一种牛角瓜组织培养的方法技术

本发明专利技术涉及一种牛角瓜组织培养的方法，属植物组织培养领域，包括如下步骤：培养基配制、外植体选取与消毒、种子萌发、不定芽诱导及增殖、生根诱导、组培苗驯化及移栽。基本培养基为MS培养基，蔗糖25～30g/L，琼脂粉8～9g/L，PVP 0.1～0.5g/L，培养基pH为5.6～5.8；种子萌发培养基为MS或1/2MS；不定芽诱导培养基为MS+6-BA3.0～5.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L+PVP 0.1～0.5g/L；不定芽增殖培养基为MS+6-BA1.0～3.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L+PVP 0.1～0.5g/L；生根培养基为MS+IBA 0.01～0.5mg/L+PVP0.1～0.5g/L或1/2MS+IBA0.01～0.5mg/L+PVP 0.1～0.5g/L。培养条件为25±2℃，12～16h/d，40～60μ·mol·m-2·s-1。本发明专利技术的优点：建立的牛角瓜组培快繁技术体系种苗繁殖速度快，健壮均匀，变异少，移栽成活率高，适合优良牛角瓜品种种苗规模化生产。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及，属植物组织培养领域，包括如下步骤：培养基配制、外植体选取与消毒、种子萌发、不定芽诱导及增殖、生根诱导、组培苗驯化及移栽。基本培养基为MS培养基，蔗糖25～30g/L，琼脂粉8～9g/L，PVP 0.1～0.5g/L，培养基pH为5.6～5.8；种子萌发培养基为MS或1/2MS；不定芽诱导培养基为MS+6-BA3.0～5.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L+PVP 0.1～0.5g/L；不定芽增殖培养基为MS+6-BA1.0～3.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L+PVP 0.1～0.5g/L；生根培养基为MS+IBA 0.01～0.5mg/L+PVP0.1～0.5g/L或1/2MS+IBA0.01～0.5mg/L+PVP 0.1～0.5g/L。培养条件为25±2℃，12～16h/d，40～60μ·mol·m-2·s-1。本专利技术的优点：建立的牛角瓜组培快繁技术体系种苗繁殖速度快，健壮均匀，变异少，移栽成活率高，适合优良牛角瓜品种种苗规模化生产。【专利说明】
本专利技术涉及植物组织培养技术，具体涉及。
技术介绍
牛角瓜(Calotropisgigantea (Linn.)Dry.ex Ait.f)，别名断肠草、羊浸树、哮喘树、皇冠花等，为萝摩科牛角瓜属多年生草本植物，在亚洲、美洲、非洲均有分布，我国主要分布于两广、海南、福建、云南、四川等省区。牛角瓜耐旱、耐贫瘠能力强，常生于干旱或半干旱的旷野地，可作为干旱地带荒地、贫瘠地绿化先锋植物，而且生长迅速，每周生长最快约30厘米，植株可高达3m，可起到防风、保土、保水的功效，可作为贫瘠土地改良的先锋植物。 牛角瓜全身是宝，具有多种利用价值及广阔的市场前景。牛角瓜整个植株无论老嫩均可用作肥料；牛角瓜纤维可用于生产中高档针织产品、纸张及人造棉等，种毛可供制作丝绒原料，在纺织领域具有广阔的应用前景；牛角瓜的乳液中含有大量的碳氢化合物及某些烃类物质，与天然原油成分相近，I公顷的牛角瓜可提炼出一万多升的原油，也可用于提取生物农药制剂，乳液干燥后可供作黄色染料、树胶原料及鞣料等；此外牛角瓜还具有多种药用价值，其干叶具袪痰、止咳等功效；乳汁具抗炎、抗凝血、强心及驱虫等作用，树皮亦可用于治疗癞癣。 目前，牛角瓜栽培常用种子进行繁殖，但种子数量有限，同时由于生长环境限制，自然状态下，种子萌发率较低，无法同时获得大量优质种苗。