治疗剂的选择方法技术

本发明专利技术涉及检测治疗性候选物的脱靶结合的方法。此测定法尤其可以在抗体先导物生成或优化期间使用以增加获得合适的药物的概率。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】治疗剂的选择方法相关申请的交叉参考本申请要求2012年5月23日提交的美国临时申请号61/650,964的权益，所述临时申请以其整体并入本文作为参考。
本专利技术涉及用于鉴定治疗剂的选择方法，所述治疗剂具有在人或人和食蟹猴中具有快速清除的增加的风险，和降低此类治疗剂的清除的方法。背景人或人源化单克隆抗体已经广泛地成功用作人类疾病的治疗剂。多于30种抗体已经收到了FDA许可用于治疗多种病症，同时上百种更多的抗体目前处于临床开发中1。除了使用抗体治疗剂能够达到的精确的选择性和高效价之外，抗体作为药物的成功很大地得益于其通常长的循环半寿期。从血液中缓慢清除使得能够以不频繁的给药实现期望的药物浓度。抗体药物通常经由静脉内输注或皮下注射施用，并且较不频繁的施用提高了患者依从和因此临床益处。抗体可以通过若干种机制从全身循环中消除-液相内吞作用后的细胞内分解代谢(非特异性清除)，抗原介导的清除4，和在一些情况下由于形成抗治疗抗体(ATA)。抗原介导的清除通常在抗体结合与细胞结合的抗原时观察到，并且在低浓度抗体时最为明显，并且通常可以通过增加抗体剂量饱和。已经观察到ATA在给药后4-7天出现，涉及形成免疫复合物，所述免疫复合物可以被快速清除，并且有些时候可以从抗体的血浆浓度-时间谱的非典型形状容易地检测到。通过FcRn依赖性回收机制减缓抗体消除。当抗体穿过内吞作用途径时，其可以在pH<6时结合FcRn。与FcRn结合保护IgG免受分解代谢并且促进回到顶端细胞表面，在此其可以在血液的pH(>7)快速释放。这些特征导致人或人源化抗体在人中半寿期为6-32天(Keizer,R.J.,Huitema,A.D.R.,Schellens,J.H.M.,Beijnen,J.H.ClinicalPharmacokineticsofTherapeuticMonoclonalAntibodies.ClinicalPharmacokinetics49,493-507(2010))。在12种IgG1抗体的药物代谢动力学数据的基础上，测定了人中清除的平均值为3.9±1.2(S.D.)mL/kg/天，范围为～2-6mL/kg/天(Deng,R.等人.Projectinghumanpharmacokineticsoftherapeuticantibodiesfromnonclinicaldata:Whathavewelearned？mAbs3,61-66(2011))。相似地，这些抗体在食蟹猴中的研究得到了6.5±2.9(S.D.)mL/kg/天的平均清除。增加pH6.0时与FcRn结合的抗体Fc区的改造能够增加潜在治疗抗体在食蟹猴和小鼠中的半寿期(Dall'Acqua,W.F.,Kiener,P.A.&Wu,H.PropertiesofhumanIgG1sengineeredforenhancedbindingtotheneonatalFcreceptor(FcRn).TheJournalofbiologicalchemistry281,23514-23524(2006)；Hinton,P.R.等人AnEngineeredHumanIgG1AntibodywithLongerSerumhalflife.JImmunol176,346-356(2006)；Yeung,Y.A.等人EngineeringhumanIgG1affinitytohumanneonatalFcreceptor:impactofaffinityimprovementonpharmacokineticsinprimates.JImmunol182,7663-7671(2009)；Zalevsky,J.等人Enhancedantibodyhalflifeimprovesinvivoactivity.Naturebiotechnology28,157-159(2010))。潜在治疗抗体在相关的非人物种中的临床前测试对于获得对人中预期的给药治疗方案的理解，以及评价潜在毒性是必须的。考虑到人和非人灵长动物(NHP)之间的高靶抗原序列同源性，和对于回收FcRn受体的相似的结合亲和力(Dall'Acqua,Kiener&Wu,见上文)，食蟹猴是临床前药物代谢动力学(PK)和毒理学研究的优选的物种。先前我们已经显示在人中测定的治疗IgG1抗体的非特异性清除通常是在食蟹猴中测量的约一半(Deng,R.等人,见上文)8。快于预期的清除的一个潜在机制是脱靶(off-target)结合13-16。