一种海马断尾采血方法技术

本发明专利技术涉及一种海马断尾采血方法，包括：(1)配制鱼类血液抗凝剂；(2)取步骤(1)中所述的鱼类血液抗凝剂置于离心管；(3)取鲜活海马，纱布吸干体表水分，解剖剪剪去一段尾柄；(4)剪尾后，剩余的尾柄立即插入到步骤(2)中所述的离心管的液面以下；(5)一手持尾柄，另一手持离心管，采集血液1-2min；(6)采血结束后，海马用消毒药浸泡，之后放回海水继续养殖。本发明专利技术无需注射器或毛细管，而是直接将血液引流到了含抗凝剂的离心管中，有效地解决了血液易凝固的难点，采血量大幅度提升；除了有效克服常规断尾采血法的缺点外，也很好地保留了其优点，同样具有操作简单、稳定性强、断尾海马可存活等特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于采集鱼类血液领域，特别涉及。
技术介绍
血液是动物体内一种极其重要的组织，具有运输养分、参与体液调节、维持内环境稳态和抵御有害物质的作用。正常血液指标值能反映动物的正常生理状态。鱼类血液与机体的代谢、营养、免疫状况有着密切的关系，当鱼体受到外界因子的刺激而发生生理变化时，必定会在血液指标中反映出来。因而，血液指标被广泛地用来评价鱼类的健康状况、营养状况及对环境的适应状况，是重要的生理学指标。 海马(Hippocampus)隶属于鱼纲，海龙目，是一种近陆浅海小型鱼类，具很高的药用和观赏价值，又具很高的繁殖进化研宄价值，深受广大医药、科研和水产工作者的青睐。目前关于海马的研宄多数集中于保护生物学、养殖生态学、基础行为学和临床药理学等方面，而关于生理学的研宄，特别是受水中污染物、病原微生物及人为干扰源的影响时生殖生理、免疫生理、内分泌生理，甚至遗传生理的响应，相对甚少。宄其原因，主要是由于海马血液不易米集。 由于尾动脉注射器采血法普遍适用于尾动脉较为粗大的中大型鱼类，不适合海马等小型鱼类，因此，目前海马采血的方法主要是心脏采血法和断尾采血法，但这两者仍存在很大的弊端。海马的心脏较小，且位于头颈部，即鳃盖后缘，躯干上端最细窄处，加之海马经常处于头部向下的姿势，给围心腔的解剖带来了很大的难度。即使经验丰富的解剖者也经常容易误伤到心脏，导致血液散流至体腔中。海马心脏采血不稳定，一尾海马成功采集血液，另一尾则没有的情况时有发生，给实验数据的分析带来了困扰。此外，心脏采血后的海马已经死亡，无法做到对同一海马的长期实时监测。而断尾采血，虽然操作简单，并且能确保被采血的海马继续存活，但是断尾瞬间血液渗出量有限，大概30-40 μ 1，之后血液会凝固在断尾横截面处，无法再被注射器或毛细管吸取；再往上断尾一次，又能渗出20-30 μ I ;这样连续断尾2-3次后，基本就没血了。断尾法采集的血量有限，并且连续断尾增加了海马死亡的危险，并给海马带来了连续的应激，可能使得第一次断尾和第二次断尾的血液成分发生了变化，不利于研宄的进展。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供，该方法解决了血液易凝固，采血量少，连续断尾刺激的问题。 本专利技术的，包括: (I)配制鱼类血液抗凝剂； (2)取步骤⑴中所述的鱼类血液抗凝剂置于离心管； (3)取鲜活海马，纱布吸干体表水分，解剖剪剪去一段尾柄； (4)剪尾后，剩余的尾柄立即插入到步骤(2)中所述的离心管的液面以下； (5) 一手持尾柄，另一手持离心管，采集血液l_2min ； (6)采血结束后，海马用消毒药浸泡，之后放回海水继续养殖。 所述步骤(I)中的鱼类血液抗凝剂的组成为:柠檬酸0.48g，柠檬酸钠1.32g，葡萄糖1.47g，蒸饱水10mlo 所述步骤(2)中的鱼类血液抗凝剂的体积为0.5ml，离心管的体积为1.5ml。 所述步骤(3)中的解剖剪经75%医用酒精浸泡5min。 所述步骤(3)中剪去尾柄的长度占尾柄全长的30-40%。 所述步骤(6)中的消毒药为1%的医用碘伏。 所述步骤(6)中的浸泡时间为30min。 有益效果 (I)本专利技术无需注射器或毛细管，而是直接将血液引流到了含抗凝剂的离心管中，有效地解决了血液易凝固的难点，采血量大幅度提升； [0021 ] (2)断尾的尾柄一插入到抗凝剂中，尾动脉中的血液直流而下，短时间内就能采集足量的血液，并且血液纯净无其他组织液掺杂；以一条成年的海马(体高1cm)为例，仅需断尾I次，l-2min内就能采集200-300 μ I的血量，是常规连续断尾采血量的3倍以上； (3)本专利技术除了有效克服常规断尾采血法的缺点外，也很好地保留了其优点，同样具有操作简单、稳定性强、断尾海马可存活等特点。 【附图说明】 图1为本专利技术方法的示意图。 【具体实施方式】 下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。 实施例1 (I)配制鱼类血液抗凝剂:取柠檬酸0.48g，柠檬酸钠1.32g，葡萄糖1.47g，蒸馏水100ml，充分溶解后置于4°C保存。 (2)用移液器取0.5ml抗凝剂于1.5ml离心管中。 (3)从养殖缸中取雌雄灰海马(Hippocampus erectus)各一尾，用纱布吸干体表水分，测量体高和湿重后，用75%医用酒精消毒过的解剖剪剪去一段尾柄，剪去尾柄的长度占尾柄全长的1/3。 (4)剪尾后，立即将断尾的海马的剩余尾柄插入到含0.5ml抗凝剂的离心管中，尾柄位于抗凝剂液面以下。 (5) 一手持离心管，另一手固定海马尾柄使其不脱离液面，采血持续2min。 (6)采血结束后，断尾海马用1%的医用碘伏消毒30min，之后放回海水继续养殖。 离心管内液体的总体积减去0.5ml抗凝剂，即为海马采血量。采血结果显示:一尾体高为11.5cm，湿重为5.68g的雄性灰海马采血量为320 μ I，而一尾体高为10.5cm，湿重为5.23g的雌性灰海马采血量为280 μ 1，足够满足常规分子生物学、细胞生物学等研宄所需的血液量。 实施例2 (I)配制鱼类血液抗凝剂:取柠檬酸0.48g，柠檬酸钠1.32g，葡萄糖1.47g，蒸馏水100ml，充分溶解后置于4°C保存。 (2)用移液器取0.5ml抗凝剂于1.5ml离心管中。 (3)从养殖缸中取2尾三斑海马(Hippocampus trimaculatus)，用纱布吸干体表水分，测量体高和湿重后，用75%医用酒精消毒过的解剖剪剪去一段尾柄，剪去尾柄的长度占尾柄全长的1/3。 (4)剪尾后，立即将断尾的海马的剩余尾柄插入到含0.5ml抗凝剂的离心管中，尾柄位于抗凝剂液面以下。 (5) 一手持离心管，另一手固定海马尾柄使其不脱离液面，采血持续2min。 (6)采血结束后，断尾海马用I %的医用碘伏消毒30min，之后放回海水继续养殖。 离心管内液体的总体积减去0.5ml抗凝剂，即为海马采血量。采血结果显示:一尾体高为8.7cm，湿重为2.77g的三斑海马采血量为190 μ 1，而另一尾体高为8.4cm，湿重为2.40g的三斑海马采血量为170 μ 1，足够满足常规分子生物学、细胞生物学等研宄所需的血液量。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种海马断尾采血方法，包括：(1)配制鱼类血液抗凝剂；(2)取步骤(1)中所述的鱼类血液抗凝剂置于离心管；(3)取鲜活海马，纱布吸干体表水分，解剖剪剪去一段尾柄；(4)剪尾后，剩余的尾柄立即插入到步骤(2)中所述的离心管的液面以下；(5)一手持尾柄，另一手持离心管，采集血液1‑2min；(6)采血结束后，海马用消毒药浸泡，之后放回海水继续养殖。

【技术特征摘要】
1.一种海马断尾采血方法，包括: (1)配制鱼类血液抗凝剂； (2)取步骤(1)中所述的鱼类血液抗凝剂置于离心管； (3)取鲜活海马，纱布吸干体表水分，解剖剪剪去一段尾柄； (4)剪尾后，剩余的尾柄立即插入到步骤(2)中所述的离心管的液面以下； (5)一手持尾柄，另一手持离心管，采集血液l_2min ； (6)采血结束后，海马用消毒药浸泡，之后放回海水继续养殖。2.根据权利要求1所述的一种海马断尾采血方法，其特征在于:所述步骤(1)中的鱼类血液抗凝剂的组成为:柠檬酸0.48g，柠檬酸钠1.32g，葡萄糖1.47g，蒸馏水100ml。3....

【专利技术属性】
技术研发人员：林听听，张东，席寅峰，刘鑫，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院东海水产研究所，
类型：发明
国别省市：上海;31