本发明专利技术涉及抗菌肽AWRK6在制备治疗二型糖尿病药物中的应用。抗菌肽AWRK6，分子量为2130.5，二级结构，其结构主要为α-螺旋，等电点为9.60，不稳定系数为-6.74。本发明专利技术以小鼠胰岛β细胞系MIN6和二型糖尿病模型大鼠为实验材料，显示AWRK6具有明显的促胰岛素分泌活性和降血糖，并且能显著促进MIN6细胞增殖。
【技术实现步骤摘要】
抗菌肽AWRK6在制备治疗二型糖尿病药物中的应用
本专利技术属于药物应用领域，主要涉及一种抗菌肽AWRK6在制备治疗二型糖尿病药 物中的应用。
技术介绍
糖尿病是一种多病因学代谢失调而引发的慢性高血糖症，基本病理是因体内糖 类，脂类，蛋白质代谢紊乱而导致胰岛素分泌和功能障碍，患糖尿病时因机体长期处于高血 糖环境，会引起其他器官慢性病变和功能障碍，糖尿病是继心血管疾病、肿瘤之后第三大威 胁人类健康的杀手。据国际糖尿病联盟报道，预计到2025年全球将有3. 8亿人会受到糖尿 病的困扰，目前，我国糖尿病患病率居于世界第二位。随着人们生活水平不断提高，生活方 式的改变，II型糖尿病发病率日益增高。 研究表明，II型糖尿病发病的两大机制分别是胰岛素抵抗和β细胞功能障碍。越 来越多的研究表明，胰岛特别是胰岛β细胞的功能异常是II型糖尿病发病的中心环节，这 就意味着，胰岛素抵抗是II型糖尿病产生的始发因素，但胰岛β细胞功能障碍则是II型糖 尿病产生的关键因素，因此研究开发有促胰岛素释放活性的多肽类药物，通过刺激细胞分 泌胰岛素，促进胰岛细胞的增殖和再生并调节其细胞膜上受体功能已成为治疗II型糖尿病 的主攻方向。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于治疗二型糖尿病的新生代肽类药物。借助II型糖 尿病大鼠模型，通过胰岛β细胞系Min6和大鼠动物模型来分析检测新型抗菌肽AWRK6在 体内外的降血糖功能和机制。本专利技术旨在明确AWRK6促胰岛素分泌的功能和机制，将其开 发成为新型治疗II型糖尿病药物。 AWRK6 (SWVGKHGKKFGLKKHKKH)是根据东北林蛙抗菌肽 Dybowskin-2CDYa 改造而成 的新型抗菌肽，由18个氨基酸构成，分子量为2130. 5,利用HNN法预测其为二级结构，其结 构主要为α -螺旋，等电点为9. 60,不稳定系数为-6. 74,是具有较好生物稳定性的阳离子 抗囷肤。 本专利技术，通过胰岛β细胞系ΜΙΝ6和II型糖尿病大鼠模型，在体内外检测抗菌肽 AWRK6促胰岛素分泌和降血糖功能。表明，抗菌肽AWRK6能促胰岛素分泌。其作用机理是： 抗菌肽AWRK6通过调动细胞内钙库释放钙离子来引发胰岛细胞释放胰岛素。AWRK6促ΜΙΝ6 细胞通过cAMP介导的Epac2蛋白表达引起胞内钙离子浓度增加。 通过本专利技术，表明了抗菌肽AWRK6可在制备治疗二型糖尿病药物中的应用。注射 抗菌肽AWRK6 30min后模型组大鼠血糖开始下降，在ISOmin时，血糖恢复到正常水平，降 糖效果显著。更重要的是，AWRK6克服了注射胰岛素时产生的低血糖效应，实验结果表明 AWRK6对正常组大鼠并无降糖作用。 本专利技术，从动物水平上进一步说明抗菌肽AWRK6在体内模式动物中的降糖作用， 为将其开发成为新一代治疗II型糖尿病的药物提供了坚实的实验基础。 【附图说明】 图1 :抗菌肽AWRK6促小鼠胰岛β细胞MIN6分泌胰岛素结果； 图中，**表示与空白对照组相比差异极显著（ρ〈〇. 01)。 图2 :CCK-8方法检测AWRK6促小鼠胰岛β细胞细胞增殖结果； 图中，*表示与对照组相比差异显著（ρ〈0. 05)，**表示与对照组相比差异极显著 (ρ〈0. 01)。 图3 : 口服糖耐量实验（OGTT)实验结果图； 图中，*表示与正常血糖值相比差异显著（ρ < 0. 05)，**表示与正常血糖值相比 差异极显著（Ρ< 0.01)。 图4 :成模后大鼠体重比较； 图中，*表示与对照组相比差异显著（*Ρ〈0. 05)，**表示与对照组相比差异极显著 (**Ρ〈0. 01) 图5 :抗菌肽AWRK6对II型糖尿病模型大鼠降糖效果图； 图中，**表示与模型对照组相比差异显著（Ρ〈0· 01)，表示与模型对照组相比 差异极显著（P〈〇.〇〇l)。 图6 :AWRK6对正常组大鼠血糖影响结果图。 图7 :钙离子荧光探针检测AWRK6对MIN6细胞内外钙离子浓度影响图。 图8 :WesternBlot技术检测AWRK6对MIN6细胞Epac表达结果。 图9 =WesternBlot技术检测AWRK6对MIN6细胞Epac表达结果的灰度扫描柱形 图。 【具体实施方式】 一、AWRK6体外降促胰岛素分泌和促细胞增殖活性 I. AWRK6对MIN6细胞胰岛素分泌的影响 MIN6细胞是源于胰岛β细胞的细胞系，体外培养具有胰岛β细胞特征。将生长 至对数生长期的ΜΙΝ6细胞，胰酶消化后以105/ml的个数接种到24孔板，细胞贴壁过夜后， 培养1-2天，无血清高糖DMEM培养基孵育过夜，吸弃旧培养基，添加高糖KRB缓冲液预孵育 30min，实验组加入10-6M的AWRK6。用无菌管收集处理过的细胞培养上清，2000-3000rpm 离心20分钟，仔细收集上清，ELISA检测胰岛素含量。 AWRK6体外促胰岛素分泌结果如图1，结果显示AWRK6可显著促进MIN6细胞胰岛 素的分泌。 2. CCK-8检测AWRK6对MIN6细胞增殖的影响 方法：用血球计数板对MIN6单细胞悬液进行计数，以每孔4 X 104个细胞密度，将 上述细胞悬液接种到96孔板中，容积为100 μ L。过夜孵育贴壁后，弃去培养基，先用PBS轻 洗一次，每孔再加入200 μ L无血清高糖DMEM培养基，进行血清饥饿24h。 将96孔板中缓冲液弃掉，用30. 6mM高糖KRB在37°C、5%C02条件下预孵育30min， 然后将实验组设置如下： 本文档来自技高网...
【技术保护点】
抗菌肽AWRK6在制备治疗二型糖尿病药物中的应用。
【技术特征摘要】
1. 抗菌肽AWRK6在制备治疗二型糖尿病药物中的应用。2. 如权利要求1所述的应用，其特征在于：抗菌肽AWRK6在制备促进胰岛素分泌药物 中的应用。3. 如权利要求2所述的应用，其特征在于：抗菌肽AWRK6在制备促进胰岛...
【专利技术属性】
技术研发人员：王秋雨，王丹，金莉莉，黄景麟，
申请(专利权)人：辽宁大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
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