一种大鳞副泥鳅良种选育方法技术

本发明专利技术公开了一种大鳞副泥鳅良种选育方法。具体而言，该方法包括如下步骤：1）提供12个与生长性状相关的微卫星分子标记；2）选择亲本群体1进行电子标记并提取DNA；3）采用分子标记对亲本群体1进行基因型筛选并选定亲本群体2；4）采用分子标记对亲本群体2进行基因型筛选，分别建立具有不同纯合基因型的亲本群体3和4；5）以亲本群体3和4为繁殖群体，分别进行人工繁殖获得亲本群体5和6；6）亲本群体5和6之间进行杂交并进行规模化繁殖。与传统育种相比，该方法具有迅速、稳定、可靠的特点，实用性强、成本低、准确性高、不受环境等因素的影响，可摆脱对表型性状鉴定的依赖，缩短了育种年限，提高了育种效率，极具应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种大鱗副泥鳅良种选育方法
本专利技术属于鱼类育种学领域，具体涉及。
技术介绍
大鳞副泥鳅)属鳅科、花鳅亚科、副泥鳅属，是一种分 布于东南亚地区的小型淡水底栖鱼类，国内多分布于四川、浙江、台湾、辽宁、黑龙江等地。 体近圆筒形，头较短。口下位，马蹄形，下唇中央有一小缺口。鼻孔靠近眼，眼下无刺，鳃孔 小。头部无鳞，体鳞较泥鳅为大。须5对，其中吻须2对，口角须1对，颏须2对，各须均长， 口角须后伸可达鳃盖后缘。眼被皮膜覆盖。尾柄处皮褶棱发达，与尾鳍相连。尾柄长与高 约相等。尾鳍圆形。肛门近臀鳍起点。体背部及体侧上半部灰褐色，腹面白色。体侧具有 许多不规则的黑色褐色斑点。背鳍、尾鳍具黑色小点，其他各鳍灰白色。大鳞副泥鳅肉质鲜 美，营养丰富，富含钙、维生素A、维生素D以及多种蛋白质、氨基酸和矿物质，素有水中人 参之美誉，具有较高的食用、药用及经济价值，已发展成为我国重要的养殖对象，也是我国 出口韩国的主要水产品之一。 中国已成为全世界大鳞副泥鳅养殖规模最大的国家,江苏省大鳞副泥鳅养殖规模 又占居了全国的70%以上。然而，目前用于大鳞副泥鳅养殖的鱼种主要捕捞自天然水域，野 生苗种的质量难以保证，生长性能与养殖效果也极不稳定。众所周知，种质是水产养殖的物 质基础，良种在我国水产业从捕捞为主的产业向以养殖为主的产业的转变过程中起到的作 用不容小觑。传统良种培育技术基本上分为两类：遗传操作和选择操作，遗传操作技术最为 成功的是杂交育种技术，选择操作技术则主要有家系和群体选育。杂交选育面临引入不良 性状尚需多代回交的问题；传统选育要想建成目标品种，至少需要经过多代（4-5代）人工 选择才能育成优良品种(遗传稳定、在生物学、形态学和经济性状基本一致的有一定数量的 群体)。传统选择操作的弊端在于对基因型富集的解释和控制近亲繁殖的方法尚处于经验 阶段，仅间接利用现代遗传学理论，概念模糊，操作和理论间缺乏等价关系，以致育种过程 出现优良品种杂合度低，有害基因通过纯合而表现出来，杂合度和多态性下降，有综合经济 性状下降的隐患。 随着分子生物学和基因组学在水产遗传育种上的应用，多种分子标记(如SSR/SNP 等)出现及应用有效地解决了上述问题。然而，国内外目前尚未开始大鳞副泥鳅的系统遗传 选育工作，特别是分子标记辅助选育，优质苗种的缺乏已严重制约了大鳞副泥鳅养殖业的 发展，因此亟待开发出一种大鳞副泥鳅的良种选育方法。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供了，从而可以 快速选育出质量可靠、生长性能与养殖效果稳定的大鳞副泥鳅优良品种，此项技术适用于 有较大规模的良种场或国家良种基地进行大鳞副泥鳅的良种选育。 为了实现上述目的，本专利技术通过以下技术方案来实现： ，其包括以下步骤： 1) 提供12个与生长性状相关的微卫星分子标记，其各自对应的引物如下所示： 微卫星分子标记Pda48 的引物：L:5' -TGAGGCACITTGTTTACGCTC-3' ； R:5, -GCTCATGGGACACAAGATGG-3,； 微卫星分子标记Pda66 的引物：L:5' -TACCCTGTGCTAAGGAGGC-3' ； R:5' -AGAGGGAACGGCCAACAG-3,； 微卫星分子标记Pdal74 的引物：L:5' -GTCGGACCTGAAGAGGCAC-3' ； R:5' -TGCCGTCTGTCATCCATGC-3' ； 微卫星分子标记Pda242 的引物：L:5' -TGCCAGCAAITGACATAAAGGG-3' ； R:5' -GATTTCTCAAGCCCAGCGG-3' ； 微卫星分子标记Pda247 的引物：L:5' -ATAGTGCCCGITTCCTGCC-3' ； R:5' -TGGTGAAAGAGTGAAACAATTACC-3' ；微卫星分子标记Pda260 的引物：L: 5' -GCTCTGCTCCGAACATTCC-3' ； R:5' -CTTTCCGTCGCACCTTTCC-3' ； 