尽管有时可以鉴定并消除高特异性的脱靶结合，14通常脱靶结合的来源是未知的并且难以用增加剂量来饱和。尚未建立评价和预测抗体的体内吸收、分布、代谢，和消除机制或体内药物代谢动力学行为的体外系统。我们寻求开发非特异性结合的体外测定法，所述测定法可用于鉴定可能表现出快速体内清除的抗体。附图简述图1是显示了在人和食蟹猴中测量的抗体清除值的关联的图(ρ＝0.74,n＝16)。对于我们的分析，选择的抗体剂量被认为是饱和任何靶依赖性清除。实线是人清除的对数对于食蟹猴清除的对数的线性回归拟合。对于显示的大多数抗体，人清除比对应的食蟹猴清除慢大约2倍。相比之下，对于抗NRP1，人中清除(9.2mL/kg/天)比食蟹猴中清除(4.3mL/kg/天)快～2倍。图2是显示食蟹猴中抗体(n＝52)的清除值的图。显示了来自给药组的几何平均值，其中假定任何特异性清除对报道的清除的贡献是可忽略的。除了4个研究之外，平均值来自3或更多只动物。显示了人源化的(圆圈)、人(方形)、合成的人噬菌体衍生的(三角)，和嵌合的(菱形)抗体。实心标志提示抗体具有λ轻链，全部其他具有κ轻链。具有铰链稳定突变体S228P的IgG4同种型抗体用“x”标记，全部其他为IgG1同种型。几何学形状内的水平线提示afucosylated抗体。通过几何形状内的点提示经由用Ala替换Asn297得到的aglycosylated抗体。通过几何形状内的垂直线提示具有调节FcγR结合的Fc氨基酸替换的抗体。图3是显示人源化的和衍生自噬菌体展示文库的合成的人抗体在食蟹猴中的清除值的比较的盒形图。未显示嵌合抗体(n＝1)和来自非噬菌体来源的人抗体(n＝3)因为非常小量的数据集。图显示被盒形图覆盖的单个数据值。盒形图矩形显示第一四分位数(第25百分位)和第三四分位数(第75百分位)之间的四分位数间距(IQR)；盒形图矩形内较粗的水平线处于中位数(第50百分位)。下盒形图线延伸至仍在下四分位数的1.5IQR之内的最低的数据值，而上线延伸至上四分位数的1.5IQR之内的最高数据值。图4说明了食蟹猴中抗体清除和对于食蟹猴FcRn的结合亲和力(KD,pH5.8)之间的关系。使用如图2中定义的标志。如Yeung等人,2010所述从SPR数据的稳态分析测定了nM的解离常数(KD)。使用的标志与图2相同。图5说明了A)食蟹猴和B)人中抗体清除值与归一化的BVELISA分数的关联。BVELISA分数>5与食蟹猴中增加的快速清除的风险有关(ρ＝0.53,n＝45)。从6次测定的平均计算BV分数；通过除以相同测定板上的非包被的孔观察到的信号归一化每次测本文档来自技高网...

【技术保护点】
预测治疗剂在食蟹猴、人或食蟹猴和人中是否将具有理想的清除速率的方法，所述方法包括步骤为将治疗剂与杆状病毒颗粒(BV)接触，测量治疗剂与BV的结合水平和基于结合水平计算治疗剂的BV分数，其中在预先测定的阈值之上的BV分数提示快速清除速率的增加的可能性，其中在预先测定的阈值之下的BV分数提示理想的清除速率的增加的可能性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.05.23 US 61/650,9641.预测治疗剂在食蟹猴、人或食蟹猴和人中是否将具有理想的清除速率的方法，其中理想的清除速率是少于或等于12mL/kg/天的清除速率，所述方法包括步骤为将治疗剂与杆状病毒颗粒(BV)接触，测量治疗剂与BV的结合水平，和基于治疗剂与BV的结合水平计算治疗剂的BV分数，其中BV分数是从获自结合测定法的平均值计算的，实施所述结合测定法以测量治疗剂与BV的结合水平，其中在预先测定的阈值之上的BV分数提示快速清除速率的增加的可能性，其中快速清除速率是大于12mL/kg/天，并且其中在预先测定的阈值之下的BV分数提示理想的清除速率的增加的可能性，其中治疗剂选自抗体或免疫粘附素。2.根据权利要求1的方法，其中在结合治疗剂之前BV与微量滴定板结合。3.根据权利要求1的方法，其中用检测试剂标记治疗剂。4.根据权利要求2的方法，其中用检测试剂标记治疗剂。5.根据权利要求1的方法，还包括将包含检测试剂的活性剂与治疗剂结合的步骤。6.根据权利要求2的方法，还包括将包含检测试剂的活性剂与治疗剂结合的步骤。7.根据权利要求3-6中任一项的方法，其中测量来自检测试剂的信号。8.根据权利要求1-6中任一项的方法，其中与人中大于12mL/Kg/天的清除速率相对应的BV分数被认为是快速清除速率。9.根据权利要求1-6中...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·F·凯利，F·泰尔，L·伯恩斯坦，I·霍特策尔，
申请(专利权)人：弗·哈夫曼拉罗切有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH