一种治疗出血性中风中药提取物成分群的提取方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种治疗出血性中风中药提取物成分群的提取方法及其应用。大黄、丹皮、赤芍、生地、三七按一定重量配比，粉碎后加水煎煮提取，提取液用二氯甲烷萃取后，水层再用正丁醇萃取，正丁醇萃取液回收干后为中药提取物成分群。该中药提取物用HPLC-MS分析由芍药苷类、鞣质类、丹皮酚苷类、蒽醌类、芪类、皂苷类及环烯醚萜苷类33个成分组成，能显著降低自发性高血压雄性大鼠神经元特异性烯醇化酶、Ｓ-100β蛋白、IL-1、TNF-α、血浆纤维蛋白原水平，可用于制备治疗出血性中风药物的用途。

【技术实现步骤摘要】
一、
本专利技术涉及中医药
，具体地说是一种治疗出血性中风中药提取物成分群的提取方法及其应用。二、
技术介绍
出血性中风(脑出血)是国内外临床上常见的疾病，该病发病急骤，进展迅速，病死率高，患者预后情况直接影响到病后的生存质量。神经元特异性烯醇化酶(SNE)和S-100β蛋白是判断脑损害严重程度的重要指标，其中，SNE是神经元及神经内分泌细胞的一个标志酶，当脑组织发生缺血缺氧时，脑脊液中SNE水平升高。S-100β蛋白是脑特异性蛋白，血清中S-100β蛋白水平越高，脑损害程度越重。当前西医治疗脑出血的方法为手术治疗和内科综合治疗两大类，有一定危险性且疗效不够显著。中医认为出血性中风源于血分瘀热，搏击不解，闭阻脑窍，而令邪热愈炽，进而化火生风生痰，造成瘀热阻窍，故治疗时以凉血散瘀、通腑泄热为主。中药大黄清热泻火、丹皮凉血散瘀、赤芍凉血活血、三七通脉化瘀、生地滋阴清热。因此，本专利技术用这些中药组合物提取制备中药提取物，用自发性高血压大鼠评价其抗炎、活血及防治脑损伤作用，用于治疗出血性中风药物的研发。三、
技术实现思路
针对临床出血性中风患者的需求，本专利技术的目的是提供一种具有治疗出血性中风中药提取物成分群的提取方法及其应用。本专利技术的目的是通过以下的技术方案来实现的：1、一种治疗出血性中风中药提取物成分群的提取方法，提取步骤如下：(1)原料药：大黄1-5份、丹皮1-5份、赤芍1-5份、生地1-8份、三七1-6份；(2)将上述原料药粉碎至20-40目，加5-15倍量水提取两次，合并滤液，浓缩至0.5-1.5g生药/ml，用1-3倍量二氯甲烷萃取3-6次，弃二氯甲烷层，水层再用1-3倍量正丁醇萃取3-6次，合并正丁醇萃取液回收干为中药提取物成分群；(3)中药提取物成分分析：用HPLC-MS分析中药提取物的化学成分，主要由芍药苷类、鞣质类、丹皮酚苷类、蒽醌类、芪类、皂苷类及环烯醚萜苷类33个成分组成。2、一种中药提取物成分群在制备治疗出血性中风药物中的应用。有益效果：本专利技术的中药提取物成分群，主要由芍药苷类、鞣质类、丹皮酚苷类、蒽醌类、芪类、皂苷类及环烯醚萜苷类33个成分组成，能显著降低自发性高血压大鼠神经元特异性烯醇化酶、S-100β蛋白、IL-1、TNF-α、血浆纤维蛋白原水平，可用于制备治疗出血性中风药物的用途。四、中药提取物成分群的药理试验1.造模及给药自发性高血压雄性大鼠随机分为4组，每组8只，以Wistar雄性大鼠为空白对照组(生理盐水组)，高血压大鼠分别为模型组(生理盐水组)，阳性对照组(阿司匹林组)、中药提取物高、低剂量组。将各组按10mL·kg-1每天灌胃给药1次，连续15天。第15天灌胃给药1h后颈动脉取血5ml于加有0.038g·ml-1枸橼酸钠的离心管中，以3000r·min-1转速离心10min，取上层血浆，Elisa试剂盒测定大鼠S-100B蛋白、NSE、IL-1、TNF-α、血浆纤维蛋白原。统计采用SPSS13.0统计软件对数据进行双样本t检验及方差分析，实验数据以表示。2.对S-100B和NSE的影响实验结果(表1)表明：模型组S-100B和NSE较空白组显著升高(P＜0.01)，与模型组比较，阳性对照组及中药提取物不同剂量组可显著降低S-100B和NSE水平(P＜0.01)。表1中药提取物对S-100B和NSE的影响注：与空白组比##P﹤0.01；与模型组比**P﹤0.013、对炎症因子的影响实验结果(表2)表明：自发性高血压大鼠模型组IL-1、TNF-α水平较空白组显著升高(P＜0.01)。