用于减少肺癌肿瘤发生和化学疗法抗性的MiRNA以及相关组合物和方法技术

公开了用于减少肿瘤生长、癌细胞迁移和与EGFR(表皮生长因子受体)和MET(肝细胞生长因子的受体酪氨酸激酶)的失调相关的各种其它癌症病理学(特别是在非小细胞肺癌中)的组合物，例如核酸、载体、细胞、动物模型等。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于减少肺癌肿瘤发生和化学疗法抗性的MiRNA W及相关 组合物和方法 专利技术人；Carlo M. Croce, Michela Garofalo 相关申请的交叉参考 本申请要求2011年12月10日提交的美国临时申请61/569, 237的利益，所述美 国临时申请的公开内容通过引用并入本文，用于所有目的。 关于联邦政府资助的研究的声明 本专利技术是在国立卫生研究院授予的基金号NO. CA113001下由政府支持进行的。美 国政府具有本专利技术的某些权利。 专利技术背景 不承认本部分公开的
技术介绍
在法律上构成现有技术。 MiRNA通过抑制mRNA翻译或通过促进mRNA降解来抑制基因表达，并被认为是从增 殖至细胞调亡的各种过程的主调控者。miRNA功能的丧失和获得分别通过不同祀基因的上 调和沉默来促成癌症发展。 非小细胞肺癌（NSCLC)占所有肺癌病例的约85%。虽然NSCLC是包括不同形态 学和分子亚型的明显异质性的疾病，但表皮生长因子受体巧GFR)和MET(肝细胞生长因子 的受体酪氨酸激酶（RTK))的活化是共同的并且与大鼠肉瘤（RA巧-丝裂原活化蛋白激酶 UERK)和磯酸肌醇-3-激酶（PI3K)-v-akt鼠胸腺瘤病毒癌基因同源物1 (AKT)轴的刺激相 关，所述刺激导致NSCLC细胞增殖、存活和侵袭。 酪氨酸激酶抑制剂（TKI)吉非替尼和埃罗替尼有效地祀向患NSCLC个体的EGFR， 但该些治疗剂最终受到赋予药物抗性的突变和其它分子机制的出现的限制。MET蛋白表达 和磯酸化与NSCLC患者对EGFRTKI疗法的原始抗性和获得抗性相关。需要组合物和方法， 例如控制MET表达（作为有效治疗祀），W克服肺癌对该重要类别的药物的抗性。 序列表 本申请包括，已通过EFS-网提交并且通过引用整体并入本文的序列表。2012年12 月7日创建的ASCII拷贝被命名为604_53534_SEQ_LIST_2012-111. txt，其大小为10,800 字节。[001引专利技术概述 本专利技术提供了，包含至少一种选自下列的核酸的组合物；APAF-I的miR-221/222 结合位点的分离的核巧酸154至160(5' -ATGTAGC-3'）；BIM的miR-30b结合位点的分离的 核巧酸288至294(5' -TGTTTACA-3'）；与PKC- e的miR-103结合位点的27至33互补的 分离的核巧酸（互补序列；3' -ACGACG-5'）；与PKC- e的miR-103结合位点的核巧酸1517 至1523互补的分离的核巧酸（互补序列；3' -ACGACG);与PKC- e的miR-103结合位点的 核巧酸1564至1570互补的分离的核巧酸（互补序列；3' -ACGACG-5'）；与SRC的miR-203 结合位点的核巧酸656至662互补的分离的核巧酸（互补序列；3' -UAAAGU-5'）；与SRC的 miR-203结合位点的核巧酸1116至1122互补的分离的核巧酸（互补序列；3'-UAAAGU-5'）； 与SRC的miR-203结合位点的核巧酸1595至1601互补的分离的核巧酸（互补序列： 3' -UAAAGU-5'）；和，与SRC的miR-203结合位点的核巧酸1706至1712互补的分离的核巧 酸（互补序列；3' -UAAAGU-5'）。 还提供了包含至少一种选自 5'-ATGTAGC-3' ；5'-TGTTTACA-3' ；3'-ACGACG-5' 和 3'-UAAAGU-5'的核酸的分离的核酸。 在本文中还提供了分离的核酸或组合物，所述核酸或组合物还包含选自启动子、 增强子、重复序列、标志物和报道基因的元件。 在本文中还提供了分离的核酸，所述核酸是探针、引物、miRNA、质粒、载体、病毒、 细胞或生物。[001引在本文中还提供了物质组合物，其包含至少一种选自miR-103、miR-203、 抗-miR-30 和抗-miR-221 的 miRo 在本文中还提供了物质组合物，其包含至少2种选自miR-103、miR-203、 抗-miR-30 和抗-miR-221 的 miRo 在本文中还提供了物质组合物，其包含至少3种选自miR-103 ;miR-203 ; 抗-miR-30 和抗-miR-221 的 miRo 在本文中还提供了物质组合物，其包含miR-103、miR-203、抗-miR-30和 抗-miR-221。 