虫草素晶体的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种虫草素晶体的制备方法，包括下述步骤：1)以培养蛹虫草子座剩余的基质为原料，将基质粉碎后以有机溶剂进行浸提，离心收集上清液；2)利用大孔树脂吸附色谱柱对离心后的粗液进行纯化；3)步骤2)所得虫草素采用乙醇、硫酸铵组成的双水相体系进行富集并收集样品；4)装层析柱，甲醇溶液洗脱，洗脱液减压蒸馏浓缩，浓缩的洗脱液甲醇洗脱，洗脱液结晶得到虫草素晶体。本发明专利技术公开的虫草素晶体的制备方法降低了生产成本，并且提高了虫草素纯度，避免了有机溶剂残留。

【技术实现步骤摘要】
虫草素晶体的制备方法
本专利技术涉及虫草素及其晶体的制备方法，属于医药化学领域。
技术介绍
蛹虫草为子囊菌亚门，麦角菌目，麦角菌科、虫草属的模式种，学名为Cordycepsmilitaris，又名北冬虫夏草、北虫草等，中医认为，虫草入肺肾二经，既能补肺阴，又能补肾阳，主治肾虚，阳痿遗精，腰膝酸痛，病后虚弱，久咳虚弱，劳咳痰血，自汗盗汗等，是唯一的一种能同时平衡、调节阴阳的中药，应用广泛。虫草素是蛹虫草的主要生理活性成分，是一种核苷类物质，由腺嘌呤和脱氧戊糖组成，其在医疗保健方面具有很大的市场前景，目前虫草素的提取都是从蛹虫草中通过复杂的工艺提取的，有水浴，醇浴浸提法，树脂吸附法，层析分离法，活性炭吸附法等，这些方法要么操作复杂、提取率低，要么需经过不同的树脂处理或须借助昂贵的高效液相制备色谱技术设备，生产成本高，难于实现规模化工业生产。近年来本领域曾尝试以培养蛹虫草的残基来获得高纯度的片状虫草素晶体，但此种方法产率较低，存在较大的原料浪费。
技术实现思路
针对现有技术中的缺陷，本专利技术公开了一种虫草素晶体的制备方法，以培养蛹虫草子座后的剩余基质为原材料，实现了废物的再利用，且操作简单，条件温和，提取率高，易于扩大生产，不存在有机溶剂残留问题，且制得的虫草素晶体纯度高。为实现上述目的，本专利技术是通过下述技术方案实现的：虫草素的制备方法，包括下述步骤：1)以培养蛹虫草子座剩余的基质为原料，将基质粉碎后以有机溶剂进行浸提，离心收集上清液；2)利用大孔树脂吸附色谱柱对离心后的粗液进行纯化；3)步骤2)所得虫草素采用乙醇、硫酸铵组成的双水相体系进行富集并收集样品；4)装层析柱，甲醇溶液洗脱，洗脱液减压蒸馏浓缩，浓缩的洗脱液甲醇洗脱，洗脱液结晶得到虫草素晶体。在上述的制备方法中，以蛹虫草子座培养剩余基质为原料提取虫草素降低了整个过程的生产成本，且实现了剩余基质的废物利用，提高蛹虫草的产品附加值；采用有机溶剂对虫草素粗液浸提相对传统的水浴浸提，浸提液中虫草素含量更高，杂质更少；采用大孔树脂吸附色谱柱对样品进行纯化，能够在常温下实现连续动态的分离，操作简单，成本低，收集的虫草素液体纯度高；采用乙醇、硫酸铵组成的双水相体系对虫草素进行富集，萃取更完全，产物纯度更高。总体上而言，本专利技术的方法采用大孔树脂吸附法结合乙醇、硫酸铵双水相萃取技术，与传统的水浸提、大孔树脂吸附法相比，操作简单，产物纯度更高，适于扩大生产且一股不存在有机溶剂残留问题，绿色环保。其中，所述培养蛹虫草子座剩余的基质是指用来培养蛹虫草子座的固体培养基在培养完成后移除蛹虫草子座剩余的基质，该类基质主要成分一股是小麦或其他可提供蛹虫草子座生长的成分。在本专利技术中，所述基质粉碎标准为粉碎后过80目筛，所用有机溶剂为乙醇溶液，与基质的体积重量比为2-10∶1，浸提温度为50-80℃，浸提时间为3-8小时。通常，上述的乙醇溶液浓度为40-75％的乙醇水溶液，上述基质粉碎的程度与所用的有机溶剂相匹配，能最大化的改善浸提效率。其中，色谱柱纯化参数为虫草素样品液与大孔树脂以50ml∶0.8-1.5g的量上样，1.5-2.0BV/h，然后用3-8BV的蒸馏水除杂，流速为1.5-2.0BV/h，最后用3-8BV的乙醇溶液洗脱，流速为1.5-2.0BV/h。其中，所用的乙醇溶液浓度为40-75％的乙醇水溶液。优选的，色谱柱纯化参数为虫草素样品液与大孔树脂以50ml∶1g的量上样，(此时pH约为5)，1.8BV/h，然后用5BV的蒸馏水除杂，流速为1.8BV/h，最后用5BV的50％乙醇溶液洗脱，(此时pH约为3)，流速为1.8BV/h。在本专利技术中，所用的双水相体系组成为乙醇浓度为35-45％(w/v)，硫酸铵浓度为15-25％(w/v)，其余为水。优选的，双水相体系中，乙醇浓度为39％(w/v)，硫酸铵浓度为21％(w/v)，其余为水。其中，层析柱中采用1.5～2BV的甲醇溶液进行洗脱。附图说明图1为甲醇洗脱液薄层层析结果图；图2为虫草素标准品高效液相色谱检测图；图3为分离出的虫草素液体高效液相色谱检测图；图4为虫草素晶体电镜图。具体实施方式实施例1：按照下述步骤制备虫草素晶体：(1)将蛹虫草子座培养剩余基质自然烘干、粉碎、然后过80目筛备用；(2)称取20g蛹虫草粉末，加入5倍体积50％的乙醇溶液，在60℃条件下醇浴浸提5h；(3)用高速离心机在3000r/min条件下离心10min，收集上清液备用；(4)用大孔树脂对离心后收集的上清液进行纯化，样品液与NKAII大孔树脂以50ml∶1g的量上样，pH5，1.8BV/h，然后用5BV的蒸馏水除杂，流速为1.8BV/h，最后用5BV的50％乙醇溶液洗脱，pH3，流速为1.8BV/h；(5)用乙醇洗脱液与硫酸铵组成双水相体系，其中乙醇浓度为39％(w/v)，硫酸铵浓度为21％(w/v)，收集上清液进行多次富集；(6)将上相在薄层板上展开，紫外254nm下显色，收集样品。(7)装层析柱，用2BV的甲醇溶液洗脱，收集洗脱液；(8)将洗脱液减压蒸馏浓缩为原体积的1/5；(9)浓缩后的洗脱液用2BV甲醇洗脱，收集洗脱液，在室温下进行结晶和重结晶制得虫草素晶体0.79g，所得晶体纯度达98.9％。实施例2：按照下述步骤制备虫草素晶体：(1)将蛹虫草子座培养剩余基质自然烘干、粉碎、然后过80目筛备用；(2)称取20g蛹虫草粉末，加入6倍体积60％的乙醇溶液，在60℃条件下醇浴浸提4h；(3)用高速离心机在3000r/min条件下离心15min，收集上清液备用；(4)用大孔树脂对离心后收集的上清液进行纯化，样品液与NKAII大孔树脂以50ml∶1.2g的量上样，1.8BV/h，然后用5BV的蒸馏水除杂，流速为1.8BV/h，最后用5BV的50％乙醇溶液洗脱，流速为1.8BV/h；(5)用乙醇洗脱液与硫酸铵组成双水相体系，其中乙醇浓度为42％(w/v)，硫酸铵浓度为25％(w/v)，收集上清液进行多次富集；(6)将上相在薄层板上展开，紫外254nm下显色，收集样品。(7)装层析柱，用2BV的甲醇溶液洗脱，收集洗脱液；(8)将洗脱液减压蒸馏浓缩为原体积的1/5；(9)浓缩后的洗脱液用1.5BV甲醇洗脱，收集洗脱液，在室温下进行结晶和重结晶制得虫草素晶体0.82g，所得晶体纯度达99.8％。实施例3：按照下述步骤制备虫草素晶体：(1)将蛹虫草子座培养剩余基质自然烘干、粉碎、然后过80目筛备用；(2)称取20g蛹虫草粉末，加入4倍体积70％的乙醇溶液，在60℃条件下醇浴浸提6h；(3)用高速离心机在3000r/min条件下离心15min，收集上清液备用；(4)用大孔树脂对离心后收集的上清液进行纯化，样品液与NKAII大孔树脂以50ml∶0.8g的量上样，1.5BV/h，然后用4BV的蒸馏水除杂，流速为1.6BV/h，最后用7BV的40％乙醇溶液洗脱，流速为2BV/h；(5)用乙醇洗脱液与硫酸铵组成双水相体系，其中乙醇浓度为37％(w/v)，硫酸铵浓度为20％(w/v)，收集上清液进行多次富集；(6)将上相在薄层板上展开，紫外254nm下显色，收集样品。(7)装层析柱，用1.5BV的甲醇溶液洗脱，收集洗脱液；(8)将洗脱液减压蒸馏浓缩为原体积的1/5；本文档来自技高网...

