本发明专利技术公开了一种基于磁珠法提取真菌基因组DNA的方法，通过真菌细胞的破碎，DNA的游离与杂蛋白的抽除，磁珠法快速纯化基因组DNA三个步骤得到真菌基因组DNA。常规的真菌基因组DNA的提取方法通常是利用无水乙醇低温沉淀基因组，往往需要耗时20h以上，而本发明专利技术基于磁珠法提取真菌基因组DNA，仅需要不到8h的时间，便可提取得到真菌基因组DNA。本发明专利技术与常规的真菌基因组DNA提取方法相比，能够有效、快速、经济地提取到真菌基因组DNA，节省了大量提取时间，适用于商业化生产，具有可观的经济价值。
【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种基于磁珠法提取真菌基因组DNA的方法，包括真菌细胞的破碎，DNA的游离与杂蛋白的抽除，磁珠法快速纯化基因组DNA，其特征在于：所述方法具体包括以下步骤：1）真菌细胞的破碎：挑取真菌于研钵中，加入液氮研磨成真菌粉末，将真菌粉末加入离心管中，每0.3‑1g真菌样本对应的真菌粉末加入200‑700ml 工作液A,20‑50μl 工作液B和10‑50μl 工作液C,然后于50‑60°C温浴5‑10h；2）DNA的游离与杂蛋白的抽除：在上述离心管中加入200‑700μl 工作液D， 10000‑15000rpm/min 离心5‑15min，然后将一次上清液转移至无菌的离心管中，加入500μl 工作液E，10000‑15000rpm/min 离心5‑15min，然后将二次上清液转移至无菌的离心管中；3）磁珠法快速纯化基因组DNA：往含有二次上清液的离心管中加入与二次上清液等体积的工作液F，震荡10‑30s后，室温放置1‑10min，将离心管放在磁力架上，进行一次磁珠分离，吸去液体，保留磁珠，然后往含有磁珠的离心管中加入0.5‑1.5ml 工作液G,打匀后室温静置5‑10min，将离心管放在磁力架上，进行二次磁珠分离，吸去液体，保留磁珠，然后往含有磁珠的离心管中加入30‑60μl 工作液H, 将离心管放在磁力架上，进行三次磁珠分离，待磁珠吸附到离心管一侧时吸取液体，此液体即为真菌基因组DNA；所述工作液A由终浓度0.08‑0.1 mol/L氯化钠，终浓度0.08‑0.16 mol/L三羟甲基氨基甲烷和终浓度0.03‑0.06 mol/L乙二胺四乙酸组成，pH=7.0‑9.0；所述工作液B为10‑20mg/ml蛋白酶K；所述工作液C为质量浓度5‑15%的十二烷基硫酸钠；所述工作液D是体积比为酚:氯仿:异戊醇=25:24:1的混合液；所述工作液E是体积比为氯仿:异戊醇=24:1的混合液；所述工作液F是体积比为氯化钠：异丙醇：磁珠混悬液=1:47:2的混悬液，所述氯化钠浓度为5 mol/L，所述磁珠混悬液由磁珠和水按照体积比1:2混合配置而成；所述工作液G由终浓度 4.3‑21.4 mmol/L三羟甲基氨基甲烷, 终浓度2.1‑4.2 mmol/L乙二胺四乙酸,终浓度42.9‑85.7 mmol/L氯化钠和体积终浓度60‑80%无水乙醇组成；所述工作液H为 5‑10mmol/L三羟甲基氨基甲烷，pH=7.0‑9.0。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王清水，余彦，
申请(专利权)人：福建师范大学，
类型：发明
国别省市：福建;35
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