免疫分析方法以及免疫分析装置制造方法及图纸

本发明专利技术的目的在于提供高灵敏度的免疫分析方法和分析装置。本发明专利技术涉及一种分析方法和分析装置，其特征在于：构成为使测定对象成分和与其特异地反应的捕捉成分反应，进而在存在测定对象成分的情况下标识反应物，将该标识了的反应物配置在空间地进行了分离的预定位置，检测该标识反应物的标识，由此以一个分子的灵敏度和分辨率分析测定对象成分。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术的目的在于提供高灵敏度的免疫分析方法和分析装置。本专利技术涉及一种分析方法和分析装置，其特征在于：构成为使测定对象成分和与其特异地反应的捕捉成分反应，进而在存在测定对象成分的情况下标识反应物，将该标识了的反应物配置在空间地进行了分离的预定位置，检测该标识反应物的标识，由此以一个分子的灵敏度和分辨率分析测定对象成分。【专利说明】免疫分析方法以及免疫分析装置
本专利技术涉及一种用于测量试样中的测定对象物质的免疫分析方法以及使用该方法的免疫分析装置。
技术介绍
近年来，作为包含在试样中的测定对象成分的分析方法，开发了简单分析测定对象成分的种类和量的方法。例如，以下这样的通过所谓三明治化验来分析特定的生物体分子的方法(酶结合免疫吸附法:ELISA)正在被实用化，即在将测定对象成分作为抗原时，将与抗原特异地结合的捕捉成分(抗体)固定在支持基体上，使测定对象的试样与之反应而进行预定的特异结合反应，进而使实施了标识的抗体反应而检测出标识。 在以ELISA(酶结合免疫吸附法)为代表的现有的分析方法的例子中，使固定在反应部位上的捕捉成分和测定对象成分进行反应，进而例如使进行了荧光标识的第二捕捉成分发生特异反应。通过与反应部位结合了的标识捕捉成分的荧光强度的测定来求出测定对象成分的浓度。 现有技术文献 非专利文献 非专利文献1-Science Vol.270，pp.467-470，1995 年 非专利文献2:Proc.Natl.Acad.Sc1.Vol.103，pp.3687-3692，2006 年 非专利文献3:Nature B1technology Vol.28，pp.595-599，2010 年
技术实现思路
专利技术要解决的问题 近年来，如以感染症、肿瘤标记物等为代表的那样，对在试样中只存在极微量的成分进行分析的需求提高了。在包含在试样中的测定对象成分为极微量的所谓低浓度区域中，由于所希望的反应而产生的荧光强度成为接近荧光测量的背景的水平的情况很多。在这样的低浓度区域中，无法区别因反应产生的信号和测量的背景信号，它阻碍了高灵敏度测量的实现。 在非专利文献3中公开了一种以高灵敏度测量为目的的单一分子ELISA法。在该方法中，将多个抗体固定在微粒子上，使稀释了的试样中的抗原与对每个微粒子只有一个分子的该抗体结合，在将微粒子收集/固定在支持体上的孔中后，通过在支持体上测定标识，来分析测定对象成分(抗原)。 但是，将多个抗体固定在微粒子上，因此无法否定每一个微粒子会结合多个抗原的可能性。难以在检测步骤中判别该状态，因此无法进一步提高抗原检测的分辨率。另外，即使在支持体上的孔中有微粒子不进入的位置，也认为无法在检测步骤中进行判别。这表示在检测上无法区别在该位置存在抗原、还是相当于不存在抗原的测量的背景。 本专利技术的目的在于:鉴于上述问题，提供一种分析方法和单元，其在包含在试样中的测定对象成分的分析中，即使是极低浓度的区域也能实现高灵敏度的分析。 用于解决问题的方案 本专利技术涉及一种分析方法和分析装置，其特征在于:构成为使测定对象成分和与其特异地反应的捕捉成分进行反应，进而在存在测定对象成分的情况下标识反应物，将该标识了的反应物配置在空间地分离了的位置，检测该标识反应物的标识，由此通过一个分子的灵敏度和分辨率来分析测定对象成分。 为了达到最终的高灵敏度测定，理想的是将该标识反应物逐个分子地配置在空间地分离了的预定位置的结构、即逐个分子地将捕捉成分配置在该检测位置。但是，也有可能有在测定对象成分的测定中不是必须的情况。在低浓度区域中，也并不存在许多测定对象成分的分子。