本发明专利技术提供了一种既能主动靶向肿瘤细胞高表达的整合素受体，同时又能高效介导入胞的新型多肽。所述的新型多肽TR（c(RGDfK)- AGYLLGHINLHHLAHL(Aib)HHIL-Cys）是由特异性靶向整合素受体的环状RGD肽（c(RGDfK)） 和非特异性的pH敏感性细胞穿膜肽TH(AGYLLGHINLHHLAHL(Aib)HHIL-Cys)通过共价键连接而成。将该新型多肽TR修饰于载药系统表面，其能介导载药系统更加高效地传递到肿瘤内部，从而更加有效地治疗肿瘤。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供了一种既能主动靶向肿瘤细胞高表达的整合素受体，同时又能高效介导入胞的新型多肽。所述的新型多肽TR（c(RGDfK)- AGYLLGHINLHHLAHL(Aib)HHIL-Cys）是由特异性靶向整合素受体的环状RGD肽（c(RGDfK)） 和非特异性的pH敏感性细胞穿膜肽TH(AGYLLGHINLHHLAHL(Aib)HHIL-Cys)通过共价键连接而成。将该新型多肽TR修饰于载药系统表面，其能介导载药系统更加高效地传递到肿瘤内部，从而更加有效地治疗肿瘤。【专利说明】一种具有肿瘤主动靶向及pH敏感性细胞穿膜能力的新型多肽
本专利技术涉及药物制剂
。具体地说，本专利技术涉及一种既有主动靶向肿瘤细胞高表达的整合素受体的能力又具有pH敏感性细胞穿膜能力的新型多肽。该新型多肽经修饰于载药系统表面用于介导载药系统高效主动靶向高表达整合素受体的肿瘤及高效介导其入胞，达到提高肿瘤治疗效果的目的。
技术介绍
1.癌症的发病率和死亡率近年来呈逐年上升的趋势，已经严重威胁了人类健康。尽管有多种治疗癌症的手段，但目前最为常用的仍然是化疗。由于化疗药物往往在正常组织和肿瘤组织间缺乏选择性，因此其治疗效果和应用范围常受到限制。目前，纳米载药系统的发展给祀向肿瘤治疗带来新的突破。 2.相对于普通的载药系统，特异性配体修饰的载药系统增加了其在肿瘤部位的蓄积，同时降低了在非靶向性器官中的蓄积(如肝，脾等)。其中，整合素(integrin)是一类细胞黏附受体分子，在所有的有核细胞表面均广泛表达，其在体内能够介导细胞与细胞之间，以及细胞与细胞外基质的互相黏附。整合素是由α和β亚基通过非共价键结合形成的异二聚体，在脊椎动物体内，整合素有18种α亚基和8种β亚基，其可以组成约24种不同的异二聚体结构。其中整合素ανβ3在神经胶质瘤、黑色素瘤、卵巢癌等多种肿瘤细胞及肿瘤相关的内皮细胞表面高度表达，与肿瘤的血管发生、肿瘤转移及肿瘤的抗放射治疗密切相关。因此，整合素ανβ3常被用作肿瘤靶向的特异性靶点。已有研究证实，精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp，RGD)的三肽序列能够特异性识别含α ν亚基的整合素家族。进一步的研究也已证实，具有环状结构的R⑶能够高度地与整合素ανβ3、ανβ5结合。然而，特异性配体(如RGD、Tf等)虽能主动靶向高表达相关受体的肿瘤细胞，但受制于优于受体的饱和效应不能高效地介导载药系统进入肿瘤细胞。 3.另一方面，细胞穿膜肽(cell-penetrating peptides, CPPs)是一类具有很强的穿透细胞膜能力的短肽。穿膜肽在生理条件下带有正电荷，它既可以从生物体内提取，也可以通过人工合成。目前，细胞穿膜肽已经成功地应用于蛋白、多肽、核苷酸及小分子物质的递释，这类载药系统的优势在于穿膜效率高。但因为其本身具有下述两个特征而不能广泛地被使用:①细胞穿膜肽带正电荷的特性使得其在血液循环过程中容易与调理蛋白结合从而使所介导的载药系统快速地被网状内皮系统清除；②细胞穿膜肽在正常的组织以及肿瘤之间不具有选择性。 4.相对于正常的细胞，肿瘤细胞是一种快速增长的细胞，在生长过程中需要消耗大量的氧气和营养，产生过剩的乳酸，导致肿瘤部位的PH偏酸。另外，正常组织中的微血管内皮间隙致密、结构完整，载药系统不易透过血管壁，而实体瘤组织中血管丰富、血管壁间隙较宽、结构完整性差，淋巴回流缺失，造成载药系统具有选择性高通透性和滞留性，这种现象被称作实体瘤组织的高通透性和滞留效应，简称EPR效应。 5.为屏蔽穿膜肽的正电性，最新的研究利用组氨酸的修饰使穿膜肽获得pH敏感性。