本发明专利技术涉及一种毛细管电泳检测酚酸和/或丹参酮类成分的方法，可实现对丹参药材和生物体液中不同酚酸和丹参酮成分的毛细管电泳分离，毛细管柱中填充缓冲溶液，所述缓冲溶液的成分为：石墨化多壁碳纳米管的终浓度为3～9μg/mL、十二烷基硫酸钠B的浓度20～50mmol/L、异丙醇体积分数7.5％-15％、硼砂5～20mmol/L、pH值为7～9，其中石墨化多壁碳纳米管以碳纳米管分散液的形式加入，对样品进行毛细管电泳检测，并根据对照品的标准曲线计算得到样品中酚酸和丹参酮成分的含量。本发明专利技术首次将表面活性剂功能化的石墨化多壁碳纳米管作为新型固定相加入到溶液中，形成稳定性好、分散均匀的缓冲溶液，对酚酸和丹参酮成分能起到很好的分离效果，在丹参药材和生物体液检测方面取得了显著的效果。
【技术实现步骤摘要】
一种毛细管电泳检测酚酸和/或丹参酮类成分的方法
本专利技术涉及一种毛细管电泳新型固定相，可实现对丹参药材和生物体液中不同酚酸和丹参酮成分的电泳分离，属于分析检测
技术介绍
毛细管电泳(CE)是一类以高压直流电场为驱动力,以毛细管为分离通道,根据样品组分之间分配容量和电泳淌度的差异,进行分离的一种新型液相分离技术，其应用已经涉及到环境检测、医药检测和生命科学等诸多领域。毛细管电动色谱中的固定相种类繁多，主要是用表面活性剂形成的胶束和微乳缓冲溶液。近几年来以纳米材料，尤其是碳纳米管涂层的新型固定相的应用越来越广泛，这主要是利用这些材料大的比表面积和较强的选择性吸附功能。碳纳米管，又名巴基管，是一种具有特殊结构的量子材料。碳纳米管主要由呈六边形结构排列的碳原子构成一层到数层的同轴圆管。因此按照层数不同可分为：单壁碳纳米管和多壁碳纳米管；与单壁碳纳米管相比，多壁管在开始形成的时候，层与层之间很容易成为陷阱中心而捕获各种缺陷，因而多壁管的管壁上通常布满小洞样的缺陷。而石墨化多壁碳纳米管是通过多壁碳管在高温炭化炉碳化过的，它的缺陷相对较少，且具有高度的石墨晶型、优异的导电性和耐腐蚀性，因此，用石墨化多壁碳纳米管作为新型固定相分离目标物质具有很大的应用潜力。丹参(SalviamiltiorrhizaBunge)为双子叶植物唇形科鼠尾草属多年生直立草本植物，，是一种常用的中药材，《名医别录》中又名“赤参”。现代研究表明，丹参中的主要成分包括水溶性成分(酚酸类)和脂溶性成分(丹参酮类)两大类。丹参以根供药用，味苦，性微寒。具有祛瘀止痛、活血调经、清心除烦、消肿止痛等功效，还可用于治疗月经不调、痛经、失眠、神经衰弱等症状。目前全国各地均有人工栽培，且主产于山东、浙江、安徽等地。最新临床研究还发现丹参有扩张血管与增进冠状动脉血流量的作用，可用来治疗心肌梗塞、心绞痛、冠心病等症，有显著的疗效；因此，丹参已成为现代医药领域的重要研究对象之一。基于上述背景，有效检测丹参中各种酚酸和丹参酮成分将有助于丹参分析工作的开展。目前，已有较多文献报导对丹参中各种酚酸和丹参酮成分的检测，但检测的方法和使用的固定相较为单一，主要是以液相色谱作为主要的检测体系，但其成本较高，需要各种色谱柱，流动相消耗大且有毒性的居多。鉴于上述问题，本专利技术提供了一种制备简单、易于应用的毛细管电泳新型固定相，并在固定相中创新使用石墨化多壁碳纳米管分散液；同时，本专利技术在丹参药材和生物体液检测方面取得了显著的效果。