一种磁性固定化酶的制备方法技术

本发明专利技术提供一种磁性固定化酶的制备方法，涉及一种新型载体PVP-DB-171（聚乙烯吡咯烷酮-乙烯基三甲氧基硅烷）/SiO2/Fe3O4的制备方法。发明专利技术的目的是为了解决游离酶对反应环境敏感、无法回收和生产成本高等问题，故将游离酶固定化在纳米级磁性载体PVP-DB-171/SiO2/Fe3O4。它是一类具有磁响应特性的酶，具有操作稳定性，而且纳米级固定化酶在液相中分散均匀。并利用其磁响应性能达到固定化酶与反应介质完全分离的目的。最终得到的固定化酶活回收率为85%，重复使用10次相对酶活力保留在70%以上。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种磁性固定化酶的制备方法，其特征在于载体PVP‑DB‑171（聚乙烯吡咯烷酮‑乙烯基三甲氧基硅烷）/SiO2/Fe3O4的制备方法通过以下步骤实现：一、制备Fe3O4磁性微球，按以下步骤进行：将三价铁盐和二价亚铁盐按一定的比例配成溶液，并选用碱性沉淀剂(如NH3·H2O、NaOH等)进行共沉淀；二、制备SiO2/Fe3O4核壳粒子；三、制备磁性载体PVP‑DB‑171/SiO2/Fe3O4，按以下步骤进行：在80mL乙醇中加入0.14g DB‑171，3.98g NVP和0.20g AIBN，75℃回流6h，旋蒸后于60℃真空干燥24h制得PVP‑DB‑171，在100mL三口瓶中加入2g SiO2/Fe3O4的水溶液和200mL水，混合均匀后，逐滴加入50mg PVP‑DB‑171的乙醇溶液20mL，加入0.3g三乙胺，70℃回流10h，采用钕铁硼永磁铁将混合物磁分离，用去离子水洗涤3次，得到PVP‑DB‑171/SiO2/Fe3O4，将其配成质量分数为0.8%的水溶液待用；四、磁性固定化磷脂酶A1，磷脂酶A1加入到0.1mol/L且pH值为5～10的磷酸缓冲液中，制成质量浓度为0.2%的磷脂酶A1磷酸缓冲液，然后将浸泡后的载体加入到12～88mL磷脂酶A1磷酸缓冲液中，在40℃下用磁力搅拌器搅拌6h，搅拌速度为12r/min，然后进行磁分离，用0.1mol/L且pH值为7.0～7.2的磷酸缓冲液冲洗3次，即得到磁性固定化磷脂酶A1；五、测定固定化酶活性；六、固定化磷脂酶A1的重复利用次数的研究。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：江连洲，于殿宇，赵清霞，王俊国，王立琦，赵丹丹，杜华楠，刘飞，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23