PAR4激动剂肽制造技术

本发明专利技术提供PAR4激动剂肽。这些肽可用于开发稳健的PAR4受体测定法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利
本专利技术提供与PAR4受体结合并且具有激动剂或部分激动剂活性的新的肽。肽可用于开发稳健的PAR4受体测定法。专利技术背景血栓栓塞性疾病在发达国家仍然为死亡的主导起因，尽管可利用抗凝血剂例如华法林(COUMADIN?)、肝素、低分子量肝素(LMWH)、合成的五糖和抗血小板药物例如阿司匹林和氯吡格雷(PLAVIX?)。当前的抗血小板疗法具有限制，包括提高的出血风险以及部分效力(相对心血管风险降低20-30%范围)。因此，发现和开发安全和有效的口服或肠胃外抗血栓药用于预防和治疗宽范围的血栓栓塞性疾病仍然为重要的目标。α-凝血酶为血小板聚集和脱粒的最有效的已知活化剂。血小板的活化在起因上涉及动脉粥样血栓形成脉管闭塞。通过裂解称为蛋白酶激活的受体(PARs)的G-蛋白偶联受体，凝血酶激活血小板。PARs提供它们自己的存在于N-末端细胞外域的隐蔽配体，该细胞外域通过蛋白水解裂解暴露，随后与受体分子内结合以诱导发信号(束缚配体机理；Coughlin，S. R.，Nature，407:258-264 (2000))。当蛋白水解激活后，模拟新形成的N-末端的序列的合成肽可独立于受体裂解诱导发信号。血小板在动脉粥样血栓形成事件中为关键的参与者。人血小板表达至少两种凝血酶受体，通常称为PAR1和PAR4。已充分研究PAR1的抑制剂，并且若干化合物(包括vorapaxar和atopaxar)已进入至晚期临床试验。近来，在ACS患者的TRACER III期试验中，vorapaxar不显著降低心血管事件，但是显著提高大出血的风险(Tricoci，P.等人，N. Eng. J. Med.，366(1):20-33 (2012)。因此，仍需要发现具有提高的效力和降低的出血副作用的新的抗血小板药物。存在一些PAR4抑制剂的临床前研究的早期报道。Lee，F-Y.等人，\Synthesis of 1-Benzyl-3-(5′-hydroxymethyl-2′-furyl)indazole Analogues as Novel Antiplatelet Agents (1-苄基-3-(5′-羟基甲基-2′-呋喃基)吲唑类似物作为新的抗血小板药物的合成)\，J. Med. Chem.，44(22):3746-3749 (2001)在摘要中公开了化合物\发现为选择性和有效的抑制剂或蛋白酶-激活的受体类型4 (PAR4)-依赖性血小板激活。\化合物58在Wu，C-C.等人，\ Selective Inhibition of Protease-activated Receptor 4-dependent Platelet Activation by YD-3(通过YD-3蛋白酶-激活的受体4-依赖性血小板激活的选择性抑制)\，Thromb. Haemost.，87:1026-1033 (2002)中也称为YD-3。还参见Chen，H.S.等人，\Synthesis and platelet activity(合成和血小板活性)\，J. Bioorg. Med. Chem.，16:1262-1278 (2008)。EP 1166785 A1和EP 0667345公开了可用作血小板聚集的抑制剂的各种吡唑衍生物。专利技术概述本专利技术的一些实施方案涉及肽，此类肽作为受体的激动剂或部分激动剂调节PAR4受体。相对于本领域已知的天然的PAR4激动剂序列，这些肽呈现提高的生物活性，因此使得它们成为PAR4受体测定法开发的理想候选。在一些实施方案中，PAR4激动剂肽为包含式I的氨基酸序列的分离的肽：Ala-Xaa1-Pro-Gly-Xaa2-Leu-Val (式I)其中，所述肽的氨基末端为游离的；Xaa1选自Tyr和Phe(4-F)；Xaa2选自Trp(5-OH)、(D,L)-Trp(5-Br)、D-Trp、Bzt、Tpi、His、Tza、3-Thi、3-Fur、His(Bzl)、Phe、Tyr、Phe(五-F)、2-Pya、3-Pya、4-Pya、Dpa、3-Pya(4-甲苯基)、Bip(2-甲基)、1-萘基-Ala、2-萘基-Ala、Tyr(Bzl)和苯乙烯基-Ala；和C-末端被酰胺化。在一些实施方案中，PAR4激动剂肽包含选自以下的肽：SEQ ID NO：1-8，12-16和18-34。在其它实施方案中，PAR4激动剂肽包含选自以下的肽：SEQ ID NO：2-7，12，13，15，18-24和26-34。在其它实施方案中，PAR4激动剂肽包含SEQ ID NO：3的肽。在一些实施方案中，PAR4激动剂肽基本上由或由SEQ ID NO：2的氨基酸序列组成。在其它实施方案中，PAR4激动剂肽基本上由或由SEQ ID NO：3的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，PAR4激动剂肽基本上由或由SEQ ID NO：4的氨基酸序列组成。在其它实施方案中，PAR4激动剂肽基本上由或由SEQ ID NO：5的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，PAR4激动剂肽基本上由或由SEQ ID NO：6的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，PAR4激动剂肽基本上由或由SEQ ID NO：7的氨基酸序列组成。