本发明专利技术提供了蟛蜞菊内酯的新用途，即蟛蜞菊内酯在制备预防及治疗骨质疏松症药物及保健品中的应用。经实验表明，蟛蜞菊内酯对前破骨细胞增殖具有明显抑制作用，并能抑制破骨细胞的抗酒石酸酸性磷酸酶活性。可通过抑制破骨细胞的增殖和分化，减少骨质的丢失，因此，它具有抗骨质疏松活性，可用于制备防治骨质疏松症的药物及保健品。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及蟛蜞菊内酯的应用。即蟛蜞菊内酯在制备预防及治疗骨质疏松症药物及保健品中的应用。
技术介绍
骨质疏松在世界常见病、多发病中居第7位，在老年人中多发。据专家估算，我国目前60岁以上人口骨质疏松患病率，女性大约为50%，男性为20%，现有骨质疏松症患者约9000万人。随着我国老龄化的日益加剧，骨质疏松症的防治成为一项大的工程，尽管国内外专家对此病的防治十分重视，但此病尚缺乏有效的预防及治疗药物。骨质疏松症的治疗药物按照作用机理分为骨吸收抑制剂和骨形成促进剂。雌激素是目前临床较为常见的骨吸收抑制剂，有明确疗效，但其副作用亦较明显，和乳腺癌、子宫内膜癌的发病存在着联系，并能够引发心肌梗塞，深静脉血栓形成，肺栓塞等。植物雌激素作为一类天然存在于植物中的杂环多酚类的活性物质，其结构与内源性雌激素相似，能结合并激活哺乳类动物雌激素受体，具有雌激素样效应而无明显雌激素样副作用，被认为是雌激素的天然替代品。目前相关研究已经证实，异黄酮类植物雌激素具有明确抗骨质疏松作用，并且已有大豆异黄酮为主要成分的药品及保健品上市销售。蟛蜞菊内酯（Wedelolactone）属于植物雌激素中的香豆素类化合物，分子式为C16H10O7，分子量为314.25，CAS号为524-12-9，结构式见下式1，是2010年版药典中墨旱莲新增的指标成分，主要存在于墨旱莲和蟛蜞菊中。墨旱莲作为补肾中药，在中医临床治疗骨质疏松症中有一定的应用（林雄浩,吴锦忠。中药复方二至丸的化学成分及抗骨质疏松研究进展。解放军药学学报，25（5）：421。）也有文献报导蟛蜞菊乙醇提取物对去卵巢大鼠模型的抗骨质疏松作用明显（Annie S，Prabhu RG，Malini S.Activity of Wedelia calendulacea Less in post-menopausal osteoporosis[J].Phytomedicine，2006，13（1-2）：43.）但以上报道均未能确定是哪种成分起到明确的抗骨质疏松作用。同时，对单体化合物蟛蜞菊内酯的药理研究较少，主要为抗肝细胞毒性（Wong SM，Antus S，Gottsegen A，et al.Wedelolactone and coumestan derivatives as new antihepatotoxic and antiphlogistic principles[J].Arzneimittelforschung，1988，38（5）：661.）及抗肿瘤作用（Lin FM，Chen LR，Lin EH，et al.Compounds from Wedelia chinensis synergistically suppress androgen activity and growth in prostate cancer cells[J].Carcinogenesis，2007，28（12）：2521.）对其是否具有抗骨质疏松作用，还没有文献报道。我们的研究工作初步证实，蟛蜞菊内酯在体外实验中，具有直接抑制前破骨细胞增殖的作用，并能抑制前破骨细胞向成熟分化。这为将其开发为骨吸收抑制剂类抗骨质疏松药物或保健品提供了可能性。基于上述研究工作，提出本专利。