一种阳离子聚合物作为制备纳米免疫佐剂的应用及制备方法技术

一种阳离子聚合物作为制备纳米免疫佐剂的应用及制备方法，以聚乙二醇-聚己内酯合成骨架，通过与聚乙烯亚胺结合形成阳离子纳米胶束，通过正负电荷的物理吸引完成对蛋白类抗原的表面吸附，制备一种阳离子纳米胶束-抗原颗粒复合体系。该发明专利技术合成简便、成本低廉、操作简单、重现性好、免疫增强、生物相容性好。该型纳米免疫佐剂制备方法简单易操作，成本低，制得的纳米胶束在水相中稳定分布，形貌均一且毒性低，可以使用简单的静电复合完成抗体的装载与递送，增强机体对抗原的免疫应答。

【技术实现步骤摘要】
一种阳离子聚合物作为制备纳米免疫佐剂的应用及制备方 法
本专利技术涉及免疫学领域，具体涉及一种阳离子聚合物作为制备纳米免疫佐剂的应 用及制备方法。
技术介绍
随着生物技术的不断发展，灭活疫苗的安全性已经得到了极大提高，但基于重组 抗原或纯化病原体亚单位发展而来的DNA或者多肽作为疫苗时，免疫原性很弱，限制了此 类疫苗的使用，因而需免疫佐剂来提高此类抗原的体液或细胞免疫应答效果。传统的免疫 佐剂毒性作用较大，亟需要开发更加安全、有效的新型免疫佐剂来提高新一代生物疫苗的 免疫效果。 免疫佐剂，别称非特异性免疫增生剂，本身不具有抗原性，当同抗原一起注射或提 前注射到机体后，能够增加抗原的免疫原性或者改变免疫类型。按照习惯和来源将佐剂分 为四类：传统免疫佐剂，如铝盐佐剂，明矾佐剂，油乳佐剂和弗氏佐剂等；细胞因子免疫佐 齐U，如白细胞介素-2和干扰素；天然来源免疫佐剂，如多糖佐剂，黄酮佐剂，皂苷佐剂以及 蜂胶佐剂；新型免疫佐剂，包括免疫刺激复合物佐剂，CpG0DN佐剂，脂质体佐剂和纳米佐剂 等。 不同的佐剂引起的免疫增强作用不尽相同，但作为一种良好的佐剂，必须具备： (1)无毒且副作用低，无免疫原性；（2)直接或间接激活免疫活性细胞并引起免疫细胞增 生，增强免疫效果；（3)增加抗原的表面积并保护抗原，减低抗原在体内的降解。 针对现有的免疫佐剂，分析如下：首先，现有的新型免疫佐剂多数不带正电荷，而 一定的电荷是刺激免疫细胞应答与增强抗原呈递的必要物理条件；其次，免疫佐剂的安全 性要高、免疫原性要低。实验室用的弗氏佐剂由于其副作用限制了广泛使用。最后，作为免 疫刺激的辅助增强剂，成本要尽可能低。生物重组蛋白类或者DNA类抗原的成本正在逐渐 降低，而免疫佐剂的生产成本也需相应的得打改良。 纳米胶束，作为高分子聚合物纳米颗粒的一种，直径一般不大于100nm，用于基因 药物和传统化疗药物的载体，正逐渐成为药物纳米化制剂研究的新方向。在形成纳米胶束 的聚合物中，引入阳离子聚合物嵌段，可以改变胶束的表面电荷，用于DNA或者多肽分子的 缓控制释放；同时，阳离子胶束能够刺激呈递抗原的树突状细胞（dendriticcells，DC)， 提高机体对其所递送抗原的免疫应答和有效记忆性免疫。
技术实现思路
为了解决现有技术的缺点，本专利技术利用生物相容性良好的聚乙二醇-聚己内酯作 为合成的骨架分子，引入带正电核的小分子聚合物聚乙烯亚胺，利用亲疏水相互吸引的作 用形成纳米化的阳离子聚合物体系，专利技术了本专利技术涉及免疫学领域，具体涉及一种阳离子 聚合物作为制备纳米免疫佐剂的应用及制备方法。 一种阳离子聚合物纳米免疫佐剂的制备方法，所述的制备方法包括以下步骤： (1) 将无水聚乙二醇单甲醚加入容器中，称取己内酯，滴入0. 