本发明专利技术提供了一种对代谢组学研究中的新鲜烟叶样品质量进行判别的方法。利用新鲜烟叶中磷脂酰乙醇胺(18:3/18:3)与甘油三酯（16:0/16:0/16:0）含量的比值对代谢组学研究中的新鲜烟叶质量进行判别，该法操作简单快速、结果准确可靠，可为烟草代谢特征分析及相关烟草代谢组学研究提供借鉴。
【技术实现步骤摘要】
-种基于代谢组学研究中的新鲜烟叶样品质量的判别方法
本专利技术涉及分析化学领域，是一种基于新鲜烟叶中的脂类物质含量对代谢组学研 究中的新鲜烟叶样品质量进行判别的方法。
技术介绍
植物代谢组学是通过考察植物受刺激或扰动后其代谢产物的变化或其随时间的 变化，来研究植物体系的一种技术。通过对植物体内小分子化合物代谢的轮廓分析可直接 获得植物的生理生态变化。在植物代谢组学研究中，样品的质量决定着分析数据的真实可 靠性；而样品的保存条件决定样品质量的好坏。对于不能在取样后立刻进行代谢组学分析 的植物样品，通常建议超低温保存；即在-8(TCW下的极低温度环境下保存生物样品。在超 低温环境下植物样品的代谢过程会大大减缓，W此来保持样品的稳定性。 烟草作为模式生物和重要的经济作物，近几年来针对烟草的代谢组学研究越来越 多。但由于烟草样品保存不当而导致的质量发生变化而导致代谢物含量失真的情况时有发 生。急需一种简单、快速的分析方法对植物代谢组学研究中的烟草样品质量进行判别。 脂类是烟草中一类重要物质，具有重要的生物学功能。它是烟草代谢过程中所需 燃料的胆存形式，可作为能源；类脂(主要是磯脂）是构成生物膜的主要成分，膜的不可通透 性、对各种物质的扩散与运输功能等，均与其有关；脂类作为细胞的表面物质，与细胞识别、 组织免疫等有密切关系。近年来有关植物中脂类化合物的提取、检测等方法的报道也是层 出不穷，但未曾有人提出将新鲜烟叶中的脂类物质含量或含量比值用于代谢组学新鲜烟叶 样品质量的判别。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供了一种对代谢组学研究中的新鲜烟叶样品质量进行判别的 方法。利用新鲜烟叶中磯脂醜己醇胺（18:3/18:3)与甘油H醋（16:0/16:0/16:0)含量的 比值对代谢组学研究中的新鲜烟叶样品质量进行判别，该法操作简单快速、结果准确可靠。 为了实现本专利技术目的，本专利技术技术方案为： -种基于代谢组学研究中的新鲜烟叶样品质量的判别方法，通过检测新鲜烟叶中 磯脂醜己醇胺与甘油H醋含量，计算其比值，对代谢组学研究中的新鲜烟叶样品质量进行 判别。 将得到磯脂醜己醇胺与甘油H醋含量的比值作为区分代谢组学正常样品、变质样 品及部分变质样品的标准，其中待测品种中磯脂醜己醇胺与甘油H醋含量的比值在1. 8及 W上的为正常样品，可用于代谢组学分析，磯脂醜己醇胺与甘油H醋含量的比值在0. 1 W 下的为变质样品，磯脂醜己醇胺与甘油H醋含量的比值在0. 1-1. 8之间的为部分变质样 品。 其具体方法为： 1)称取一定量的新鲜烟叶样本，加入含内标的甲醇，润旋0. 5-1. 5分钟；再加入甲 基叔下基離，润旋0. 5-1. 5分钟；最后加入水，润旋0. 5-1. 5分钟；静置后离也，将上清液稀 释2-4倍，移至进样瓶中用于HPLC-MS分析。 2)HPLC具体参数：色谱柱；Waters T3;柱温；55°C;进样量4uL;柱流速；0. 26血/ min ;流动相A ;6/4己膳/水冷lOmM己酸馈）；流动相B ;9/1异丙醇/己膳冷lOmM己 酸馈）；洗脱梯度 0-0. Olmin ;0-30%B，0. 01-1. 5min ;30%-54%B，1. 5-4. Omin ;54-55〇/〇B, 4. 0-14. Omin ;55-80%B，14-17. Omin ;80-85%B，17-17. 5min ;85-100%B，17. 5-22. 5min : 100%-30%B，22. 5-27. 5min ;30%B ;MS具体参数：电喷雾离子源巧SI)，采用正离子模式检测； 使用高纯N2辅助喷雾电离与脱溶剂，干燥气温度35CTC，干燥气流速为9m L/min，雾化气压 45psig ;离子源温度35(TC，毛细管电压为4000V，溶剂化离子去簇电压230V，锥孔电压65V， 质也（Centroid)模式采集质谱数据；质量扫描范围m/z400?1000。 所述内标及其含量为；磯脂醜己醇胺0. 02-0. 04g/L及甘油H醋0. 002-0. 004g/ L； 所述烟草鲜叶、含内标的甲醇溶液、甲基叔下基離和水按质量/体积比加入量为 =10 ?30:0. 1 ?0. 3 ;0. 5 ?0. 7 ;0. 1 ?0. 15。 