与模型组比较，阳性药对照组及中药提取物高、低剂量组能显著降低自发性高血压大鼠IL-1、TNF-α水平(P＜0.01)。表2中药提取物对炎症因子的影响注：与模型组比较**P﹤0.01；与空白组比较##P﹤0.014、对血浆纤维蛋白原的影响实验结果(表3)表明：自发性高血压雄性大鼠纤维蛋白原水平较空白组显著升高(P＜0.01)。与模型组比较，阳性对照组及中药提取物高、低剂量组能显著降低自发性高血压雄性大鼠血浆纤维蛋白原水平(P＜0.01)。表3中药提取物对大鼠纤维蛋白原测定结果注：与模型组比较**P﹤0.01；与空白组比较##P﹤0.01五、中药提取物化学成分HPLC-MS分析色谱柱(Thermo ODS-2HYPERSIL 250mm×4.6mm)；进样量10μL；柱温：35℃；流速为1.0mL.min-1；流动相：甲醇(A)-0.5％甲酸(B)，洗脱程序为：0～10min，22％～30％A；10～25min，30％～40％；25～30min，40％～50％A；30～50min，50％～62％A；进样10ul；检测波长：254nm。离子源：电喷雾；质谱扫描方式：负离子；雾化气压力：55psi；辅助加热气压力：55psi；气幕压力：40psi；离子化温度：550℃；碰撞能量：10V；毛细管电压：5500V；去簇电压：-60V；扫描范围：m/z50～1000。中药提取物经HPLC-MS分析，总离子流图见图1。通过各色谱分子离子峰及主要碎片峰的解析并参照文献，共鉴定出该中药提取物主要由芍药苷类、鞣质类、丹皮酚苷类、蒽醌类、芪类、皂苷类及环烯醚萜苷类33个成分组成(表4)。表4正丁醇部位主要化学成分研究结果表明，由本专利技术制备的中药提取物，主要由芍药苷类、鞣质类、丹皮酚苷类、蒽醌类、芪类、皂苷类及环烯醚萜苷类成分等33个成分组成，能显著降低自发性高血压雄性大鼠神经元特异性烯醇化酶、S-100β蛋白、IL-1、TNF-α、血浆纤维蛋白原水平，可用于制备治疗出血性中风药物的用途。六、附图说明图1中药提取物HPLC-MS离子流图。七.具体实施方式实施例1：治疗出血性中风的中药提取物成分群的提取方法，提取步骤如下：(1)原料药：大黄1份、丹皮1份、赤芍1份、生地1份、三七1份；(2)将上述原料药粉碎至20目，加5倍量水提取两次，合并滤液，浓缩至0.5g生药/ml，用1倍量二氯甲烷萃取3次，弃二氯甲烷层，水层再用1倍量正丁醇萃取3次，合并正丁醇萃取液回收干为中药提取物成分群；(3)中药提取物成分分析：用HPLC-MS分析中药提取物的化学成分，主要由芍药苷类、鞣质类、丹皮酚苷类、蒽醌类、芪类、皂苷类及环烯醚萜苷类33个成分组成。实施例2：治疗出血性中风的中药提取物成分群的提取方法，提取步骤如下：(1)原料药：大黄2份、丹皮3份、赤芍3份、生地5份、三七3份；本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗出血性中风中药提取物成分群的提取方法，提取步骤如下：（1）原料药：大黄1‑5份、丹皮1‑5份、赤芍1‑5份、生地1‑8份、三七1‑6份；（2）将上述原料药粉碎至20‑40目，加5‑15倍量水提取两次，合并滤液，浓缩至0.5‑1.5g生药 / ml，用1‑3倍量二氯甲烷萃取3‑6次，弃二氯甲烷层，水层再用1‑3倍量正丁醇萃取3‑6次，合并正丁醇萃取液回收干为中药提取物成分群；（3）中药提取物成分分析：用HPLC‑MS分析中药提取物的化学成分，主要由芍药苷类、鞣质类、丹皮酚苷类、蒽醌类、芪类、皂苷类及环烯醚萜苷类33个成分组成。

【技术特征摘要】
1.一种治疗出血性中风中药提取物成分群的提取方法，提取步骤如下：
（1）原料药：大黄1-5份、丹皮1-5份、赤芍1-5份、生地1-8份、三七1-6份；
（2）将上述原料药粉碎至20-40目，加5-15倍量水提取两次，合并滤液，浓缩至0.5-1.5g生药 / ml，用1-3倍量二氯甲烷萃取3-6次，弃二氯甲烷层，水...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹莲，李国春，黄西，吴勉华，程海波，
申请(专利权)人：南京中医药大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32