一种免疫层析试纸的非诊断性检测方法技术

本发明专利技术公开了一种免疫层析试纸的非诊断性检测方法，该方法采用免疫磁性纳米颗粒制备免疫层析试纸，检测时，采用过氧化物酶底物显色反应进行结果判定。利用所述免疫层析试纸的检测方法准确可靠，灵敏度大大提高，比一般胶体金检测试纸灵敏度高10-100倍，操作简单，不需要检测仪器，通过肉眼即可得到检测结果。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了，该方法采用免疫磁性纳米颗粒制备免疫层析试纸，检测时，采用过氧化物酶底物显色反应进行结果判定。利用所述免疫层析试纸的检测方法准确可靠，灵敏度大大提高，比一般胶体金检测试纸灵敏度高10-100倍，操作简单，不需要检测仪器，通过肉眼即可得到检测结果。【专利说明】
本专利技术涉及生物技术检测领域，具体涉及一种免疫层析试剂的非诊断性检测方法。
技术介绍
目前，快速检测的技术有很多，但是能够在很短时间内就可判断结果的技术却很少，其中，免疫层析技术是一种独特的免疫分析方式，该方法的核心技术是以条状纤维层析材料为固相，通过毛细管作用使样品溶液在层析材料上泳动，并同时使样品中经标记物标记的待测物与包被在层析材料上针对待测物的受体(如抗原或抗体)发生特异性结合而聚集显色。它既有免疫学方法的特异性，又有简便快速不需仪器的特点。 现有技术中的免疫层析试纸检测方法大多采用胶体金标记方法，但胶体金连接了待标记抗体或待标记蛋白之后，很不稳定，很容易因电荷的变化使得抗体脱离，造成每个胶体金的标记抗体量大大减少，从而造成灵敏度的降低；并且胶体金试剂的制备采用氯金酸，试剂成本比较高，导致免疫层析试纸的总体成本比较高。 目前也有采用免疫磁珠进行免疫层析试纸的检测，其原理是利用免疫磁珠的磁性，通过检测磁场信号进行结果的判断，其缺点是必须通过检测仪器进行结果判断，通过检测仪器将磁场信号的生物学信号进一步以电信号方式输出，判断结果，如果没有磁性检测仪，检测结果得不到保证。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术的不足，提供，该方法具有免疫层析试纸和酶联免疫级联放大的两者的优点，既实现快速检测的目的，又有效地提高检测灵敏度，且检测方法操作方便简单，获得检测结果快速，也不需要仪器进行结果的判定；而且试剂成本低。 为达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案。 —种免疫层析试纸的非诊断性检测方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)、通过将标记后的？6304磁性纳米颗粒喷涂于玻璃纤维膜上，制备免疫磁性纳米颗粒结合垫； (2)、制备包被有检测线和质控线的包被膜； ⑶、处理样品垫； (4)、组装试纸条:将所述步骤(3)处理后的样品垫、所述步骤(1)制备的免疫磁性纳米颗粒结合垫、所述步骤(2)制备好的包被膜和吸水垫依次贴在底衬卡上，得到免疫层析试纸； (5)、样品检测:将待检样本加入到步骤(4)中所述免疫层析试纸的样品垫，再将过氧化物酶底物滴加于样品垫，进行结果的判定。 如上所述的非诊断性检测方法，优选地，所述步骤(1)包括:用与待检项目相结合的抗原或抗体标记？6304磁性纳米颗粒，将标记后的磁性纳米颗粒喷涂于玻璃纤维膜上，制备成免疫磁性纳米颗粒结合垫。 如上所述的非诊断性检测方法，优选地，所述步骤(1)中在待检项目相结合的抗原或抗体标记？6304磁性纳米颗粒之前，所述？6304磁性纳米颗粒进行羧基化修饰。 如上所述的非诊断性检测方法，优选地，步骤(2)中，所述检测带包被有与待检项目结合的抗体或抗原，所述质控带包被有与上述磁性纳米颗粒标记的抗原或抗体特异性结合的反应物。 如上所述的非诊断性检测方法，优选地，所述步骤⑶处理样品垫具体为:将含有体积比为0.5%?2%吐温20、邱=7.2?7.6的？83，喷涂于样品垫上，烘干或自然干燥后待用。 如上所述的非诊断性检测方法，优选地，所述步骤(2)中包被膜为硝酸纤维素膜，所述步骤(3)中样品垫为玻璃纤维膜，所述步骤(4)中吸水垫为吸水纸或纯棉绒浆滤纸。 如上所述的非诊断性检测方法，优选地，所述过氧化物酶底物为邻苯二胺体系、四甲基联苯胺体系、3.3 一二氨基联苯胺体系或2.2’ -边氮基-双3-乙基苯并噻卩比咯啉-6横酸体系中的任一种。 