微卫星分子标记Pda288 的引物：L:5' -AGGTGTGGITTCAGGITGC-3' ； R:5, -ACAGAGGAAACCGGTGAGG-3,； 微卫星分子标记Pda301 的引物：L:5' -CCTGTAGirGACCCAITTCGC-3' ； R:5' -AGAAGGGTGACTTGTCCAAAC-3' ； 微卫星分子标记Pda310 的引物：L:5' -GGGTCTCCACAGTGACGC-3' ； R:5, -CGCTGTCTGAGTGATCCCG-3,； 微卫星分子标记Pda315 的引物：L:5' -ACATCCTGCCTGAGGITCC-3' ； R:5, -TCTTAATGATGACGGCAGAGC-3,； 微卫星分子标记Pda316 的引物：L:5' -TGAGTGGCACGCTCCAAG-3' ； R:5, -CGAGGCCAAACTAACTGCG-3,； 微卫星分子标记Pda371 的引物：L:5' -CTGGITTCAACGGTGGACG-3' ； R:5' -GTGCGTGTCCCTGAACTTG-3' ； 2) 选择体型、体色正常，无病无伤的大鳞副泥鳅个体作为备选亲本群体1，对备选亲本 群体1中的所有个体进行电子标记，并提取DNA; 3) 采用Pda66、Pdal74、Pda242、Pda247、Pda260、Pda288、Pda310、Pda316、Pda371 对备 选亲本群体1进行基因型筛选，选取基因型为AA(对应Pda66)、FF(对应Pdal74)、EE(对应 Pda242)、NN(对应Pda247)、CC(对应Pda260)、CC或DD(对应Pda288)、CC(对应Pda310)、 BB或AA(对应Pda316)、AA或BB(对应Pda371)的个体作为备选亲本群体2 ; 4) 采用Pda48、Pda301、Pda315对备选亲本群体2进行基因型筛选，获得基因型分别为 AA或FF(对应Pda48)、AA或BB(对应Pda301)、BB或CC(对应Pda315)的个体，将同一基 因位点具有相同基因型的个体进行单独培育，分别建立备选亲本群体3和备选亲本群体4 ; 5) 以备选亲本群体3为繁殖群体，进行人工繁殖一代获得后备亲本群体5 ;以备选亲本 群体4为繁殖群体，进行人工繁殖一代获得后备亲本群体6 ; 6) 按照亲本群体5中的雌性个体X亲本群体6中的雄性个体或亲本群体5中的雄性 个体X亲本群体6中的雌性个体的配对方式进行规模化繁殖，即可获得大鳞副泥鳅良种， 完成选育过程。 在实际生产操作中，当步骤6)完成之后，可以重复步骤2)至步骤6)的操作，并监 控选育系遗传背景，防止近亲交配。 优选的，在上述方案中，步骤1)中所述微卫星分子标记依下法获得： a) 选取不同年龄及性别的大鳞副泥鳅，采集多种组织并提取RNA，等量移取并混合成 总RNA，分离出mRNA，反转录获得cDNA文库，PCR扩增富集后回收目的片段，定量后采用第 二代高通量测序平台（IlluminaHiseq2000平台）进行测序，测序后采用序列组装软件 (T本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种大鳞副泥鳅良种选育方法，其包括以下步骤：1）提供12个微卫星分子标记，其各自对应的引物如下所示：微卫星分子标记Pda48的引物： L：5’‑TGAGGCACTTTGTTTACGCTC‑3’；R：5’‑GCTCATGGGACACAAGATGG‑3’；微卫星分子标记Pda66的引物： L：5’‑TACCCTGTGCTAAGGAGGC‑3’；R：5’‑AGAGGGAACGGCCAACAG‑3’；微卫星分子标记Pda174的引物：L：5’‑GTCGGACCTGAAGAGGCAC‑3’；R：5’‑TGCCGTCTGTCATCCATGC‑3’；微卫星分子标记Pda242的引物：L：5’‑TGCCAGCAATTGACATAAAGGG‑3’；R：5’‑GATTTCTCAAGCCCAGCGG‑3’；微卫星分子标记Pda247的引物：L：5’‑ATAGTGCCCGTTTCCTGCC‑3’；R：5’‑TGGTGAAAGAGTGAAACAATTACC‑3’； 微卫星分子标记Pda260的引物：L：5’‑GCTCTGCTCCGAACATTCC‑3’；R：5’‑CTTTCCGTCGCACCTTTCC‑3’；微卫星分子标记Pda288的引物：L：5’‑AGGTGTGGTTTCAGGTTGC‑3’；R：5’‑ACAGAGGAAACCGGTGAGG‑3’；微卫星分子标记Pda301的引物：L：5’‑CCTGTAGTTGACCCATTTCGC‑3’；R：5’‑AGAAGGGTGACTTGTCCAAAC‑3’；微卫星分子标记Pda310的引物：L：5’‑GGGTCTCCACAGTGACGC‑3’；R：5’‑CGCTGTCTGAGTGATCCCG‑3’；微卫星分子标记Pda315的引物：L：5’‑ACATCCTGCCTGAGGTTCC‑3’；R：5’‑TCTTAATGATGACGGCAGAGC‑3’；微卫星分子标记Pda316的引物：L：5’‑TGAGTGGCACGCTCCAAG‑3’；     