【技术保护点】
虫草素晶体的制备方法，其特征在于包括下述步骤：1)以培养蛹虫草子座剩余的基质为原料，将基质粉碎后以有机溶剂进行浸提，离心收集上清液；2)利用大孔树脂吸附色谱柱对离心后的粗液进行纯化；3)步骤2)所得虫草素采用乙醇、硫酸铵组成的双水相体系进行富集并收集样品；4)装层析柱，甲醇溶液洗脱，洗脱液减压蒸馏浓缩，浓缩的洗脱液甲醇洗脱，洗脱液结晶得到虫草素晶体。

【技术特征摘要】
1.虫草素晶体的制备方法，其特征在于包括下述步骤：1)以培养蛹虫草子座剩余的基质为原料，将基质粉碎后以有机溶剂进行浸提，离心收集上清液；2)利用大孔树脂吸附色谱柱对离心后的粗液进行纯化；3)步骤2)所得虫草素采用乙醇、硫酸铵组成的双水相体系进行富集并收集样品，双水相体系中，乙醇浓度为35-45％(w/v)，硫酸铵浓度为15-25％(w/v)，其余为水；4)装层析柱，甲醇溶液洗脱，洗脱液减压蒸馏浓缩，浓缩的洗脱液甲醇洗脱，洗脱液结晶得到虫草素晶体。2.根据权利要求1的制备方法，其特征在于所述培养蛹虫草子座剩余的基质是指用来培养蛹虫草子座的固体培养基在培养完成后移除蛹虫草子座剩余的基质。3.根据权利要求1的制备方法，其特征在于所述基质粉碎...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦宝福，王建刚，杜双田，刘霞，谭珍珍，郑立飞，王阳，吴养会，曹让，陈晓红，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61