具有蛋白酶活性的多肽在动物饲料和洗涤剂中的用途制造技术

本发明专利技术涉及具有蛋白酶活性的分离的多肽以及编码这些多肽的分离的多核苷酸在动物饲料和洗涤剂中的用途。本发明专利技术还涉及包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体以及宿主细胞，连同生产这些多肽以及在例如动物饲料和洗涤剂中使用这些多肽的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】[0001 ] 对序列表的引用 本申请包含一个计算机可读形式的序列表，将其通过引用结合在此。 专利技术背景 专利
本专利技术涉及具有蛋白酶活性的分离的多肽在动物饲料和洗涤剂中的用途。本专利技术 还涉及编码这些蛋白酶的分离的核酸序列在具有蛋白酶活性的分离的多肽的重组产生中 的用途以及编码这些蛋白酶的分离的核酸序列。本专利技术还涉及包含这些核酸序列的核酸构 建体、载体和宿主细胞（包含植物和动物细胞），以及生产和使用（尤其在动物饲料和洗涤 剂中使用这些蛋白酶）这些蛋白酶的方法。 相关技术说明 S1组以及分离自糖多孢菌的蛋白酶在本领域中是已知的。一种来自红色糖多孢菌 (Saccharopolyspora erythrea)的蛋白酶由奥林利克（Oliynyk)等人于2007年披露于'产 生红霉素的细菌红色糖多孢菌NRRL23338的全基因组序列（Complete genome sequence of the erythromycin-producing bacterium Saccharopolyspora erythraea NRRL23338)'， 自然生物技术（Nat.Biotechnol.)25:447-453中。该全基因组序列在登录号AM420293下 被提交至EMBL/GenBank。该氨基酸序列（uniprot:A4FNQ0)与SEQ ID N0:2(在此）的序 列相同并且成熟的氨基酸序列被披露于SEQ ID N0:5中。 其他Sl蛋白酶被披露于现有技术中，例如由帕蒂（Pati)等人于2009年， '绿色糖单孢菌型菌株（PlOlT)的全基因组序列（Complete genome sequence of Saccharomonospora viridis type strain (PlOlT))J, ^； |3(Stand. Genomic Sci. ),1:141-149描述的与SEQ ID NO: 5具有80. 7%的序列一致性的蛋白酶（Uniprot: C7MV18, SEQ ID NO:9)。鑫（Yum)等人已经在'来自嗜碱链霉菌属的碱性丝氨酸蛋白酶 的纯化及表征(Purification and characterization of alkaline serine protease from an alkalophilic Streptomyces sp·)'，生物科学，生物技术以及生物化学（Biosci. Biotechnol. Biochem.) ,58:470-474 (1994)中描述了一种与 SEQ ID NO: 5 具有 70. 4% 的序 列一致性的蛋白酶（Uniprot :Q55353, SEQ ID NO: 10)。 卢卡斯（Lucas)等人已经向EMBL/GenBank提交了一种来自新疆糖单孢菌 (Saccharomonospora xinjiangensis) XJ-54 的与 SEQ ID NO: 5 具有 79. 6%序列一致性的蛋 白酶（Uniprot :I0V8H8, SEQ ID N0:11)并且向向EMBL/GenBank提交了另一种来自深蓝糖 单抱菌（Saccharomonospora cyanea)NA_134 的与 SEQ ID N0:5 具有 79. 0%序列一致性的 蛋白酶（Uniprot :H5XEH4, SEQ ID NO: 12)。已经向EMBL/GenBank提交了一种来自弱代谢 糖单抱菌（Saccharomonospora paurometabolica)YIM90007 的与 SEQ ID NO: 5 具有 76. 1% 序列一致性的另外的蛋白酶（Uniprot :G4J6Q2, SEQ ID NO: 13)。 在专利文献中，一种来自链霉菌属的与Uniprot :Q55353(在此的SEQ ID NO: 10) 相同的蛋白酶披露于 WO 2005/052146(SEQ ID N0:649, GeneseciP :AEA48820)中并且另一 种蛋白酶披露于 WO 2005/052161 (SEQ ID N0:649，Geneseqp:AEA80317)中，两者与 SEQ ID NO: 5均具有70. 4%的序列一致性，用于在动物饲料和洗涤剂组合物中使用。其他已知的蛋 白酶具有约70 %或低于70 %的序列一致性。 在动物饲料中使用蛋白酶以改善饲料中蛋白的消化是已知的。涉及一种来自链 霉菌属的与SEQ ID N0:2当前指示的蛋白酶具有66% -致性的蛋白酶（链霉菌属1AG3蛋 白酶）的WO 2009/058679和US 2009/0111161提及这些蛋白酶在动物饲料中的用途。WO 95/28850披露了一种肌醇六磷酸酶与一种或多种微生物蛋白水解酶组合以改善植物性蛋 白的溶解度。WO 01/58275披露了枯草杆菌蛋白酶家族的酸稳定性蛋白酶在动物饲料中的 用途。WO 01/58276披露了与以下蛋白酶相关的酸稳定性蛋白在动物饲料中的用途：衍生 自拟诺卡菌NRRL 18262 (10R蛋白酶）的蛋白酶，连同衍生自白拟诺卡氏菌DSM 14010的一 种蛋白酶。WO 04/072221、WO 04/111220、WO 04/111223、WO 05/035747、和 WO 05/123911 披露了与IOR蛋白酶相关的蛋白酶及其在动物饲料中的用途。另外，WO 04/072279披露了 其他蛋白酶在动物饲料中的用途。 WO 04/034776披露了一种枯草杆菌蛋白酶/角蛋白酶，来自地衣芽孢杆菌的 PWD-I，在家禽饲料中的用途。WO 04/077960披露了一种通过采用一种细菌或真菌蛋白酶增 加草料或谷物在反刍动物中的消化率的方法。 包含一种蛋白酶的并且销售以用于在动物饲料中使用的商业产品包含 RONOZYMI.:* ProAct(DSM NP/诺维信公司（Novozymes))、Αχ_(? (丹尼斯克公司 (Danisco))、 Avizyme? (丹尼斯克公司）、Porzyme? (丹尼斯克公司）、Allzyme?(奥 特奇公司（Alltech))、Versazyme? (生物资源有限公司（BioResources，Int.)、 Poultrygrow?(杰夫公司（Jefo))和 Cibenza?DP100 (诺伟思公司（Novus))。 专利技术概述 专利技术背景 在动物饲料中使用蛋白酶（体内），和/或这类的蛋白酶用于处理植物性蛋白（体 外）的用途中，注意的是蛋白对于动物和人类是必需营养因子。大部分家畜和许多人从植 物性蛋白来源获得这些必需蛋白。