如上所述的非诊断性检测方法，优选地，所述四甲基联苯胺体系包括:四甲基联苯胺和过氧化氢，所述四甲基联苯胺的质量浓度为0.011118/1111?101118/1111，所述过氧化氢的摩尔浓度为 0.25111 11101/1 ?1.2111 11101/1。 如上所述的非诊断性检测方法，优选地，所述四甲基联苯胺体系配制方法如下先将四甲基联苯胺溶于二甲基亚砜，再将加入蒸馏水定容，获得纟液； 幻先配制质量浓度为0.5%?30%的过氧化氢尿素溶液，之后称取柠檬酸、磷酸氢二纳，加入过所述氧化氢尿素溶液，用蒸馏水定容，所述柠檬酸的终浓度为0.111101/1、所述磷酸氢二纳的终浓度为0.211101/1，所述过氧化氢尿素的摩尔浓度为0.5111 11101/1?2.4111001/1，获得8液； 0)将上述八液与8液等体积混合获得118应用液备用。 如上所述的非诊断性检测方法，优选地，所述制备的免疫层析试纸还包括通过如下方法进行验证:利用所述制备好的试纸条对阴性样品进行检测时，只有质控带显色，对含有待检项目的物质进行检测时，检测带与质控带均显色，免疫层析试纸合格，用于待检项目的检测。 上述对制备的免疫层析试纸做验证试验，有效保证试纸的有效性和准确性，避免假阴性试验结果的出现。 本专利技术提供一种采用新型免疫层析试纸进行病原检测，采用可以很容易获得的磁性纳米颗粒，磁性纳米颗粒经羧基化修饰后，再进行抗原或抗体标记，标记后形成免疫磁珠，该免疫磁珠比较稳定，能有效结合待检的目标物，不会导致假阴性结果，从而避免出现漏检。判断结果时，利用？6304磁性纳米颗粒具有过氧化物酶的特性，加入过氧化物酶的底物显色后，判断检测结果，通过酶联的级联扩大反应，使灵敏度大大提高，可比胶体金检测灵敏度高10-100倍的数量级，且不需要检测仪器进行结果的检测。本专利技术的免疫层析试纸制备时，采用成本较低的试剂，使总的检测成本降低。 【专利附图】【附图说明】 图1是本专利技术免疫层析试纸检测方法的流程图。 图2是本专利技术免疫层析试纸检测结果。 图3是胶体金免疫层析试纸检测结果。 【具体实施方式】 目前有利用四氧化三铁纳米颗粒进行检测，主要是利用其具有磁响应性的功能，对待检目的物进行富集分离的，可有效提高检测率。四氧化三铁纳米颗粒还具有辣根过氧化物酶催化底物变色的特性，但是利用这个特性进行21^1“检测鲜有报道，主要原因可能是一方面考虑到由于四氧化三铁纳米颗粒的量子化尺寸效应等，使它对某种波长的光吸收带有蓝移现象，并对各种波长光的吸收有宽化现象，认为对检测需要测量吸光度值不是很准确；另一方面，由于四氧化三铁本身具有的颜色，会对后续测定吸光度值有影响，所以认为利用四氧化三铁纳米颗粒具有辣根过氧化物酶的特性进行免疫学方法的检测，尤其是检测，结果不是很准确、可靠，有一定的技术偏见。 本专利技术利用四氧化三铁具有辣根过氧化物酶催化的特性，即能催化邻苯二胺体系即含有过氧化氢和邻苯二胺(090)、四甲基联苯胺体系即含有过氧化氢和四甲基联苯胺(118)的溶液、3.3 一二氨基联苯胺即含有过氧化氢和3.3 一二氨基联苯胺(1^8)的溶液，或2.2’ -边氮基-双3-乙基苯并噻吡咯啉-6磺酸即含有过氧化氢和2.2’ -边氮基-双3-乙基苯并噻吡咯啉-6磺酸(八813)的溶液显色的特点，首次将四氧化三铁纳米颗粒利用到免疫层析试纸上进行抗原抗体的检测，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫层析试纸的非诊断性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)、通过将标记后的Fe3O4磁性纳米颗粒喷涂于玻璃纤维膜上，制备免疫磁性纳米颗粒结合垫；(2)、制备包被有检测线和质控线的包被膜；(3)、处理样品垫；(4)、组装试纸条：将所述步骤(3)处理后的样品垫、所述步骤(1)制备的免疫磁性纳米颗粒结合垫、所述步骤(2)制备好的包被膜和吸水垫依次贴在底衬卡上，得到免疫层析试纸；(5)、样品检测：将待检样本加入到步骤(4)中所述免疫层析试纸的样品垫，再将过氧化物酶底物滴加于样品垫，进行结果的判定。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杨宇，王静，赵婷婷，徐宝梁，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11