本发明专利技术涉及一种大花萱草叶片组织培养的方法，其具体步骤为，以大花萱草露地生长的幼嫩内层叶片为外植体，经过消毒处理，接种于诱导培养基中诱导形成愈伤组织，经愈伤组织分化增殖、芽诱导和生根诱导，形成大花萱草完整小苗，将大花萱草小苗移栽到基质中，长成正常的大花萱草植株。本发明专利技术应用萱草叶片进行组织培养，克服了萱草只能在花期采用花部器官进行组织培养扩繁的限制，可实现周年繁殖，有利于进行良种快繁，丰富园林应用中萱草的种类。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物组织培养领域，具体涉及露地生长的大花萱草幼嫩叶片组织培养 扩繁的方法。
技术介绍
大花萱草为萱草科萱草属多年生草本，是重要的宿根花丼，中国的萱草种质资源 十分丰富，世界上发现该属共有14个种，中国就有11个种大花萱草。在野生萱草种质的基 础上，经过人工杂交选育的大花萱草园艺栽培品种群，目前已经登陆的品种有8万多种。大 花萱草叶翠绿狭长基生，呈带状排成两列，具纺锤状肉质根及须根。茎短根状，花苔从中部 抽出，螺旋状聚伞花序，每个花絮可着花数十朵。花蕾似簪，开如漏斗，裂片翻卷，为百合形 花冠，花瓣先端裂开。花被基部合生，呈筒状，雄蕊6枚，3长3短，花药呈丁字形背着在花丝 顶端，花径变化大，花形各异，花期主要在夏季。 大花萱草是一种优良的园林作物。但是目前在园林应用中大花萱草的品种较少， 主要原因是受繁殖的影响。园林应用中的大花萱草主要是通过组织培养方式来实现繁殖， 组织培养常用的外植体有花葶、花瓣，子房、茎尖等，因此繁殖只能在花期，限制了新品种和 优良品种的培育。而叶片取材不受花期影响，可以实现组织培养外植体取材时间的周年性， 达到组培快繁的目的。因此如果可以用露地栽培的叶片作为外植体进行大花萱草的组织培 养，实现萱草组织培养外植体取材时间的周年性，则有利于实现良种快繁，大大丰富园林中 大花萱草的种类。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，针对现有技术的不足，提供一种利用大花萱草叶片进行组织 培养快速繁苗的方法，实现萱草组织培养外植体取材时间的周年性。 为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案： 1)外植体的选择和消毒处理； 2)愈伤组织的诱导：将消毒后的外植体接种到诱导培养基中，至形成愈伤组织， 所述诱导培养基的配方为：MS培养基中添加0. 1-0. 2mg/LNAA、1.Omg/L6-苄氨基嘌呤； 3)芽诱导：将所述愈伤组织接种到幼芽培养基中，培养至获得大花萱草的再生 苗，所述幼芽培养基的配方为：MS培养基中添加0. 1-0. 2mg/LNAA、1.Omg/L6-苄氨基嘌 呤； 4)生根培养：将所述再生苗转入生根培养基中，至再生苗基部出现白色短根并长 出完整根系，得到大花萱草小苗，所述生根培养基的配方为：1/2MS培养基中添加0.lmg/L 萘乙酸、3%蔗糖、0.6%琼脂，所述1/2MS培养基为将MS培养基中的大量元素浓度减半； 5)植株移栽：将所述大花萱草小苗栽到栽培基质中，温室炼苗，获得大花萱草幼 苗。 本专利技术中，所述外植体的选择具体为，选，择抽出新叶数量较多的大花萱草单株， 截取茎尖以上叶龄较一致的幼嫩叶片即为所需的外植体，所述新叶为叶龄小于12天的叶 子。 本专利技术中，所述消毒处理具体为，将外植体用流水冲洗3-5分钟，再用70%酒精表 面灭菌20-30s，无菌水冲洗3-4次，然后用2 %的NaClO浸泡l〇-15min，再用无菌水冲洗5-6 次。 本专利技术中，所述愈伤组织的诱导的的步骤为：在超净工作台中将处理后的外植体 用镊子撕成小方块，近轴面朝上接种于诱导培养基内；接种后在温度23-27°C，黑暗条件下 培养。 本专利技术中，所述芽诱导的培养条件为：温度25°C，光照强度2000-30001X，光照时 间 12h/d〇 本专利技术中，所述生根培养的条件为：温度25°C，光照强度2000-30001x，光照时间 12h/d下培养。 本专利技术中，所述大花萱草小苗是指完成了芽和根的分化，可以独立进行自养生长 的幼小植株。 进一步的，提供本专利技术中萱草组织培养更具体的步骤如下： 1)外植体的选择和消毒处理：选择抽出新叶数量较多的大花萱草单株，截取茎尖 以上叶龄较一致的幼嫩叶片，尽量保证外植体的一致性，将外植体以流水冲洗3-5分钟，再 用70 %酒精表面灭菌20-30s，无菌水冲洗三次，然后用2 %的NaClO浸泡10-15min，再用无 菌水冲洗5-6次； 2)愈伤组织的诱导：在超净工作台中将步骤1)中处理后的叶片用镊子撕成 IcmXIcm大小的长方块，近轴面朝上接种于诱导培养基上，诱导培养基的配方为MS培养基 中添加MS培养基中添加0. 