重要的植物性蛋白来源是例如油籽作物、豆类和谷类。 当例如大豆粉包含在单胃动物如猪和家禽的饲料中时，相当比例的大豆饼粉固体 未被有效地消化（在小猪、生长猪和家禽如肉仔鸡、蛋鸡和公鸡中的表观回肠蛋白消化率 仅是80%左右）。 动物的胃肠道是由一系列各自呈现不同pH环境的段组成。在单胃动物如猪和家 禽以及许多鱼中，胃展现了低至PH1-2的强酸性pH，而肠展现了在pH6-7范围内的一个更中 性的pH。除了胃和肠之外在胃之前家禽还具有一个嗉囊，该嗉囊中的pH主要取决于咽下 的饲料并因此典型地处于PH4-6的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有蛋白酶活性的分离的多肽，该分离的多肽选自下组，该组由以下各项组成：(a)一种与SEQ ID NO:5具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性的多肽；(b)一种由在高严谨度条件、或非常高严谨度条件下与以下各项杂交的多核苷酸编码的多肽：(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列；(ii)SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列；和/或(iii)(i)或(ii)的全长互补链；(c)一种由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1和/或SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性；(d)包含SEQ ID NO:5的一个或多个(若干个)氨基酸的取代、缺失和/或插入的变体；以及(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的一个片段，该片段具有蛋白酶活性；在动物饲料和洗涤剂组合物中的用途。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.01.26 EP 12152669.31. 一种具有蛋白酶活性的分离的多肽，该分离的多肽选自下组，该组由以下各项组 成： (a) -种与SEQ ID N0:5具有至少80%，例如至少85%、至少86%、至少87%、至少 88%、至少89%、至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少 96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列一致性的多肽； (b) -种由在高严谨度条件、或非常高严谨度条件下与以下各项杂交的多核苷酸编码 的多肽： (i) SEQ ID NO:l的成熟多肽编码序列； (ii) SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列；和/或 (iii) (i)或（ii)的全长互补链； (c) 一种由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO: 1和/或SEQ ID NO: 3 的成熟多肽编码序列具有至少80%，例如至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少 89%、至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少 97%、至少98%、至少99%、或100%序列一致性； (d) 包含SEQ ID NO:5的一个或多个（若干个）氨基酸的取代、缺失和/或插入的变 体；以及 (e) (a)、（b)、（c)或（d)的多肽的一个片段，该片段具有蛋白酶活性； 在动物饲料和洗涤剂组合物中的用途。2. 如权利要求1所述的用途，其中该多肽由在高严谨度条件、或非常高严谨度条件下 与以下各项杂交的多核苷酸编码： (i) SEQ ID N0:1的成熟多肽编码序列； (ii) SEQ ID N0:3的成熟多肽编码序列；和/或 (iii) (i)或（ii)的全长互补链。3. 如权利要求1-2中任一项所述的用途，其中该多肽包含SEQ ID N0:2或由其组成。4. 如权利要求1-2中任一项所述的用途，其中该多肽包含SEQ ID N0:4或由其组成。5. 如权利要求1-4中任一项所述的用途，其中该多肽是SEQ ID N0:2，SEQ ID N0:4;和 /或SEQ ID N0:5的一个片段，其中该片段具有蛋白酶活性。6. -种具有蛋白酶活性并且与SEQ ID NO:5具有至少85%，例如至少86%、至少87%、 至少88%、至少89%、至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至 少96 %、至少97 %、至少98 %、或至少99 %序列一致性的变体多肽，该变体多肽包含SEQ ID NO:5的至少一个或多个（若干个）氨基酸的至少一个取代、缺失和/或插入。7. -种包含具有蛋白酶活性的分离的多肽的组合物，该分离的多肽选自下组，该组由 以下各项组成： (a) -种与SEQ ID N0:5具有至少80%，例如至少85%、至少86%、至少87%、至少 88%、至少89%、至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少 96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列一致性的多肽； (b) -种由在高严谨度条件、或非常高严谨度条件下与以下各项杂交的多核苷酸编码 的多肽： (i)SEQ ID N0:1的成熟多肽编码序列； (ii) SEQ ID N0:3的成熟多肽编码序列；和/或 (iii) (i)或（ii)的全长互补链； (c) 一种由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO: 1和/或SEQ ID NO: 3 的成熟多肽编码序列具有至少80%，例如至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少 89%、至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少 97%、至少98%、至少99%、或100%序列一致性； (d) 包含SEQ ID NO:5的一个或多个（若干个）氨基酸的取代、缺失和/或插入的变 体；以及 (e) (a)、（b)、（c)或（d)的多肽的一个片段，该片段具有蛋白酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·P·奥林斯基，T·霍夫，P·R·厄斯特高，C·舍霍尔姆，K·F·蓬托皮丹，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK