本发明专利技术涉及一种花叶紫娇花鳞茎组织培养的方法，属植物组织培养领域，包括如下步骤：培养基配制、外植体选取与消毒、鳞茎萌发、不定芽诱导及增殖、生根诱导、组培苗驯化及移栽。基本培养基为MS培养基，蔗糖25～30g/L，琼脂粉8～9g/L，培养基pH为5.6～5.8；鳞茎萌发培养基为MS+6-BA 0.1～0.5mg/L+NAA 0.1～0.2mg/L；不定芽诱导培养基为MS+6-BA 3.0～6.0mg/L+NAA 0.05～0.5mg/L；不定芽增殖培养基为MS+6-BA 0.5～2.0mg/L+NAA 0.05～0.2mg/L；生根培养基为MS+IBA 0.01～0.5mg/L或1/2MS+IBA 0.01～0.5mg/L；各阶段养条件为,培养温度25±2℃，光照时间为12～16h/d，光照强度为40～60μ·mol·m-2·s-1。本发明专利技术的优点：建立的花叶紫娇花快繁体系种苗繁殖速度快，健壮均匀，变异少，移栽成活率高，适合花叶紫娇花种苗规模化生产。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及，属植物组织培养领域，包括如下步骤：培养基配制、外植体选取与消毒、鳞茎萌发、不定芽诱导及增殖、生根诱导、组培苗驯化及移栽。基本培养基为MS培养基，蔗糖25～30g/L，琼脂粉8～9g/L，培养基pH为5.6～5.8；鳞茎萌发培养基为MS+6-BA 0.1～0.5mg/L+NAA 0.1～0.2mg/L；不定芽诱导培养基为MS+6-BA 3.0～6.0mg/L+NAA 0.05～0.5mg/L；不定芽增殖培养基为MS+6-BA 0.5～2.0mg/L+NAA 0.05～0.2mg/L；生根培养基为MS+IBA 0.01～0.5mg/L或1/2MS+IBA 0.01～0.5mg/L；各阶段养条件为,培养温度25±2℃，光照时间为12～16h/d，光照强度为40～60μ·mol·m-2·s-1。本专利技术的优点：建立的花叶紫娇花快繁体系种苗繁殖速度快，健壮均匀，变异少，移栽成活率高，适合花叶紫娇花种苗规模化生产。【专利说明】
本专利技术涉及植物组织培养技术，具体涉及。
技术介绍
紫娇花(Tulbaghia v1lacea)，别称野蒜、非洲小百合，属石蒜科多年生草本植物，球根花丼，株高30?50cm，具圆柱形小鳞莖。花莖高约40?60cm，顶生聚伞花序开粉紫色小花，花期长，实际栽培种常成片栽培，为优良的地被景观花丼，同时全株均有韭菜味，可食用。一般紫娇花叶片全绿，而本专利技术所用花叶紫娇花叶片全缘具有白色花边，可丰富紫娇花种植资源库，花与常规紫娇花同，但难结实，整个植株长势要弱于叶片全绿的紫娇花。 花叶紫娇花的传统繁殖与传统紫娇花相同，以鳞片扦插、分株增生等为主，但是该法繁殖效率低下，据孙磊等关于花叶紫娇花专利技术(CN101869026A)报道，利用分株繁殖技术，花叶紫娇花后代2年仅增殖I倍左右，对于种质资源较少时，难以在短时间内获得大量种苗。利用植物组织培养技术进行常规叶片全绿品种的紫娇花种苗快繁已有报道，祝志勇等(CN102144549B)利用花蕾为起始材料，通过愈伤诱导，然后在进行愈伤分化获得原球茎从而获得了紫娇花再生植株；陈建华(CN101869068B)等也取得了紫娇花组培快繁技术专利；另外，何月秋等(2010)研宄也以花蕾为起始材料，通过愈伤诱导途径获得了紫娇花的再生植株。而关于花叶紫娇花通过植物组培快繁手段直接获得增殖不定芽技术的报道，目前尚未见到。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术存在的不足，而提供。花叶紫娇花利用鳞茎诱导获得的无菌材料，通过直接诱导不定芽途径建立良好的花叶紫娇花组培再生体系，为花叶紫娇花优良种植扩繁、新品种培育等做好技术支持。 本专利技术的目的是通过如下技术方案来完成的。