植物组织培养是目前最有效的植物种苗快速繁殖的方法，目前关于牛角瓜组织培养研宄报道国内仅见李克烈等I篇，其主要是利用无菌萌发苗叶片为起始材料，通过先诱导愈伤再诱导愈伤分化的方式获得牛角瓜再生植株；国外仅见Ashis T.Roy等利用子叶、幼嫩叶片和茎段为起始材料，诱导出愈伤之后利用液体悬浮培养技术对愈伤进行扩繁，然后对扩繁愈伤进行分化诱导从而获得牛角瓜再生植株的研宄报道。在植物组培过程中，通过愈伤途径获得再生植株后代变异较高，后代品质差异较大，相对于通过诱导愈伤获得的植株再生途径，利用直接器官发生途径获得再生植株可极大降低组培过程中导致的变异发生，但是关于牛角瓜通过直接器官发生获得再生植株尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术存在的不足，而提供。本专利技术拟解牛角瓜利用种子无菌萌发获得的无菌材料，通过直接诱导不定芽途径建立良好的牛角瓜组培再生体系，为牛角瓜优良种植扩繁、新品种培育及遗传改良等做好技术支持。 本专利技术的目的是通过如下技术方案来完成的。这种牛角瓜组织培养的方法，该方法包括如下步骤: I)、外植体的选取及处理:选取牛角瓜种子作为起始材料，从牛角瓜果实中将种子取出，去除种子表面纤维之后经过浸种2h后，选择沉在容器底部的种子作为组培用外植体； 2)、种子萌发:在超净工作台上，将经过表面消毒的牛角瓜种子转移至无菌接种盘中，用无菌滤纸吸去外植体表面水分，接种于种子萌发培养基MS或1/2MS培养基中进行种子萌发，培养温度25±2°C，光照时间为12?16h/d，光照强度为40?60 μ ?mol.πι2.s S 3)不定芽诱导:在无菌工作台上，由种子萌发获得的无菌苗从腋芽下方每两个芽为一个单位切段，带芽茎段接种于不定芽诱导培养基进行不定芽的诱导，不定芽诱导培养基为 MS+6-BA 3.0 ?5.0mg/L+NAA 0.05 ?0.2mg/L+PVP 0.1 ?0.5g/L 中，进行不定芽的诱导，培养温度25±2°C，光照时间为12?16h/d，光照强度为40?60 μ.mo I.m 2.s S 4)不定芽增殖:在无菌工作台上，将诱导获得的I?2cm高的丛生不定芽从基部以2?3个连在一起的不定芽为一个接种单元分离，将分离材料接种于不定芽增殖培养基中增殖，不定芽增殖培养基为MS+6-BA 1.0?3.0mg/L+NAA 0.05?0.2mg/L+PVP 0.1?0.5g/L，培养温度25±2°C，光照时间为12?16h/d，光照强度为40?60 μ.moI.πΓ2.s—1; 5)、不定芽生根诱导:将高生长到3?4cm的丛生不定芽从基部单个分离，接入生根培养基中进行不定根的诱导，生根培养基为MS+IBA 0.01?0.5mg/L+PVP 0.1?0.5g/L 或 1/2MS+IBA 0.01 ?0.5mg/L+PVP 0.1 ?0.5g/L，培养温度 25±2°C，光照时间为 12 ?16h/d，光照强度为 40 ?60 μ.mo I.m 2.s S 6)、组培苗驯化及移栽:丛生不定芽基部长出4?6条2?3cm的不定根后，将生根苗移至温室，散射光培养3?5d后再打开瓶盖培养I?2d，将牛角瓜组培苗小心从培养瓶中连根取出，用自来水洗净组培苗表面的培养基，然后在通风阴凉处稍晾干组培苗表面水分后将牛角瓜组培苗，栽入基质中，保湿90%以上培养15d，然后在温室中正常培养； 种子萌发、不定芽诱导及增殖、不定芽生根诱导基本培养基均为MS培养基，蔗糖用量为25?40g/L，凝固剂为琼脂粉，用量为8?9g/L，PVP用量为0.1?0.5g/L，培养基PH分装前调整为5.6?5.8 ;种子萌发培养基为MS或1/2MS培养基；不定芽诱导培养基为 MS+6-BA3.0 ?5.0mg/L+NAA 0.05 ?0.2mg/L+PVP 0.1 ?0.5g/L ;不定芽增殖培养基为MS+6-BA1.0 ?3.0mg/L+NAA 0.05 ?0.2mg/L+PVP 0.1 ?0.5g/L ;生根培养基为 MS+IBA0.01 ?0.5mg/L+PVP 0.1 ?0.5g/L 或 1/2MS+IBA 0.01 ?0.5mg/L+PVP 0.1 ?0.5g/L ;种子萌发、不定芽诱导及增殖、不定芽生根培养条件为，培养温度25±2°C，光照时间为12?16h/d，光照强度为 40 ?60 μ.mo I.m 2.s、 起始外植体的选择及处理、种子萌发、不定芽诱导、不定芽增殖、生根诱导、移栽前驯化过程及移栽后保湿90%以上培养15d。 