R：5’‑CGAGGCCAAACTAACTGCG‑3’；微卫星分子标记Pda371的引物：L：5’‑CTGGTTTCAACGGTGGACG‑3’；R：5’‑GTGCGTGTCCCTGAACTTG‑3’；2）选择体型、体色正常，无病无伤的大鳞副泥鳅个体作为备选亲本群体1，对备选亲本群体1中的所有个体进行电子标记，并提取DNA；3）采用Pda66、Pda174、Pda242、Pda247、Pda260、Pda288、Pda310、Pda316、Pda371对备选亲本群体1进行基因型筛选，选取基因型为Pda66对应的AA、Pda174对应的FF、Pda242对应的EE、Pda247对应的NN、Pda260对应的CC、Pda288对应的CC或DD、Pda310对应的CC、Pda316对应的BB或AA、Pda371对应的AA或BB的个体作为备选亲本群体2；4）采用Pda48、Pda301、Pda315对备选亲本群体2进行基因型筛选，获得基因型分别为Pda48对应的AA或FF、Pda301对应的AA或BB、Pda315对应的BB或CC的个体，将同一基因位点具有相同基因型的个体进行单独培育，分别建立备选亲本群体3和备选亲本群体4；5）以备选亲本群体3为繁殖群体，进行人工繁殖一代获得后备亲本群体5；以备选亲本群体4为繁殖群体，进行人工繁殖一代获得后备亲本群体6；6）按照亲本群体5中的雌性个体×亲本群体6中的雄性个体或亲本群体5中的雄性个体×亲本群体6中的雌性个体的配对方式进行规模化繁殖，即可获得大鳞副泥鳅良种，完成选育过程。...

【技术特征摘要】
1. 一种大鳞副泥鳅良种选育方法，其包括以下步骤： 1) 提供12个微卫星分子标记，其各自对应的引物如下所示： 微卫星分子标记 Pda48 的引物：L :5' -TGAGGCACITTGTTTACGCTC-3' ； R:5, -GCTCATGGGACACAAGATGG-3,； 微卫星分子标记 Pda66 的引物：L :5' -TACCCTGTGCTAAGGAGGC-3' ； R :5' -AGAGGGAACGGCCAACAG-3,； 微卫星分子标记 Pdal74 的引物：L :5' -GTCGGACCTGAAGAGGCAC-3' ； R:5' -TGCCGTCTGTCATCCATGC-3' ； 微卫星分子标记 Pda242 的引物：L :5' -TGCCAGCAAITGACATAAAGGG-3' ； R:5' -GATTTCTCAAGCCCAGCGG-3' ； 微卫星分子标记 Pda247 的引物：L :5' -ATAGTGCCCGITTCCTGCC-3' ； R :5' -TGGTGAAAGAGTGAAACAATTACC-3' ；微卫星分子标记 Pda260 的引物：L : 5' -GCTCTGCTCCGAACATTCC-3' ； R:5' -CTTTCCGTCGCACCTTTCC-3' ； 微卫星分子标记 Pda288 的引物：L :5' -AGGTGTGGITTCAGGITGC-3' ； R :5, -ACAGAGGAAACCGGTGAGG-3,； 微卫星分子标记 Pda301 的引物：L :5' -CCTGTAGirGACCCAITTCGC-3' ； R：5, -AGAAGGGTGACTTGTCCAAAC-3,； 微卫星分子标记 Pda310 的引物：L :5' -GGGTCTCCACAGTGACGC-3' ； R:5, -CGCTGTCTGAGTGATCCCG-3,； 微卫星分子标记 Pda315 的引物：L :5' -ACATCCTGCCTGAGGITCC-3' ； R:5, -TCTTAATGATGACGGCAGAGC-3,； 微卫星分子标记 Pda316 的引物：L :5' -TGAGTGGCACGCTCCAAG-3' ； R:5, -CGAGGCCAAACTAACTGCG-3,； 微卫星分子标记 Pda371 的引物：L :5' -CTGGITTCAACGGTGGACG-3' ； R:5' -GTGCGTGTCCCTGAACTTG-3' ； 2) 选择体型、体色正常，无病无伤的大鳞副泥鳅个体作为备选亲本群体1，对备选亲本 群体1中的所有个体进行电子标记，并提取DNA ; 3) 采用 Pda66...

【专利技术属性】
技术研发人员：凌去非，李彩娟，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32