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种制备简单、易于应用的毛细管电泳新型固定相。该固定相可以针对现有固定相的不足，通过物质与纳米管表面的相互作用，增大化合物的色谱分辨率；同时，本专利技术优先使用化学性质稳定的石墨化多壁碳纳米管，并在丹参药材和生物体液检测方面取得了显著的效果。本专利技术采用的技术方案是：一种毛细管电泳检测酚酸和/或丹参酮类成分的方法，所述酚酸和/或丹参酮类成分是指酚酸类成分或丹参酮类成分中的一种或两种以上，所述酚酸类成分为香草酸、迷迭香酸、丹参素钠、丹酚酸A、丹酚酸C、咖啡酸、原儿茶酸、丹酚酸B，所述丹参酮类成分为二氢丹参酮、丹参酮IIA，所述方法包括以下步骤：(1)配制碳纳米管分散液，所述碳纳米管分散液的成分为：40μg/mL石墨化多壁碳纳米管，17.5mmol/L十二烷基硫酸钠A、体积分数10％正丁醇，以水为溶剂；取碳纳米管分散液、十二烷基硫酸钠B、异丙醇和硼砂配制缓冲溶液，使缓冲溶液中石墨化多壁碳纳米管的终浓度为3～9μg/mL、十二烷基硫酸钠B的浓度20～50mmol/L、异丙醇体积分数7.5％-15％、硼砂5～20mmol/L、pH值为7～9，以水为溶剂，配制时将上述混合液于25～30℃下超声5～10分钟，过滤、制得缓冲溶液；(2)取含有酚酸和/或丹参酮类成分的待测样液150μL至1.5mL离心管中，再加150μL甲醇和200μL空白缓冲溶液，涡旋3秒，滤过，取续滤液作为样品液进样，进行毛细管电泳检测，毛细管柱中填充步骤(1)制得的缓冲溶液；二极管阵列检测器检测，检测波长205nm，得到样品液的毛细管电泳色谱图；所述空白缓冲溶液的成分为：十二烷基硫酸钠30mmol/L、异丙醇体积分数10％、硼砂10mmol/L、pH值为8，25～30℃下超声5～10分钟，过滤、制得空白缓冲溶液；(3)以丹酚酸B的对照品配制不同浓度的对照品溶液，按照步骤(2)相同条件电泳条件进行毛细管电泳色谱检测，获得丹酚酸B对照品的毛细管电泳色谱图，以丹酚酸B对照品的浓度为横坐标，以丹酚酸B对照品溶液的毛细管电泳色谱图中色谱峰的峰面积为纵坐标制作丹酚酸B标准曲线，按同样方法制作香草酸标准曲线、迷迭香酸标准曲线、丹参素钠标准曲线、丹酚酸A标准曲线、丹酚酸C标准曲线、咖啡酸标准曲线、二氢丹参酮标准曲线、丹参酮IIA标准曲线、原儿茶酸标准曲线；根据样品液的毛细管电泳色谱图中相应色谱峰的峰面积及各成分的标准曲线计算样品液中香草酸、迷迭香酸、丹参素钠、丹酚酸A、丹酚酸C、咖啡酸、二氢丹参酮、丹参酮IIA、原儿茶酸、丹酚酸B含量，根据稀释比例相应换算得到待测样液中香草酸、迷迭香酸、丹参素钠、丹酚酸A、丹酚酸C、咖啡酸、二氢丹参酮、丹参酮IIA、原儿茶酸、丹酚酸B含量。所述步骤(1)中缓冲溶液的成分中，石墨化多壁碳纳米管的浓度优选6μg/mL。所述缓冲溶液的pH值为7～9，优选为8。所述配制缓冲溶液时，十二烷基硫酸钠A和B用于区分不同步骤中加入的十二烷基硫酸钠，A、B不具有化学意义。