本专利技术的有益效果为: 1、通过组织培养技术进行牛角瓜种苗快繁，生产不受地区、季节、气候及母株生长年限的限制，便于工厂化育苗，可根据订单进行生产，生产时间及规模本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种牛角瓜组织培养的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：1)、外植体的选取及处理：选取牛角瓜种子作为起始材料，从牛角瓜果实中将种子取出，去除种子表面纤维之后经过浸种2h后，选择沉在容器底部的种子作为组培用外植体；2)、种子萌发：在超净工作台上，将经过表面消毒的牛角瓜种子转移至无菌接种盘中，用无菌滤纸吸去外植体表面水分，接种于种子萌发培养基MS或1/2MS培养基中进行种子萌发，培养温度25±2℃，光照时间为12～16h/d，光照强度为40～60μ·mol·m‑2·s‑1；3)不定芽诱导：在无菌工作台上，由种子萌发获得的无菌苗从腋芽下方每两个芽为一个单位切段，带芽茎段接种于不定芽诱导培养基进行不定芽的诱导，不定芽诱导培养基为MS+6‑BA 3.0～5.0mg/L+NAA 0.05～0.2mg/L+PVP 0.1～0.5g/L中，进行不定芽的诱导，培养温度25±2℃，光照时间为12～16h/d，光照强度为40～60μ·mol·m‑2·s‑1；4)不定芽增殖：在无菌工作台上，将诱导获得的1～2cm高的丛生不定芽从基部以2～3个连在一起的不定芽为一个接种单元分离，将分离材料接种于不定芽增殖培养基中增殖，不定芽增殖培养基为MS+6‑BA 1.0～3.0mg/L+NAA 0.05～0.2mg/L+PVP 0.1～0.5g/L，培养温度25±2℃，光照时间为12～16h/d，光照强度为40～60μ·mol·m‑2·s‑1；5)、不定芽生根诱导：将高生长到3～4cm的丛生不定芽从基部单个分离，接入生根培养基中进行不定根的诱导,生根培养基为MS+IBA 0.01～0.5mg/L+PVP 0.1～0.5g/L或1/2MS+IBA 0.01～0.5mg/L+PVP 0.1～0.5g/L，培养温度25±2℃，光照时间为12～16h/d，光照强度为40～60μ·mol·m‑2·s‑1；6)、组培苗驯化及移栽：丛生不定芽基部长出4～6条2～3cm的不定根后，将生根苗移至温室，散射光培养3～5d后再打开瓶盖培养1～2d，将牛角瓜组培苗小心从培养瓶中连根取出，用自来水洗净组培苗表面的培养基,然后在通风阴凉处稍晾干组培苗表面水分后将牛角瓜组培苗，栽入基质中，保湿90％以上培养15d，然后在温室中正常培养；种子萌发、不定芽诱导及增殖、不定芽生根诱导基本培养基均为MS培养基，蔗糖用量为25～40g/L，凝固剂为琼脂粉，用量为8～9g/L，PVP用量为0.1～0.5g/L，培养基pH分装前调整为5.6～5.8；种子萌发培养基为MS或1/2MS培养基；不定芽诱导培养基为MS+6‑BA 3.0～5.0mg/L+NAA 0.05～0.2mg/L+PVP 0.1～0.5g/L；不定芽增殖培养基为MS+6‑BA 1.0～3.0mg/L+NAA 0.05～0.2mg/L+PVP 0.1～0.5g/L；生根培养基为MS+IBA 0.01～0.5mg/L+PVP 0.1～0.5g/L或1/2MS+IBA 0.01～0.5mg/L+PVP 0.1～0.5g/L；种子萌发、不定芽诱导及增殖、不定芽生根培养条件为，培养温度25±2℃，光照时间为12～16h/d，光照强度为40～60μ·mol·m‑2·s‑1。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈志，吕永平，汪一婷，牟豪杰，周迪江，陈剑平，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33