这种花叶紫娇花鳞茎组织培养的方法，该方法包括如下步骤: I)、外植体的选取及处理:从花叶紫娇根部将鳞茎连根切下，剪去上部叶片和下部根，保留鳞茎长度2?3cm，剥去外表面I层表皮； 2)、鳞茎萌发:在超净工作台上，将经过表面消毒的花叶紫娇花鳞茎在转移至无菌接种盘中，用无菌滤纸吸去种子表面水分，稍切去两端部分组织后将鳞茎接种于萌发培养基MS+6-BA 0.1?0.5mg/L+NAA 0.1?0.2mg/L中进行培养，培养温度25±2°C，光照时间为12?16h/d，光照强度为40?60 μ.mo I.m 2.s S 3)不定芽诱导:将获得的长出新叶，3?5cm高的无菌苗在无菌工作台上从鳞茎中间一分为二剖开后接种到不定芽诱导培养基MS+6-BA 3.0?6.0mg/L+NAA 0.05?0.5mg/L中，进行不定芽的诱导，培养温度25±2°C，光照时间为12?16h/d，光照强度为40?60 μ.mo I.m 2.s 1 ； 4)不定芽增殖:在无菌工作台上，将诱导获得的簇生、2?3cm高的不定芽从基部以2?3个连体不定芽为接种单位进行分离，接种于不定芽增殖培养基中增殖，不定芽增殖培养基为MS+6-BA 0.5?2.0mg/L+NAA 0.05?0.2mg/L，培养温度25±2°C，光照时间为12 ?16h/d，光照强度为 40 ?60 μ.mo I.m 2.s S 5)、不定芽生根诱导:在无菌工作台上，将高生长到3?4cm的丛生不定芽从基部切开成单个，接入生根培养基中进行不定根的诱导，生根培养基为MS+IBA 0.01?0.5mg/L或1/2MS+IBA 0.01?0.5mg/L，培养温度25±2°C，光照时间为12?16h/d，光照强度为40 ?60 μ.mo I.m 2.s 1 ； 6)、组培苗驯化及移栽:不定芽基部长出2?3条2?3cm的不定根后，将生根苗移至温室，散射光培养5d后打开瓶盖，再培养I?2d，将花叶紫娇花生根植株小心从培养瓶中取出，用自来水洗净组培苗表面的培养基，将花叶紫娇花组培苗，栽入基质中，保湿90 %以上培养15d，然后在温室中正常培养； 基本培养基选用MS培养基，蔗糖用量为25?30g/L，凝固剂为琼脂粉，用量为8?9g/L，培养基pH分装前调整为5.6?5.8 ;鳞茎萌发培养基为MS+6-BA 0.1?0.5mg/L+NAA 0.1 ?0.2mg/L ;不定芽诱导培养基为 MS+6-BA 3.0 ?6.0mg/L+NAA 0.05 ?0.5mg/L ;不定芽增殖培养基为MS+6-BA 0.5?2.0mg/L+NAA 0.05?0.2mg/L ;生根培养基为MS+IBA 0.01?0.5mg/L或1/2MS+IBA 0.01?0.5mg/L ;鳞茎萌发、不定芽诱导及增殖、不定芽生根培养条件为，培养温度25±2°C，光照时间为12?16h/d，光照强度为40?60 μ ^mol^m^sL 起始外植体的选择及处理、鳞茎萌发、不定芽诱导、不定芽增殖、生根诱导、移栽前驯化过程及移栽后保湿90%以上培养15d。 本专利技术的有益效果为: 1、通过组织培养技术进行花叶紫娇花种苗快繁，生产不受地区、季节、气候及母株生长年限的限制，便于工厂化育苗，可根据订单进行生产，生产时间及规模可控，为花叶紫娇花的推广应用提供充足的优质种苗保障。 2、繁殖系数达到2.5?3.0，生根率100%，移栽成活率100%，达到种苗工厂化育苗生产的要求。 3、本专利技术采用花叶紫娇花鳞茎直接诱导不定芽的增殖方式，无愈组织伤诱导及愈伤分化诱导环节，可极大减少植物组培过程中后代变异的发生，种苗可最大限度保持母本的优良性状。 4、有利于花叶紫娇花优良单株、新品种组培快繁体系建立借鉴、推广。 5、建立良好的组培快繁体系，为今后利用植物生物技术对花叶紫娇花进行新品种培育、遗传改良等研宄工作奠定基础。 【具体实施方式】 下面通过【具体实施方式】对本专利技术作进一步阐述，实施例将帮助更好地理解本专利技术，但本专利技术并不仅仅局限于下述实施例。 