十二烷基硫酸钠A用于配制碳纳米管分散液，十二烷基硫酸钠B是在配制缓冲溶液时新加入的，十二烷基硫酸钠B的浓度优选30mmol/L。所述缓冲溶液中异丙醇的体积分数优选10％。所述缓冲溶液中硼砂的浓度优选10mmol/L的硼砂。所述缓冲溶液的pH值为7～9，优选为8。进一步，优选所述缓冲溶液的成分为：石墨化多壁碳纳米管6μg/mL、十二烷基硫酸钠B30mmol/L、异丙醇体积分数10％、硼砂10mmol/L、pH值为8。所述步骤(1)或步骤(2)中，所述过滤优选用0.22μm规格的有机膜过滤。所述步骤(2)中，所述毛细管电泳的参数为分离电压21～30KV，优选为30KV；柱温为25～40℃，优选为35℃。优选毛细管电泳的参数为分离电压30KV，柱温：35℃。所述毛细管电泳可采用常规毛细管电泳设备，使用未涂层熔融石英毛细管柱，进样可采用压力进样或电压进样。本专利技术所述石墨化多壁碳纳米管可于市场上直接购买获得。本专利技术检测含有酚酸和/或丹参酮类成分的待测样液，是指待测样液中含有酚酸类成分或丹参酮类成分中的一种或两种以上。只要含有上述成分的样液均可用本专利技术方案检测。具体的，可用本专利技术方法检测丹参药材中酚酸和/或丹参酮类成分的含量，可将丹参药材用醇溶剂提取得到丹参提取液，检测丹参提取液中酚酸和/或丹参酮类成分的含量，然后换算得到丹参药材中酚酸和/或丹参酮类成分的含量。本专利技术方法也可用于检测生物样本如鼠尿中酚酸和/或丹参酮类成分的含量。本专利技术的优点在于：1.本专利技术方法创意新颖，思路巧妙。首次将表面活性剂功能化的石墨化多壁碳纳米管作为新型固定相加入到溶液中，形成稳定性好、分散均匀的缓冲溶液，对酚酸和丹参酮成分能本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种毛细管电泳检测酚酸和/或丹参酮类成分的方法，所述酚酸和/或丹参酮类成分是指酚酸类成分或丹参酮类成分中的一种或两种以上，所述酚酸类成分为香草酸、迷迭香酸、丹参素钠、丹酚酸A、丹酚酸C、咖啡酸、原儿茶酸、丹酚酸B，所述丹参酮类成分为二氢丹参酮、丹参酮IIA，其特征在于所述方法包括以下步骤：(1)配制碳纳米管分散液，所述碳纳米管分散液的成分为：40μg/mL石墨化多壁碳纳米管，17.5mmol/L十二烷基硫酸钠A、体积分数10％正丁醇，以水为溶剂；取碳纳米管分散液、十二烷基硫酸钠B、异丙醇和硼砂配制缓冲溶液，使缓冲溶液中石墨化多壁碳纳米管的终浓度为3～9μg/mL、十二烷基硫酸钠B的浓度20～50mmol/L、异丙醇体积分数7.5％‑15％、硼砂5～20mmol/L、pH值为7～9，以水为溶剂，配制时将上述混合液于25～30℃下超声5～10分钟，过滤、制得缓冲溶液；(2)取含有酚酸和/或丹参酮类成分的待测样液150μL至1.5mL离心管中，再加150μL甲醇和200μL空白缓冲溶液，涡旋3秒，滤过，取续滤液作为样品液进样，进行毛细管电泳检测，毛细管柱中填充步骤(1)制得的缓冲溶液；二极管阵列检测器检测，检测波长205nm，得到样品液的毛细管电泳色谱图；所述空白缓冲溶液的成分为：十二烷基硫酸钠30mmol/L、异丙醇体积分数10％、硼砂10mmol/L、pH值为8，25～30℃下超声5～10