一种间接竞争酶连适配体检测土霉素残留的方法技术

本发明专利技术公开了检测食品中土霉素残留的间接竞争酶联适配体分析方法（ELAA），属于食品安全分析领域。利用人工合成的土霉素适配体代替抗体，建立了土霉素的间接竞争ELAA方法。标准曲线的线性范围为0.5-50ng/mL，半数抑制量(IC50)为6.30ng/mL，灵敏度（IC90）0.5ng/mL。以禽肉、水产品、牛奶、奶粉和蜂蜜基质添加不同浓度的土霉素后，用ELAA方法测定，加标回收率为62.1%-102%，变异系数（CV）<20%。本发明专利技术建立的方法不仅具有ELISA的操作简单、检测快速、分析容量大等优点；而且又克服了抗体制备过程繁琐、周期长、费用高的问题；适用于大批量样本检测和现场监测，具有重要的实际应用意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种检测食品中土霉素残留的酶联适配体分析方法（ELAA)，属于食品 安全分析
。
技术介绍
土霉素（Oxytetracycline，0TC)，别名5-羟基四环素，地霉素，地灵霉素，氧四环 素等，是一种广谱抗菌药物，常作为牛、猪、家禽、鱼等动物疾病的预防和感染的治疗用药， 且由于其广谱抗菌活性和低费用常被用作畜禽的抗菌促生长添加剂。但目前一些养殖者盲 目追求利益，不遵守休药期规定，造成畜禽和水产品中土霉素残留严重，经过食物链被人体 吸收后，可导致骨骼缺钙和造成肝损害，最明显的残留毒性是诱导耐药菌株。另外，土霉素 在畜禽体内60%_90%以药物原形或初级代谢产物的形式随粪尿等排泄物进入环境，给对地 表水、农田土壤甚至地下水造成污染，这将导致对人类公共健康产生严重威胁。许多国家对 抗生素残留实行监控，世界粮农组织、世界卫生组织、欧盟及我国政府规定土霉素的残留限 量不得高于l〇〇mg/kg。因此，加快对土霉素残留的检测的探究，建立高灵敏、准确、快速的检 测方法，对保障我国食品安全和消费者健康具有重要意义。 目前，检测土霉素（Tetra本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种间接竞争酶连适配体检测土霉素残留的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤:步骤一：土霉素包被原的制备；步骤二：建立测定土霉素的酶联适配体分析方法（ELAA）；步骤三：采用ELAA 对加标样品中土霉素含量的测定。

【技术特征摘要】
1. 一种间接竞争酶连适配体检测土霉素残留的方法，其特征在于，所述方法包括以 下步骤：步骤一：土霉素包被原的制备；步骤二：建立测定土霉素的酶联适配体分析方法 (ELAA);步骤三：采用ELAA对加标样品中土霉素含量的测定。2. 根据权利要求1所述的一种间接竞争酶连适配体检测土霉素残留的方法，其 特征在于：所述的包被原是采用邻联甲苯胺法将土霉素标准品通过同型双功能团试剂 (O-tolidine)与载体蛋白偶联获得的偶联物，其载体蛋白可以是BSA，也可以是OVA。3. 根据权利要求1所述的一种间接竞争酶连适配体检测土霉素残留的方法，其中 所述步骤二包括：（1).以碳酸盐缓冲溶液稀释包被抗原1 : 1600,加入酶标板中，每 孔100ii L，4°C孵育过夜，PBST缓冲液洗涤液3?5次，拍干；（2).每孔加入200ii L含 0. 1%BSA的上述碳酸盐缓冲液作为封闭液，37°C孵育2h，PBST洗涤后烘干备用；（3).用PBS 缓冲液将土霉素标准品稀释成〇, 〇. 5,1，2, 5,10, 50 ng/mL系列浓度，将上述稀释后的标准 品及处理好的样品，分别加入到各自的酶标孔中，加50 y L/孔；以适配体稀释液将生物素 标记的适配体稀释成2nmol/L，然后每孔加入50y L，37°C温育lh，然后以PBST洗涤液洗 涤3?5次，拍干；（4)将辣根过氧化物酶标记的亲和素（Avidin/HRP)用适配体稀释液以 1 : 4000进行稀释，然后每孔加入100iiL，37°C作用lh后以PBST洗涤液洗涤3?5次； 拍干；（5)每孔加入TMB显色液100iiL，37°C显色15min ;(6)加入终止液2mol/L硫酸溶 液，每孔100UL ;酶标仪450nm测吸光值，根据标准品制备的标准曲线对比计算出待测样 品的土霉素含量。4. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤（3)中所述土霉素适配体的核苷酸序 为 5, -CGT ACG GAA TTC GCT AGC GGG CGG GGG TGC TGG GGG AAT GGA GT...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢春霞，唐宗贵，罗小玲，刘长彬，康立超，李红敏，陈霞，王静，刘成江，李宇辉，侯小林，
申请(专利权)人：新疆农垦科学院，
类型：发明
国别省市：新疆;65