5%w/w的辛酸亚锡，油浴 加热至120-160°C，搅拌并氮气保护条件下反应4-12h，真空冷却，加入二氯甲烷溶解反应 混合物，用提前预冷的石油醚反复沉淀并洗涤，得到MPEG-PCL; (2) 将制得的MPEG-PCL干燥并用无水二氯甲烷溶解，先加入5滴三乙胺后，逐滴加入 丙烯酰氯，在35°C、无水、氮气保护条件下反应4-8小时，用石油醚沉淀得含有碳碳双键的 MPEG-PCL； (3) 将含有碳碳双键的MPEG-PCL溶解于二氯甲烷中，滴入过量的聚乙烯亚胺的二氯甲 烷溶液，在45 °C、磁力搅拌条件下，反应24小时以上，用预冷的石油醚沉淀数次后，烘干、透 析纯化反应产物，冷冻干燥后得到MPEG-PCL-PEI三嵌段聚合物。 所述的一种阳离子聚合物纳米免疫佐剂的制备方法，所述的步骤（1)中己内酯与 聚乙二醇单甲醚的摩尔比为1. 2:1。 所述的一种阳离子聚合物纳米免疫佐剂的制备方法，所述的步骤（2)中丙烯酰氯 与MPEG-PCL的摩尔比1. 2:1。 所述的一种阳离子聚合物纳米免疫佐剂的制备方法，所述的步骤（3)中滴入过量 的聚乙烯亚胺的二氯甲烷溶液与含有碳碳双键的MPEG-PCL物质的量之比大于1。 所述的一种阳离子聚合物纳米免疫佐剂的制备方法，其特征在于，所述的 MPEG-PCL-PEI三嵌段聚合物中MWMPEe=5000,MWPa=2000,MWpei=2000。 一种阳离子聚合物作为制备纳米免疫佐剂的应用，所述的阳离子聚合物为 MPEG-PCL-PEI三嵌段聚合物。 本专利技术合成路线：本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种阳离子聚合物纳米免疫佐剂的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括以下步骤：（1）将无水聚乙二醇单甲醚加入容器中，称取己内酯，滴入0.5% w/w的辛酸亚锡，油浴加热至120‑160℃，搅拌并氮气保护条件下反应4‑12h，真空冷却，加入二氯甲烷溶解反应混合物，用提前预冷的石油醚反复沉淀并洗涤，得到MPEG‑PCL；（2）将制得的MPEG‑PCL干燥并用无水二氯甲烷溶解，先加入5滴三乙胺后，逐滴加入丙烯酰氯，在35℃、无水、氮气保护条件下反应4‑8小时，用石油醚沉淀得含有碳碳双键的MPEG‑PCL；（3）将含有碳碳双键的MPEG‑PCL溶解于二氯甲烷中，滴入过量的聚乙烯亚胺的二氯甲烷溶液，在45℃、磁力搅拌条件下，反应24小时以上，用预冷的石油醚沉淀数次后，烘干、透析纯化反应产物，冷冻干燥后得到MPEG‑PCL‑PEI三嵌段聚合物。

【技术特征摘要】
1. 一种阳离子聚合物纳米免疫佐剂的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括以 下步骤： (1) 将无水聚乙二醇单甲醚加入容器中，称取己内酯，滴入0. 5% w/w的辛酸亚锡，油浴 加热至120-160°C，搅拌并氮气保护条件下反应4-12h，真空冷却，加入二氯甲烷溶解反应 混合物，用提前预冷的石油醚反复沉淀并洗涤，得到MPEG-PCL ; (2) 将制得的MPEG-PCL干燥并用无水二氯甲烷溶解，先加入5滴三乙胺后，逐滴加入 丙烯酰氯，在35°C、无水、氮气保护条件下反应4-8小时，用石油醚沉淀得含有碳碳双键的 MPEG-PCL ； (3) 将含有碳碳双键的MPEG-PCL溶解于二氯甲烷中，滴入过量的聚乙烯亚胺的二氯甲 烷溶液，在45 °C、磁力搅拌条件下，反应24小时以上，用预冷的石油醚沉淀数次后，烘干、透 析纯化反应产物，冷冻干燥后得到MPEG-PCL-PEI三嵌段聚合物。2. 根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：师帅，罗资超，李星熠，陈浩，
申请(专利权)人：温州医科大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33