本发明专利技术公开了一种抗氯丙嗪、丙嗪、奋乃静等多种吩噻嗪类药物的特异性单克隆抗体和一种用于检测吩噻嗪类药物的酶联免疫方法及试剂盒。本发明专利技术的单克隆抗体由保藏号为CCTCC NO:201354的杂交瘤细胞3A5所分泌的。与现有技术相比，本发明专利技术制备的单克隆抗体可同时识别多种吩噻嗪类药物，本发明专利技术的酶联免疫方法及试剂盒具有检测效率和灵敏度高，精密度和准确度好等优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药物检测分析和免疫学
，具体涉及一种抗吩噻嗪类药物的单 克隆抗体，本专利技术还涉及用于检测吩噻嗪类药物的酶联免疫方法与试剂盒。
技术介绍
吩噻嗪类（Phenothiazines)是一类作用于中枢神经系统的药物，具有硫氮杂蒽 的母核结构，能阻断多巴胺能神经元D 2受体，具有镇静催眠、降低体温、催肥等作用。通常在 将生产食品动物运往屠宰场过程中使用，以减少压力。另外，该类药物常作为饲料添加剂， 能够提高动物的料肉比；其次还具有降低体温、镇吐等作用。因此，很多不法商贩随意添加 此类违禁药物或不遵守休药期，造成药物在可食性动物组织中残留。毒理学研究资料表明， 吩噻嗪类药物对人体神经系统、心血管系统、循环系统均可产生副作用，还可引起食用者产 生远期毒性作用及潜在的致癌、致畸、致突变作用。欧盟没有制定此类药物的最大残留限量 (MRL)，但禁止这类药物用于食品动物。我国农业部、卫生部、国家药品监督管理局于2002 年联合发布的《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》中明确指出：严禁氯丙嗪 在动物饲料和饮水中添加，允许治疗剂量，但在动物性食品中不得检出。 目前，吩噻嗪类药物残留的仪器分析法灵敏、准确、分离度高并且可进行多残留检 测的定性、定量，但需要昂贵的仪器、繁琐的前处理、熟练的专业操作员。免疫分析方法克服 了仪器分析方法的缺陷，尤其是ELISA方法操作简单、成本低、灵敏度高、只需要简单的仪 器，目前被广泛采用。 CN101358967公开了一种检测氯丙嗪的方法，它将乙酰丙嗪与盐酸羟氨反应 得到半抗原，所制备的单克隆抗体只能识别氯丙嗪，对吩噻嗪类其他药物均不识别。 CN103554056A公开了 一种吩噻嗪类药物半抗原，它是将2-氯吩噻嗪与溴乙酸钠反应 制备而成，得到的单克隆抗体能同时识别氯丙嗪、奋乃静、异丙嗪、氟奋乃静、乙酰丙嗪、 硫利达嗪6种吩噻嗪类药物，识别的种类仍不够多。Lowry P等（Lowry P.，Benchikh Μ.Ε.,Mcconnell R.I.,Tohill A.,Fitzgerald S.Ρ.Development of a highly sensitive, generic polyclonal antibody for the detection of phenothizines. Life sciences. 2010.)利用乙酰丙嗪与牛甲状腺蛋白偶联得到免疫原，所制备的多克隆抗 体对氯丙嗪、丙嗪和乙酰丙嗪有识别，但多克隆抗体变异性大、稳定性差。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是提供一种能同时识别多种吩噻嗪类药物的单克隆抗体； 本专利技术的第二个目的是利用该单克隆抗体，制备一种用于检测吩噻嗪类药物的酶 联免疫试剂盒。 本专利技术的第三个目的是利用该试剂盒，建立一种用于吩噻嗪类药物非诊断目的检 测的酶联免疫方法。 上述目的是通过以下技术方案实现的： -种抗吩噻嗪类药物的单克隆抗体，它是由保藏号为CCTCC NO:C201354的杂交瘤 细胞3A5所分泌的。 