本专利技术研究人员经过大量新鲜烟叶样品的分析研究，发现新鲜烟叶如果保 存不当，其脂类物质的含量会发生较大变化，磯脂醜己醇胺（18:3/18:3)与甘油H醋 (16:0/16:0/16:0)含量的比值也会明显降低，此类样品将不能用于代谢组学分析。因此可 磯脂醜己醇胺（18:3/18:3)与甘油H醋（16:0/16:0/16:0)含量的比值作为一个标准 对代谢组学研究中的新鲜烟叶样品质量进行判别。 本专利技术研究人员利用新鲜烟叶样品中磯脂醜己醇胺（18:3/18:3)与甘油H醋 (16:0/16:0/16:0)含量的比值和样品质量的相关性，对代谢组学新鲜烟叶样品进行质量判 另IJ。本专利技术的优点：操作简单快速，结果准确可靠；样品用量少；适用于不同生育期的新鲜 烟叶。本方法可为烟草代谢特征分析及相关烟草代谢组学研究提供借鉴。 【具体实施方式】 下面实施例进一步描述本专利技术，但所述实施例仅用于说明本专利技术而不是限制本发 明。 本专利技术将磯脂醜己醇胺（18:3/18:3)与甘油H醋（16:0/16:0/16:0)含量的比值 作为区分代谢组学正常样品、变质样品及部分变质样品的标准。即待测品种中磯脂醜己醇 胺（18:3/18:3)与甘油H醋（16:0/16:0/16:0)含量的比值在1.8及W上的为正常样品，可 用于代谢组学分析，磯脂醜己醇胺（18:3/18:3)与甘油H醋（16:0/16:0/16:0)含量的比值 在0. 1 W下的为变质样品，磯脂醜己醇胺（18:3/18:3)与甘油H醋（16:0/16:0/16:0)含量 的比值在0. 1-1. 8之间的为部分变质样品。 磯脂醜己醇胺（18:3/18:3)与甘油H醋（16:0/16:0/16:0)是植物中广泛存在的 两种脂类物质，本实验采用高效液相色谱质谱联用法（HPLC-MS)对新鲜烟叶样品中的磯脂 醜己醇胺（18:3/18:3)与甘油H醋（16:0/16:0/16:0)进行相对定量分析。分析步骤如下： 1)称取一定量的新鲜烟叶样本（10mg-30mg)，加入含内标磯脂醜己醇胺 (15:0/15:0) (0.02-0. 04g/l，avanti)及甘油H醋（15:0/15:0/15:0) (0.002-0. 004g/ L avanti )的纯甲醇（100-300 y L, Merk)，润旋0. 5-1. 5分钟；再加入甲基叔下基離 巧00-700 y L sigma)，润旋 0. 5-1. 5 分钟；最后加入水（100-150 y L)，润旋 0. 5-1. 5 分钟； 静置后离也，将上清液稀释2-4倍，移至进样瓶中用于HPLC-MS分析。 2)HPLC(Agilentl200)具体参数：色谱柱；Waters T3( 1. 8 y m，2. 1 X 100mm);柱温： 55°本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种基于代谢组学研究中的新鲜烟叶样品质量的判别方法，其特征在于：通过检测新鲜烟叶中磷脂酰乙醇胺与甘油三酯含量，计算其比值，对代谢组学研究中的新鲜烟叶样品质量进行判别。
【技术特征摘要】
1. 一种基于代谢组学研究中的新鲜烟叶样品质量的判别方法，其特征在于：通过检测 新鲜烟叶中磷脂酰乙醇胺与甘油三酯含量，计算其比值，对代谢组学研究中的新鲜烟叶样 品质量进行判别。2. 根据权利要求1所述判别方法，其特征在于：将得到磷脂酰乙醇胺与甘油三酯含量 的比值作为区分代谢组学正常样品、变质样品及部分变质样品的标准，其中待测品种中磷 脂酰乙醇胺与甘油三酯含量的比值在1.8及以上的为正常样品，可用于代谢组学分析，磷 脂酰乙醇胺与甘油三酯含量的比值在〇. 1以下的为变质样品，磷脂酰乙醇胺与甘油三酯含 量的比值在0. 1-1. 8之间的为部分变质样品。3. 根据权利要求1或2所述方法，其特征在于：其具体方法为： 1) 称取一定量的新鲜烟叶样本，加入含内标的甲醇，涡旋〇. 5-1. 5分钟；再加入甲基 叔丁基醚，涡旋0. 5-1. 5分钟；最后加入水，涡旋0. 5-1. 5分钟；静置后离心，将上清液稀释 2-4倍，移至进样瓶中用于HPLC-MS分析。 2. HPLC具体参数：色谱柱：Waters T3 ;柱温：55°C;进样量4 ii L ;柱流速：0. 26mL/min ; 流动相A :6/4乙腈/水(含10mM乙酸铵);流动相B :9/1异丙醇/乙腈(...
【专利技术属性】
技术研发人员：许国旺，常玉玮，赵春霞，李丽丽，路鑫，张俊杰，赵燕妮，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
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