本发明专利技术公开了一种能识别乙酰甲喹和喹乙醇代谢产物的特异性单克隆抗体和一种用于检测乙酰甲喹和喹乙醇代谢产物的酶联免疫方法及试剂盒，本发明专利技术的单克隆抗体是由保藏号为CCTCC NO:C201496的杂交瘤细胞株DMEQ1A3所分泌的。与现有技术相比，本发明专利技术制备的单克隆抗体可以同时识别脱二氧乙酰甲喹和脱二氧喹乙醇，具有较高的灵敏度和特异性。本发明专利技术建立的ELISA方法和试剂盒能同时检测乙酰甲喹和喹乙醇代谢产物在肉类食品中的残留，具有检测效率和灵敏度高，精密度和准确度好等优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于兽药残留分析和免疫学
，涉及一种能识别乙酰甲喹和喹乙 醇代谢产物的单克隆抗体和一种用于检测乙酰甲喹和喹乙醇代谢产物的酶联免疫方法 (ELISA)及试剂盒。
技术介绍
脱二氧乙酰甲喹和脱二氧喹乙醇属于喹噁啉类药物，是原型药物乙酰甲喹和喹乙 醇在动物体内脱氧代谢的产物，具有苯并吡嗪1，4-二氮萘的基本结构，乙酰甲喹和喹乙醇 抗菌谱较广，抗革兰氏阴性菌的作用要强于阳性菌，在兽医临床和养殖业得到了广泛应用。 人们为了追求经济利益而滥用药物，导致药物在动物食品中大量残留。喹噁啉类药物会对 动物产生三致作用、光敏反应和肾上腺皮质损坏等毒副作用，部分文献报道，药物对动物机 体还有一定程度的生殖毒性和细胞毒性。 现已发展了多种用于检测该类药物残留的方法，如微生物方法、仪器方法及酶联 免疫方法。微生物法被用于大量样品的初步筛选，仪器方法常用于对阳性样品的确证， ELISA方法既可以定性也可以半定量。在这些残留分析方法中，仪器方法由于其所需仪器昂 贵、操作复杂、检测费用高，而不利于大批量样品的筛选及现场检测。微生物法虽在残留筛 选高通量上表现出良好的性能，但方法缺乏特异性，不能确证残留物的种类，且所用细菌对 不同种类的抗菌药物敏感性存在差异，易导致假阴性和假阳性结果的产生。而ELISA方法 操作简便、高通量、高灵敏度、低费用，能很好的克服仪器方法和微生物方法的缺陷。 但目前，针对喹噁啉类代谢物的检测方法鲜有报道，所以，建立一种特异性较好、 灵敏度较高的单克隆抗体以检测动物体内或肉类食物中乙酰甲喹和喹乙醇代谢产物的残 留显得十分必要。【专利技术内容】 本专利技术的第一个目的是提供一种能同时识别乙酰甲喹和喹乙醇代谢产物的单克 隆抗体； 本专利技术的第二个目的是利用该单克隆抗体，制备一种用于乙酰甲喹和喹乙醇代谢 产物检测的酶联免疫试剂盒。 本专利技术的第三个目的是利用该试剂盒，建立一种能用于乙酰甲喹和喹乙醇代谢产 物非诊断目的检测的酶联免疫方法。 本专利技术通过以下技术方案实现： -种能识别乙酰甲喹和喹乙醇代谢产物的单克隆抗体，它是由保藏号为CCTCC N0:C201496的杂交瘤细胞株DMEQ1A3所分泌的。 上述杂交瘤细胞株DMEQ1A3,保藏在位于湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培 养物保藏中心（CCTCC)，其保藏号为CCTCCNO:C201496。 所用的免疫原是由结构如式⑵所示的化合物（羧基-脱二氧喹赛多， COOH-DCYX)和人血清白蛋白偶联制备的。【主权项】1. 一种能识别乙酰甲喹和喹乙醇代谢产物的单克隆抗体，它是由保藏号为CCTCC N0:C201496的杂交瘤细胞株DMEQ1A3所分泌的，所述乙酰甲喹和喹乙醇代谢产物是脱二氧 乙酰甲喹、脱二氧喹乙醇。