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供蟛蜞菊内酯的新用途，即蟛蜞菊内酯作为活性成分在制备预防及治疗骨质疏松药物及保健品中的应用。我们采用常用的MTT法，研究蟛蜞菊内酯对小鼠前破骨细胞RAW264.7的作用。实验结果表明，1.56-400μM的蟛蜞菊内酯均能对RAW264.7细胞的增殖产生影响。6.25μM的蟛蜞菊内酯作用24小时可抑制RAW264.7细胞的增殖，增殖率降至82.73%，并呈时间、剂量依赖性。不同批次制备的蟛蜞菊内酯均有抑制RAW264.7细胞增殖的作用。采用RANKL试剂盒，研究蟛蜞菊内酯对前破骨细胞分化的影响。实验结果表明，1、5、10μM蟛蜞菊内酯均能不同程度抑制RANKL诱导的破骨细胞分化标志酶—TRAP活性。5μM蟛蜞菊内酯即能使RAW264.7细胞TRAP酶活性降至64.88%，表明蟛蜞菊内酯能够抑制前破骨细胞RAW264.7向成熟破骨分化。本专利技术具有以下优点：1本专利技术发现了蟛蜞菊内酯的新活性，即抗骨质疏松活性，且活性较强，丰富了蟛蜞菊内酯的使用范围；2为开发出高效低毒的抗骨质疏松新药或保健品提供了可能性。具体实施方式现结合实施例对本专利技术做进一步详细说明，实施例仅限于说明本专利技术，而非对本专利技术的限定。实施例1：实验材料及试剂：蟛蜞菊内酯由本实验室从墨旱莲中提取制备，HPLC纯度≥98%，批次20111026。采用的细胞株为小鼠前破骨细胞RAW264.7，购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库（上海），以含10%胎牛血清（杭州四季青）的DMEM（Gibco）培养，0.05%胰蛋白酶（Solarbio）消化传代。细胞置于37℃，5%CO2，饱和湿度的培养箱内培养。所用试剂：MTT，RANK Ligand from mouse（RANKL），抗酒石酸酸性磷酸酶试剂盒（TRAP kit）均为sigma产品，雌二醇（E2）购自中国药品生物制品检定所。所用仪器：二氧化碳培养箱（HEAL FORCE），超净工作台（HEAL FORCE），酶标仪（sunrise，TECAN），倒置显微镜（Olymbus）。实验方法：MTT法检测蟛蜞菊内酯对RAW264.7细胞存活率的影响：RAW264.7细胞以每孔10000个的浓度接种到96孔板，每孔100μL，培养过夜。蟛蜞菊内酯1.2mg加入48μL DMSO，配制成母液；以雌二醇（E2）为阳性对照药物，1.2mg E2加入55μL无水乙醇，配制成母液。临用以培养基稀释母液，配制成所需浓度，每孔加入100μL，阴性对照孔加入等量培养基。培养24h，48h和72h后，每孔加入MTT（5mg·mL-1）20μL，反应4h后，小心甩去培养液，每孔加入150μL DMSO，震荡10min充分溶解，酶标仪在492nm波长检测吸光度值，计算细胞存活率，计算细胞存活率公式：存活率（PR%）=（A实验组-A空白对照组）/（A阴性对照组-A空白对照组）×100%。结果显示，1.56-400μM的蟛蜞菊内酯对RAW264.7细胞的增殖具有抑制作用，并呈时间、剂量依赖性。6.25μM的蟛蜞菊内酯作用24h可抑制RAW264.7细胞的增殖，增殖率降至82.73%，本文档来自技高网...
【技术保护点】
蟛蜞菊内酯在制备预防或治疗骨质疏松症药物或保健品中的应用。
【技术特征摘要】
1.蟛蜞菊内酯在制备预防或治疗骨质疏松症药物或保健品中的应用。
2.按照权利要求1所述应用，其特征在于：蟛蜞菊内酯对前破骨细胞增殖具有
明显抑制作用，并能抑制破...
【专利技术属性】
技术研发人员：肖红斌，程孟春，刘艳秋，王莉，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。