因此，即使在将多个捕捉成分配置在该检测位置的情况下，也可以说在该检测位置存在多个该标识反应物的概率不高，因此也有时在实用上没有很大的影响。 为了检测该标识反应物，采用将该标识反应物配置在空间地分离了的预定位置的结构即可。理想的是可以采用使该标识反应物在空间规则地排列的配置为二维矩阵状等的结构。 作为标识物，理想的是能够进行荧光、发光等的光学标识。既可以使用微粒子作为标识物而利用由粒子产生的光学标识，也可以对标识利用微粒子的大小等物理参数。还可以使用荧光色素等。即，通过检测标识物来与测量的背景、噪声成分进行区别，而能够识别在该检测位置是否存在该测定对象成分即可。 包含在试样中的各种混杂成分、未反应的荧光标识捕捉成分妨碍正确的测量。因此，理想的是预先从反应系统中除去。为了该目的，如果使用磁性粒子作为微粒子，则容易进行清洗操作，能够提供实用并且简便的测定系统。 测定对象成分既可以是蛋白质、激素等原来包含在生物体中的成分，也可以是病毒、药物等。如果将测定对象成分作为抗原，则特异地进行反应的捕捉成分成为抗体。相反，在测定对象成分是抗体时，特异地进行反应的捕捉成分成为抗原。 作为第一例子，如果将测定对象成分作为抗原，则将与抗原特异地反应的捕捉成分的抗体配置在支持体空间地进行了分离的预定位置。测定对象成分的抗原与配置在支持体的预定位置的第一抗体反应。另一方面，测定对象的抗原也与标识了的第二抗体反应。由此，逐个分子地将该标识反应物配置在支持体上空间地进行了分离的位置，检测预定位置的标识反应物的标识，由此能够通过一个分子的灵敏度和分辨率分析测定对象成分。 作为第二例子，也可以将与抗原特异地进行反应的捕捉成分的抗体固定在微粒子等载体上，最终将包含微粒子的标识反应物配置在支持体的空间地进行了分离的预定位置。即，将第一抗体固定在微粒子等载体上，使其与测定对象成分的抗原进行反应。进而逐个分子地将包含微粒子的该标识反应物配置在支持体上的空间地进行了分离的位置，检测该标识反应物的标识，由此能够通过一个分子的灵敏度和分辨率分析测定对象成分。在第二例子中，可以构成为到生成该标识反应物为止在液体中进行反应。因此，与第一例子比较，在第二例子中优选能够期待高的反应效率。微粒子适合的是直径为微米或纳米的水平。微粒子并不必须是磁性粒子，但如果是磁性粒子则容易进行处理。 在第三例子中，不在支持体上配置该标识反应物，将该标识反应物导入到流通流路中，逐个分子空间地分离并检测该标识反应物。即，将第一抗体固定在微粒子等载体上，使其与测定对象成分的抗原反应。进而，使标识了的第二抗体与该反应物反应。将该标识反应物导入到流道上，使该标识反应物空间地进行分离，逐个分子地将该标识反应物配置在检测位置，由此能够通过一个分子的灵敏度和分辨率分析测定对象成分。微粒子适合的是直径为微米或纳米的水平。微粒子并不必须是磁性粒子，但如果是磁性粒子则容易进行处理。 作为第四例子，也可以将测定对象成分的抗原直接配置在支持体的预定位置。但是，设想为该情况下的反应效率不高，因此作为常规分析并不实用。 在上述的例子的反应过程中，在生成该标识反应物时，既可以顺序地反应生成作为反应要素的抗原、第一抗体、标识第二抗体，也可以在预先使一部分要素进行反应后使其他要素进行反应，或者也可以使全部要素同时进行反应。 进而，在上述的例子中，作为免疫分析方法的过程记载了基于所谓的三明治法生成该标识反应物的步骤。但是，本专利技术的应用并不限于三明治法，例如也可以应用于竞争法。根据竞争本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫分析设备，其对于使包含测定对象物质的试样液体和通过抗原抗体反应与该测定对象物质结合的微粒子反应而生成的反应物进行检测，该免疫分析设备的特征在于：该分析设备具备：多个固定单元，其在空间地进行了分离的状态下排列在支持基体的平面上，逐个地固定上述测定对象物质。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：今井恭子，斋藤俊郎，今井一成，
申请(专利权)人：株式会社日立高新技术，
类型：发明
国别省市：日本;JP