2. -株杂交瘤细胞株DMEQ1A3,保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏号为CCTCC NO:C201496,所述杂交瘤细胞株DMEQ1A3分泌的单克隆抗体能识别乙酰甲喹和喹乙醇代谢 产物，所述乙酰甲喹和喹乙醇代谢产物是脱二氧乙酰甲喹、脱二氧喹乙醇。3. 权利要求1所述的单克隆抗体在制备检测乙酰甲喹和喹乙醇代谢产物的酶联免疫 试剂盒中的应用。4. 包含权利要求1所述的单克隆抗体的试剂盒。5. 根据权利要求4所述的试剂盒，该试剂盒是检测乙酰甲喹和喹乙醇代谢产物的酶联 免疫试剂盒。6. 权利要求4或5所述的试剂盒在乙酰甲喹和喹乙醇代谢产物非诊断目的检测中的应 用。7. -种用于检测肉类食物中乙酰甲喹和喹乙醇代谢产物残留的酶联免疫方法，其特征 在于包括以下步骤： (1) 将结构如式（1)所示的化合物与卵清白蛋白偶联得到包被原； (2) 用保藏号为CCTCCN0:C201496的杂交瘤细胞株DMEQ1A3制备单克隆抗体； (3) 用步骤（1)的包被原包被固相载体； (4) 将待测样品提取后进行酶联免疫检测，8. 根据权利要求7所述的用于检测肉类食物中乙酰甲喹和喹乙醇代谢产物残留的 酶联免疫方法，其特征在于：所述待测样品的提取方法是：将待测样品用体积比为乙酸乙 酯：乙腈=1 : 1的混合溶剂振荡提取，再加入lmol/L的NaOH，静置，取有机层用氮气吹 干，加入稀释液离心后取上清， 所述稀释液的成分为：NaCl8.Og，KH2P040. 2g，Na2HP04 ? 12H20 2. 9g，KC1 0? 2g，Tween200. 5mL，加双蒸水至lOOOmL，调节pH至 7. 4〇【专利摘要】本专利技术公开了一种能识别乙酰甲喹和喹乙醇代谢产物的特异性单克隆抗体和一种用于检测乙酰甲喹和喹乙醇代谢产物的酶联免疫方法及试剂盒，本专利技术的单克隆抗体是由保藏号为CCTCC？NO:C201496的杂交瘤细胞株DMEQ1A3所分泌的。与现有技术相比，本专利技术制备的单克隆抗体可以同时识别脱二氧乙酰甲喹和脱二氧喹乙醇，具有较高的灵敏度和特异性。本专利技术建立的ELISA方法和试剂盒能同时检测乙酰甲喹和喹乙醇代谢产物在肉类食品中的残留，具有检测效率和灵敏度高，精密度和准确度好等优点。CCTCC NO:C20149620140520【IPC分类】C07K16-44, G01N33-577, G01N33-543, C12N5-20【公开号】CN104558185【申请号】CN201410830096【专利技术人】袁宗辉, 何秀平, 彭大鹏, 潘源虎, 王玉莲, 陈冬梅, 陶燕飞, 刘振利 【申请人】华中农业大学【公开日】2015年4月29日【申请日】2014年12月26日本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种能识别乙酰甲喹和喹乙醇代谢产物的单克隆抗体，它是由保藏号为CCTCC NO:C201496的杂交瘤细胞株DMEQ1A3所分泌的，所述乙酰甲喹和喹乙醇代谢产物是脱二氧乙酰甲喹、脱二氧喹乙醇。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：袁宗辉，何秀平，彭大鹏，潘源虎，王玉莲，陈冬梅，陶燕飞，刘振利，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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