对照组加入10μl的PBS，试验组加入不同剂量的本申请的多肽，继续培养72小时后，吸出培养液，用PBS洗，然后每孔加入200μl消化液消化，待细胞变圆后，加入800μl的PBS，在倒置显微镜下用血球计数板计数。抑制率结果如下：多肽（剂量1mg/ml）人肝癌细胞7721胃癌细胞MKN肺癌细胞A549NC85.2%74%70%NC197%92%90%NC298%94%91%NC398%93%92%NC499%92%91%NC598%95%93%NC698%94%92%NC798%93%91%NC897%93%93%NC998%94%94%NC1098%92%93%NC1197%96%92%NC1299%95%92%NC1398%91%93%对照135%19%11%对照229%20%19%(2)体内活性测定：30只健康昆明种小白鼠，体重20±2克，平均分三组，每组10只，雌雄各半。将已接种人肝癌细胞7721、胃癌细胞MKN、肺癌细胞A549的荷瘤小鼠处死，无菌操作抽取其腹水，按1∶3比例稀释，配制成细胞悬液，于每只实验用小鼠的右前肢腋窝皮下注射0.2ml瘤细胞悬液，瘤细胞不少于105，植瘤24hr后，给药组分别以不同剂量进行静脉注射，以生理盐水作为阴性对照组，CTX为阳性对照组，连续注射7天后， 于停药3天时处死小鼠，剖取皮下瘤块，称瘤重，计算抑瘤率。对于肺癌，植瘤24hr后，给药组、生理盐水和CTX组样品连续注射10天后，于停药4天时处死小鼠，剖取皮下瘤块，称瘤重，计算抑瘤率。 检测结果显示，15mg/kg剂量的NC的抑瘤率分别为：肝癌77%，肺癌78%，胃癌75%。而NC1-13的三种癌症的抑瘤率相近，大约分别为肝癌99%，肺癌98%，胃癌96%。而对照1和对照2几乎没有抑瘤率。从以上结果可以看出，NC1-13可以作为药物用于制备抗肿瘤药。具有较好的应用前景。序列表 <110> 马海龙<120> 一种抗肿瘤肽变体NC4及其应用<160> 16 <210> 1<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<400> 1AlaGluGlyLeuProProThrTyr<210> 2<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<400> 2AlaGluGlyLeuProProThrIle<210> 3<211> 8<212> PRT<213> 人工本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗肿瘤肽，其氨基酸序列为SEQ ID NO：1，5所示。
【技术特征摘要】
1.一种抗肿瘤肽，其氨基酸序列为SEQ ID NO：1，5所示。
2.如权利要求1所述的肿瘤肽变体在制备抑制肿瘤药物中的用途。
3.如权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：马海龙，
申请(专利权)人：马海龙，
类型：发明
国别省市：陕西;61
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。