1-0. 2mg/LNAA、1.0mg/L6-苄氨基嘌呤，接种后在温度25°C，黑 暗条件下至叶片边缘出现愈伤组织； 3)芽诱导：将步骤2)中得到的愈伤组织接种到幼芽培养基中，幼芽培养基的配方 为MS培养基中添加0. 1-0. 2mg/LNAA、1.0mg/L6-苄氨基嘌呤，接种后在温度25°C，光照强 度2000-30001X，光照时间12h/d下培养，至愈伤组织发芽，获得大花萱草的再生苗； 4)生根培养：将步骤3)中得到的萱草小苗转入生根培养基中，生根培养基的配 方为1/2MS培养基中添加0.lmg/L萘乙酸、3%蔗糖、0.6%琼脂，在温度25°C，光照强度 2000-30001x，光照时间12h/d下培养，培养至小苗基部出现白色短根并长出完整根系； 5)植株移栽：将步骤4)中得到的生根完整大花萱草小苗栽到珍珠岩与草炭1:1 的基质中，温室炼苗，获得正常的大花萱草幼苗。 本专利技术利用萱草叶片进行组织培养实现快速繁殖，具有以下两个方面的意义：（1) 萱草属植物主要以分生繁殖为主，繁殖系数低，繁殖所需时间长，不利于大花萱草的繁和良 种的培养。组织培养时间短，增值频率高，可提高大花萱草的繁殖效率。（2)以露地生长的 大花萱草幼嫩叶片作为外植体取材，不受花期取材时间的限制，延长了外植体取材时间，有 利于大花萱草的应用和推广。【附图说明】 图1 :萱草新品种"红三角"愈伤组织培养图片； 图2 :萱草新品种"红三角"芽诱导图片； 图3 :萱草新品种"红三角"生根图片； 图4:野生萱草（Hemerocallisfulva)愈伤组织培养图片； 图5:野生萱草（Hemerocallisfulva)芽诱导图片；图 6:野生萱草（Hemerocallisfulva)生根图片；【具体实施方式】 以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。 实施例1大花萱草叶片组织培养 本实施例选择萱草新品种"红三角"进行叶片组织培养。 1)外植体的选择和消毒处理：选择抽出新叶数量较多的大花萱草单株，从中选出 叶龄9-10天的新叶，截取茎尖以上部位的幼嫩叶片，尽量保证外植体的一致性。将外植体 以流水冲洗3-5分钟，再用70 %酒精表面灭菌30s，无菌水冲洗三次，然后用2 %的NaClO浸 泡l〇-15min，再用无菌水冲洗5-6次。 2)愈伤组织的诱导：在超净工作台中将步骤1)中处理后的叶片用镊子撕成 IcmXIcm大小的长方块，近轴面朝上平铺于诱导培养基上，诱导培养基的配方为MS培养基 中添加0.lmg/LNAA、1.0mg/L6-节氨基嗓呤。接种后在温度25°C，黑暗条件下培养18天后 叶片边缘出现愈伤组织（如图1)。 3)芽诱导：将步骤2)中得到的愈伤组织接种到幼芽培养基中，幼芽培养基的 配方为MS培养基中添加0.lmg/LNAA、1.0mg/L6-苄氨基嘌呤，在温度25°C，光照强度 2000-3当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种大花萱草叶片组织培养的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：1)外植体的选择和消毒处理；2)愈伤组织的诱导：将消毒后的外植体接种到诱导培养基中，至形成愈伤组织，所述诱导培养基的配方为：MS培养基中添加0.1‑0.2mg/L NAA、1.0mg/L 6‑苄氨基嘌呤；3)芽诱导：将所述愈伤组织接种到幼芽培养基中，培养至愈伤组织出芽，形成再生苗；所述幼芽培养基的配方为：MS培养基中添加0.1‑0.2mg/L NAA、1.0mg/L 6‑苄氨基嘌呤；4)生根培养：将所述再生苗转入生根培养基中，至再生苗基部出现白色短根并长出完整根系，得到大花萱草小苗，所述生根培养基的配方为：1/2MS培养基中添加0.1mg/L萘乙酸、3％蔗糖、0.6％琼脂，所述1/2MS培养基为将MS培养基中的大量元素浓度减半；5)植株移栽：将所述大花萱草小苗栽到栽培基质中，温室炼苗，获得大花萱草幼苗。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：高亦珂，朱琳，王叶，任毅，张启翔，王佳，程堂仁，
申请(专利权)人：北京林业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11
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