在B1materials 杂志上，本课题组介绍了一种肿瘤微环境敏感的TH肽修饰的脂质体在治疗肿瘤方面的应用。TH肽上的组氨酸的等电点Ip约为6.5，因此TH肽修饰的脂质体在血液循环中(pH7.4)带负电荷从而延长了 TH肽修饰的脂质体在血液中的循环时间；当通过EPR效应被动靶向蓄积到肿瘤部位时，在肿瘤的微酸环境中(pH6.2~pH6.8)TH肽中的组氨酸被质子化而带正电荷，使得TH肽在微酸环境中恢复穿透细胞膜的能力，即转变为激活的细胞穿膜肽。TH肽的上述特性增强了 TH肽修饰的脂质体在肿瘤部位的蓄积以及进入肿瘤深部的能力。然而，在肿瘤部位具有较强细胞穿膜能力的TH肽却不具有在正常细胞和肿瘤细胞间的选择性，仍然会造成一定的副作用。 6.因此，我们希望构建一种既具有主动靶向能力，又能高效介导入胞的新型多肽。本专利技术拟将环RGD与pH敏感的细胞穿膜肽TH通过共价键链接起来，达到既有主动靶向高表达整合素受体的肿瘤，同时又能高效介导入胞的能力。
技术实现思路
1.本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，提供一种既能主动靶向肿瘤高表达的整合素受体又有PH敏感性细胞穿膜能力的新型多肽，可修饰于载药系统表面用于介导载药系统主动靶向高表达整合素受体的肿瘤及高效介导其入胞。 2.具体而言，其特征在于，新型多肽TR的c (RGDfK)部分能主动靶向肿瘤高表达的整合素受体。新型多肽TR的TH部分上的组氨酸等电点Ip约为6.5，在肿瘤微酸环境中TH肽中的组氨酸被质子化而具有穿过细胞膜的能力；而在体内循环过程中，组氨酸不被质子化使得TH肽穿过细胞膜的能力被屏蔽。因此，新型多肽TR既具有受体介导入胞又具有与带负电荷的肿瘤细胞静电吸附高效介导入胞的双重功效，经其修饰的载药系统能高效地进入肿瘤细胞，达到治疗肿瘤的目的。 3.本专利技术中，新型多肽TR的氨基酸序列为C (RGDfK) -AGYLLGHINLHHLAHL (Aib)HHIL-Cys。 本专利技术的突出优点是，新型多肽TR在肿瘤微酸环境中，既可以通过高表达的整合素受体介导入胞，同时又可以通过静电吸附作用入胞，这两种作用同时发挥协同效应。将新型多肽TR修饰于载药系统表面后用于介导载药系统主动祀向肿瘤的高表达的整合素受体及高效介导其入胞。 为了便于理解，以下将通过具体的附图和实施例对本专利技术的新型多肽TR修饰的载药系统进行详细的描述。 【专利附图】【附图说明】 以下，结合附图来详细说明本专利技术的实施方案，其中:1.图1为本专利技术的结构示意图。 2.TR肽修饰的载药系统的表征，图2 (A) TR修饰的脂质体(TR-Lip)在微酸环境中穿膜能力转换的示意图；(B) TR修饰的纳米粒(TR-NPs)的粒径分布；(C) TR修饰的胶束(TR-micellar)在不同pH条件下的电位分布；(D) TR修饰的脂质纳米粒复合物(TR-L-NPs)与整合素ανβ3的结合能力。 3.图3为TR修饰的脂质体(TR-Lip)在B16F10细胞(高表达整合素α ν β 3)上的摄取能力。 4.图4 (A)包载DiR的经TR肽修饰的纳米粒(DiR-TR-NPs)在荷瘤小鼠体内的分布。(B)载DiD的经TR肽修饰的脂质纳米粒复合物(DiD-TR-L-NPs)穿透肿瘤的深度。 具体实施例 实施例1TR肽修饰的脂质体(TR-Lip)的制备以及表征采用薄膜分散法制备脂质体。分别称取1.2 mg大豆磷脂、0.4 mg胆固醇、0.05 mg单甲氧基修饰的聚乙二醇和I mg TR肽修饰的聚乙二醇，将本文档来自技高网...
【技术保护点】
新型多肽TR，具有这样的特征：新型多肽TR由特异性靶向整合素受体的环状RGD肽（c(RGDfK)）和非特异性的pH敏感性细胞穿膜肽TH(AGYLLGHINLHHLAHL(Aib)HHIL‑Cys)通过共价键连接而成，其氨基酸序列为c(RGDfK)‑AGYLLGHINLHHLAHL(Aib)HHIL‑Cys。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：何勤，石凯荣，高会乐，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：四川;51
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