在其它实施方案中，PAR4激动剂肽基本上由或由SEQ ID NO：12的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，PAR4激动剂肽基本上由或由SEQ ID NO：13的氨基酸序列组成。在其它实施方案中，PAR4激动剂肽基本上由或由SEQ ID NO：15的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，PAR4激动剂肽基本上由或由SEQ ID NO：18的氨基酸序列组成。在其它实施方案中，PAR4激动剂肽基本上由或由SEQ ID NO：19的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，PAR4激动剂肽基本上由或由SEQ ID NO：20的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，PAR4激动剂肽基本上由或由SEQ ID NO：21的氨基酸序列组成。在其它实施方案中，PAR4激动剂肽基本上由或由SEQ ID NO：22的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，PAR4激动剂肽基本上由或由SEQ ID NO：23的氨基酸序列组成。在其它实施方案中，PAR4激动剂肽基本上由或由SEQ ID NO：24的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，PAR4激动剂肽基本上由或由SEQ ID NO：26的氨基酸序列组成。在其它实施方案中，PAR4激动剂肽基本上由或由SEQ ID NO：27的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，PAR4激动剂肽基本上由或由SEQ ID NO：28的氨基酸序列组成。在其它实施方案中，PAR4激动剂肽基本上由或由SEQ ID NO：29的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，PAR4激动剂肽基本上由或由SEQ ID NO：30的氨基酸序列组成。在其它实施方案中，PAR4激动剂肽基本上由或由SEQ ID NO：31的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，PAR4激动剂肽基本上由或由SEQ ID NO：32的氨基酸序列组成。在其它实施方案中，PAR4激动剂肽基本上由或由SEQ本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种PAR4激动剂肽，所述肽包含式I的氨基酸序列，Ala‑Xaa1‑Pro‑Gly‑Xaa2‑Leu‑Val (式I)其中，所述肽的氨基末端为游离的；Xaa1选自Tyr和Phe(4‑F)；Xaa2选自Trp(5‑OH)、(D,L)‑Trp(5‑Br)、D‑Trp、Bzt、Tpi、His、Tza、3‑Thi、3‑Fur、His(Bzl)、Phe、Tyr、Phe(五‑F)、2‑Pya、3‑Pya、4‑Pya、Dpa、3‑Pya(4‑甲苯基)、Bip(2‑甲基)、1‑萘基‑Ala、2‑萘基‑Ala、Tyr(Bzl)和苯乙烯基‑Ala；和C‑末端被酰胺化。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.04.26 US 61/638577;2013.03.14 US 61/7815381.一种PAR4激动剂肽，所述肽包含式I的氨基酸序列，
Ala-Xaa1-Pro-Gly-Xaa2-Leu-Val (式I)
其中，
所述肽的氨基末端为游离的；
Xaa1选自Tyr和Phe(4-F)；
Xaa2选自Trp(5-OH)、(D,L)-Trp(5-Br)、D-Trp、Bzt、Tpi、His、Tza、3-Thi、3-Fur、His(Bzl)、Phe、Tyr、Phe(五-F)、2-Pya、3-Pya、4-Pya、Dpa、3-Pya(4-甲苯基)、Bip(2-甲基)、1-萘基-Ala、2-萘基-Ala、Tyr(Bzl)和苯乙烯基-Ala；和
C-末端被酰胺化。
2.权利要求1的PAR4激动剂肽，其中Xaa1为Phe(4-F)。
3.权利要求2的PAR4激动剂肽，其中Xaa2为Trp。
4.一种PAR4激动剂肽，所述肽包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列。
5.权利要求1的PAR4激动剂肽，所述肽在Val之后还包含Lys。
6.权利要求1的PAR4激动剂肽，所述肽在Val之后还包含Lys-Asn。
7.权利要求1的PAR4激动剂肽，所述肽在Val之后还包含Lys-Asn-Gly。
8.一种肽，所述肽包含式I的氨基酸序列，
Ala-Xaa1-Pro-Gly-Xaa2-Leu-Val (式I)
其中，
所述肽的氨基末端不与氨基酸稠合；
Xaa1选自Tyr和Phe(4-F)；
Xaa2选自Trp(5-OH)、(D,L)-Trp(5-Br)、D-Trp、Bzt、Tp...

【专利技术属性】
技术研发人员：MG科纳克，C马佩利，DJ里克兴格尔，
申请(专利权)人：百时美施贵宝公司，
类型：发明
国别省市：美国;US