所述的吩噻嗪类药物，指的是氯丙嗪、丙嗪、乙酰丙嗪、硫利达嗪、三氟丙嗪、奋乃 静、氟奋乃静、氯普噻吨、丙酰丙嗪、异丙嗪。 所述杂交瘤细胞3A5保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC N0:C201354。 制备所述单克隆抗体所用的免疫原是由奋乃静与丁二酸酐反应生成的半抗原，与 人血清白蛋白（HSA)偶联制备的，所述半抗原的化学结构如式（I )所示。【主权项】1. 一种抗吩噻嗪类药物的单克隆抗体，它是由保藏号为CCTCC NO:C201354的杂交瘤 细胞3 A 5所分泌的，所述吩噻嗪类药物为氯丙嗪、丙嗪、乙酰丙嗪、硫利达嗪、三氟丙嗪、奋 乃静、氟奋乃静、氯普噻吨、丙酰丙嗪、异丙嗪。2. 权利要求1中所述的杂交瘤细胞3A5,保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为 CCTCC NO:C201354。3. 权利要求1所述的单克隆抗体在制备检测吩噻嗪类药物的酶联免疫试剂盒中的应 用。4. 包含权利要求1所述的单克隆抗体的试剂盒。5. 根据权利要求4所述的试剂盒，该试剂盒是检测吩噻嗪类药物的酶联免疫试剂盒。6. 权利要求4或5所述的试剂盒在吩噻嗪类药物非诊断目的检测中的应用。7. -种检测肉类产品中吩噻嗪类药物残留的酶联免疫方法，包括以下步骤： (1) 将奋乃静与丁二酸酐反应得到半抗原，所述半抗原的化学结构如式（I )所示； (2) 将所述半抗原与卵清蛋白偶联得到包被原； (3) 用保藏号为CCTCC NO:201354的杂交瘤细胞3A5制备单克隆抗体； (4) 用步骤（2)的包被原包被固相载体； (5) 将待测样品提取后进行酶联免疫检测，8. 根据权利要求7所述的检测肉类产品中吩噻嗪类药物残留的酶联免疫方法，其特征 在于：所述待测样品的提取方法是：将待测样品用体积比为乙腈：IM的HCl = 4 : 1的提 取液提取、离心，上清液与〇. IM NaOH溶液混合，然后再加入二氯甲烷，涡旋5min后，再次离 心，取二氯甲烷层，用氮气吹干并用PBST缓冲液重新溶解。【专利摘要】本专利技术公开了一种抗氯丙嗪、丙嗪、奋乃静等多种吩噻嗪类药物的特异性单克隆抗体和一种用于检测吩噻嗪类药物的酶联免疫方法及试剂盒。本专利技术的单克隆抗体由保藏号为CCTCC NO:201354的杂交瘤细胞3A5所分泌的。与现有技术相比，本专利技术制备的单克隆抗体可同时识别多种吩噻嗪类药物，本专利技术的酶联免疫方法及试剂盒具有检测效率和灵敏度高，精密度和准确度好等优点。CCTCC NO:C20135420130416【IPC分类】C12N5-20, C07K16-44, G01N33-577, G01N33-543【公开号】CN104530239【申请号】CN201410829599【专利技术人】袁宗辉, 彭大鹏, 王涓, 潘源虎, 王玉莲, 冯亮, 刘振利 【申请人】华中农业大学【公开日】2015年4月22日【申请日】2014年12月26日本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗吩噻嗪类药物的单克隆抗体，它是由保藏号为CCTCC NO:C201354的杂交瘤细胞3A5所分泌的，所述吩噻嗪类药物为氯丙嗪、丙嗪、乙酰丙嗪、硫利达嗪、三氟丙嗪、奋乃静、氟奋乃静、氯普噻吨、丙酰丙嗪、异丙嗪。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：袁宗辉，彭大鹏，王涓，潘源虎，王玉莲，冯亮，刘振利，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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