这种花叶紫娇花鳞茎组织培养的方法，该方法包括如下步骤: 1、培养基及培养条件:鳞茎萌发、不定芽诱导、不定芽增殖增殖、不定芽生根诱导基本培养基均为MS培养基，蔗糖用量为25?30g/L，凝固剂为琼脂粉，用量为8?9g/L，培养基pH分装前调整为5.6?5.8 ;鳞茎萌发培养基为MS+6-BA 0.1?0.5mg/L+NA本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种花叶紫娇花鳞茎组织培养的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：1)、外植体的选取及处理：从花叶紫娇根部将鳞茎连根切下，剪去上部叶片和下部根，保留鳞茎长度2～3cm，剥去外表面1层表皮；2)、鳞茎萌发：在超净工作台上，将经过表面消毒的花叶紫娇花鳞茎在转移至无菌接种盘中，用无菌滤纸吸去种子表面水分，稍切去两端部分组织后将鳞茎接种于萌发培养基MS+6‑BA 0.1～0.5mg/L+NAA 0.1～0.2mg/L中进行培养，培养温度25±2℃，光照时间为12～16h/d，光照强度为40～60μ·mol·m‑2·s‑1；3)不定芽诱导：将获得的长出新叶，3～5cm高的无菌苗在无菌工作台上从鳞茎中间一分为二剖开后接种到不定芽诱导培养基MS+6‑BA 3.0～6.0mg/L+NAA 0.05～0.5mg/L中，进行不定芽的诱导，培养温度25±2℃，光照时间为12～16h/d，光照强度为40～60μ·mol·m‑2·s‑1；4)不定芽增殖：在无菌工作台上，将诱导获得的簇生、2～3cm高的不定芽从基部以2～3个连体不定芽为接种单位进行分离，接种于不定芽增殖培养基中增殖，不定芽增殖培养基为MS+6‑BA 0.5～2.0mg/L+NAA 0.05～0.2mg/L，培养温度25±2℃，光照时间为12～16h/d，光照强度为40～60μ·mol·m‑2·s‑1；5)、不定芽生根诱导：在无菌工作台上，将高生长到3～4cm的丛生不定芽从基部切开成单个，接入生根培养基中进行不定根的诱导，生根培养基为MS+IBA 0.01～0.5mg/L或1/2MS+IBA 0.01～0.5mg/L，培养温度25±2℃，光照时间为12～16h/d，光照强度为40～60μ·mol·m‑2·s‑1；6)、组培苗驯化及移栽：不定芽基部长出2～3条2～3cm的不定根后，将生根苗移至温室，散射光培养5d后打开瓶盖，再培养1～2d，将花叶紫娇花生根植株小心从培养瓶中取出，用自来水洗净组培苗表面的培养基，将花叶紫娇花组培苗，栽入基质中，保湿90％以上培养15d，然后在温室中正常培养；基本培养基选用MS培养基，蔗糖用量为25～30g/L，凝固剂为琼脂粉，用量为8～9g/L，培养基pH分装前调整为5.6～5.8；鳞茎萌发培养基为MS+6‑BA 0.1～0.5mg/L+NAA 0.1～0.2mg/L；不定芽诱导培养基为MS+6‑BA 3.0～6.0mg/L+NAA 0.05～0.5mg/L；不定芽增殖培养基为MS+6‑BA 0.5～2.0mg/L+NAA 0.05～0.2mg/L；生根培养基为MS+IBA 0.01～0.5mg/L或1/2MS+IBA 0.01～0.5mg/L；鳞茎萌发、不定芽诱导及增殖、不定芽生根培养条件为,培养温度25±2℃，光照时间为12～16h/d，光照强度为40～60μ·mol·m‑2·s‑1。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：汪一婷，陈志，吕永平，牟豪杰，周迪江，陈剑平，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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