一种苹果花粉管微丝的标记方法技术

本发明专利技术公开了一种苹果花粉管微丝的标记方法，是将苹果花粉经过培养、固定、酶处理、表面活性剂处理和染料标记步骤后封片进行扫描成像。本发明专利技术的有益效果为：本发明专利技术在梨花粉微丝标记的方法基础之上结合裸子植物花粉管微丝的标记方法进行借鉴与改进，通过固定、酶解细胞壁、表面活性剂使染料更容易进入胞内，运用FITC-Phalloidin标记，避免了应用TRITC-Phalloidin由于酶解不充分导致细胞外壁自发荧光的干扰，可以得到保存相对完好的苹果花粉微丝，且具有高效、快速的特点，可以获得更加清晰、明亮的图片，填补了苹果花粉管微丝标记的空白，为蔷薇科乃至被子植物花粉管中微丝的标记提供参考，应用价值高。

【技术实现步骤摘要】
一种苹果花粉管微丝的标记方法
本专利技术涉及一种苹果花粉管微丝的标记方法。
技术介绍
目前国内外几乎没有对苹果花粉管中微丝进行标记的报道。花粉中微丝标记的技术主要有化学染色方法：将带有荧光染料的鬼笔环肽进行标记，其次冷冻固定结合显微注射和利用基因重组技术将绿色荧光蛋白基因转入活体花粉管中的方法进行观察，但目前多用化学染色的方法较简捷、高效。近几年在裸子植物松科花粉中微丝的研究相对较多，多采用Rhodamine-Phalloidin进行标记。在被子蔷薇科植物中，梨花粉管微丝的标记已有报道，标记过程中没有进行酶解花粉管壁、Triton去污通透的步骤可能是导致标记效果欠佳的原因。而在苹果花粉管中微丝标记稍显空白。
技术实现思路
本专利技术的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种苹果花粉管微丝的标记方法。为了实现上述目的，本专利技术提供的技术方案为：一种苹果花粉管微丝的标记方法，包括以下步骤：1）苹果花粉培养：将储存在-20℃的花粉取出回温，采用液体培养法，称取花粉10mg，悬浮于10ml培养基中，温度30℃，100rpm/min振荡暗培养，培养基组成为：20%蔗糖+0.015%CaCl2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种苹果花粉管微丝的标记方法，其特征在于，包括以下步骤：1）苹果花粉培养：将储存在‑20℃的花粉取出回温，采用液体培养法，称取花粉10mg，悬浮于10ml培养基中，温度30℃，100rpm/min振荡暗培养，培养基组成为：20%蔗糖+0.015%CaCl2+0.01%H3BO3；2）固定：用含有质量百分含量为4%的多聚甲醛洗步骤1）得到的培养好的苹果花粉两次，固定1.5h，同时真空抽气10‑15min，得到固定后花粉，所述4%的多聚甲醛是用pH值为6.9的50mM PIPES缓冲液配置的；3）酶处理：将步骤2）得到的固定后花粉以50mM的PIPES缓冲液洗涤三次，再将洗涤后的花粉置于含有质量百...

【技术特征摘要】
1.一种苹果花粉管微丝的标记方法，其特征在于，包括以下步骤：1）苹果花粉培养：将储存在-20℃的花粉取出回温，采用液体培养法，称取花粉10mg，悬浮于10ml培养基中，温度30℃，100rpm/min振荡暗培养，培养基组成为：20%蔗糖+0.015%CaCl2+0.01%H3BO3；2）固定：用含有质量百分含量为4%的多聚甲醛洗步骤1）得到的培养好的苹果花粉两次，固定1.5h，同时真空抽气10-15min，得到固定后花粉，所述4%的多聚甲醛是用pH值为6.9的50mMPIPES缓冲液配置的；3）酶处理：将步骤2）得到的固定后花粉以50mM的PIPES缓冲液洗涤三次，再将洗涤后的花粉置于含有质量百分含量1%的果胶酶和质量百分含量1%的纤维素酶的50mMPIPES缓冲液中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：房克凤，秦岭，曹庆芹，郝敬虹，杨瑞，王建立，张卿，杨柳，
申请(专利权)人：北京农学院，
类型：发明
国别省市：北京;11