分钟，过滤、制得空白缓冲溶液；(3)以丹酚酸B的对照品配制不同浓度的对照品溶液，按照步骤(2)相同条件电泳条件进行毛细管电泳色谱检测，获得丹酚酸B对照品的毛细管电泳色谱图，以丹酚酸B对照品的浓度为横坐标，以丹酚酸B对照品溶液的毛细管电泳色谱图中色谱峰的峰面积为纵坐标制作丹酚酸B标准曲线，按同样方法制作香草酸标准曲线、迷迭香酸标准曲线、丹参素钠标准曲线、丹酚酸A标准曲线、丹酚酸C标准曲线、咖啡酸标准曲线、二氢丹参酮标准曲线、丹参酮IIA标准曲线、原儿茶酸标准曲线；根据样品液的毛细管电泳色谱图中相应色谱峰的峰面积及各成分的标准曲线计算样品液中香草酸、迷迭香酸、丹参素钠、丹酚酸A、丹酚酸C、咖啡酸、二氢丹参酮、丹参酮IIA、原儿茶酸、丹酚酸B含量，根据稀释比例相应换算得到待测样液中香草酸、迷迭香酸、丹参素钠、丹酚酸A、丹酚酸C、咖啡酸、二氢丹参酮、丹参酮IIA、原儿茶酸、丹酚酸B含量。...
【技术特征摘要】
1.一种毛细管电泳检测酚酸和/或丹参酮类成分的方法，所述酚酸和/或丹参酮类成分是指酚酸类成分或丹参酮类成分中的一种或两种以上，所述酚酸类成分为香草酸、迷迭香酸、丹参素钠、丹酚酸A、丹酚酸C、咖啡酸、原儿茶酸、丹酚酸B，所述丹参酮类成分为二氢丹参酮、丹参酮IIA，其特征在于所述方法包括以下步骤：(1)配制碳纳米管分散液，所述碳纳米管分散液的成分为：40μg/mL石墨化多壁碳纳米管，17.5mmol/L十二烷基硫酸钠A、体积分数10％正丁醇，以水为溶剂；取碳纳米管分散液、十二烷基硫酸钠B、异丙醇和硼砂配制缓冲溶液，使缓冲溶液中石墨化多壁碳纳米管的终浓度为3～9μg/mL、十二烷基硫酸钠B的浓度20～50mmol/L、异丙醇体积分数7.5％-15％、硼砂5～20mmol/L、pH值为7～9，以水为溶剂，配制时将上述混合液于25～30℃下超声5～10分钟，过滤、制得缓冲溶液；(2)取含有酚酸和/或丹参酮类成分的待测样液150μL至1.5mL离心管中，再加150μL甲醇和200μL空白缓冲溶液，涡旋3秒，滤过，取续滤液作为样品液进样，进行毛细管电泳检测，毛细管柱中填充步骤(1)制得的缓冲溶液；二极管阵列检测器检测，检测波长205nm，得到样品液的毛细管电泳色谱图；所述空白缓冲溶液的成分为：十二烷基硫酸钠30mmol/L、异丙醇体积分数10％、硼砂10mmol/L、pH值为8，25～30℃下超声5～10分钟，过滤、制得空白缓冲溶液；(3)以丹酚酸B的对照品配制不同浓度的对照品溶液，按照步骤(2)相同条件电泳条件进行毛细管电泳色谱检测，获得丹酚酸B对照品的毛细管电泳色谱图，以丹酚酸B对照品的浓度为横坐标，以丹酚酸B对照品溶液的毛细管电泳色谱图中色谱峰的峰面积为纵坐标制作丹酚酸B标准曲线，按同样方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：曹君，曹婉，刘训高，胡帅帅，庞潇卿，
申请(专利权)人：杭州师范大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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