在本文中还提供了物质组合物，其还包含化学疗法治疗。 在本文中还提供了物质组合物，其还包含肺癌化学疗法治疗。 在本文中还提供了物质组合物，其还包含表皮生长因子受体巧GFR)抑制剂。[00巧]在本文中还提供了物质组合物，其还包含酪氨酸激酶抑制剂（TKI)。 在本文中还提供了物质组合物，其还包含选自西妥昔单抗；帕木单抗；扎芦木单 抗；尼妥珠单抗和马妥珠单抗的单克隆抗体。 在本文中还提供了物质组合物，其还包含选自吉非替尼；埃罗替尼；拉帕替尼； AP26113和马铃墓駿肤酶抑制剂的小分子。 在本文中还提供了物质组合物，其还包含吉非替尼。 在本文中还提供了物质组合物，其还包含PKC-e表达激动剂。 在本文中还提供了物质组合物，其还包含MET抑制剂。 在本文中还提供了物质组合物，其还包含SU11274。 在本文中还提供了物质组合物，其还包含Dicm?抑制剂。 在本文中还提供了物质组合物，其还包含E-巧粘蛋白表达激动剂。 在本文中还提供了物质组合物，其还包含佐剂、赋形剂和/或其它药学上可接受 的组合物。[00巧]在本文中还提供了被配制用于注射、输注、摄入或跨膜运输的物质组合物。 本专利技术提供了下调哺乳动物细胞的DICER的方法，包括增加miR-103和/或 miR-203在哺乳动物细胞中的可用度（avail油ility)，和下调哺乳动物细胞的DICER。 本专利技术提供了减少哺乳动物癌细胞的迁移的方法，包括增加miR-103和/或 miR-203在哺乳动物癌细胞中的可用度，和减少哺乳动物癌细胞的迁移。 本专利技术提供了减小哺乳动物癌细胞的EGFR化学疗法抗性的方法，包括增加 miR-103和/或miR-203在哺乳动物癌细胞中的可用度，和减小哺乳动物癌细胞的EGFR化 学疗法抗性。 本专利技术提供了减小哺乳动物癌细胞的吉非替尼抗性的方法，包括增加miR-103和 /或miR-203在哺乳动物癌细胞中的可用度，和减小哺乳动物癌细胞的吉非替尼抗性。 本专利技术提供了减少间充质标志物在哺乳动物癌细胞中的表达的方法，包括增加 miR-103和/或miR-203在哺乳动物癌细胞中的可用度，和减少哺乳动物癌细胞的间充质标 志物的表达。 本专利技术提供了增加E-巧粘蛋白在哺乳动物癌细胞中的表达的方法，包括增加 miR-103和/或miR-203在哺乳动物癌细胞中的可用度，和增加哺乳动物癌细胞的E-巧粘 蛋白的表达。 本专利技术提供了诱导哺乳动物癌细胞的间充质-上皮转化的方法，包括增加 miR-103和/或miR-203在哺乳动物癌细胞中的可用度，和诱导哺乳动物癌细胞的间充 质-上皮转化。提供了其中通过PKC-e和/或DIffiR诱导间充质-上皮转化的此类方法。 本专利技术提供了诱导哺乳动物癌细胞的程序化细胞死亡的方法，包括增加miR-1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物，其包含选自下列的核酸：APAF‑1的miR‑221/222结合位点的分离的核苷酸154至160(5'‑ATGTAGC‑3')；BIM的miR‑30b结合位点的分离的核苷酸288至294(5'‑TGTTTACA‑3')；与PKC‑ε的miR‑103结合位点的27至33互补的分离的核苷酸(互补序列：3'‑ACGACG‑5')；与PKC‑ε的miR‑103结合位点的核苷酸1517至1523互补的分离的核苷酸(互补序列：3'‑ACGACG)；与PKC‑ε的miR‑103结合位点的核苷酸1564至1570互补的分离的核苷酸(互补序列：3'‑ACGACG‑5')；与SRC的miR‑203结合位点的核苷酸656至662互补的分离的核苷酸(互补序列：3'‑UAAAGU‑5')；与SRC的miR‑203结合位点的核苷酸1116至1122互补的分离的核苷酸(互补序列：3'‑UAAAGU‑5')；与SRC的miR‑203结合位点的核苷酸1595至1601互补的分离的核苷酸(互补序列：3'‑UAAAGU‑5')；和与SRC的miR‑203结合位点的核苷酸1706至1712互补的分离的核苷酸(互补序列：3'‑UAAAGU‑5')。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.12.10 US 61/569,2371. 一种组合物，其包含选自下列的核酸:APAF-1的miR-221/222结合位点的分离 的核苷酸154至160(5' -ATGTAGC-3'）；BM的miR-30b结合位点的分离的核苷酸288至 294(5'-TGTTTACA-3'）；与PKC-ε的miR-103结合位点的27至33互补的分离的核苷酸（互 补序列：3' -ACGACG-5'）；与PKC- ε的miR-103结合位点的核苷酸1517至1523互补的分离 的核苷酸（互补序列：3' -ACGACG);与PKC- ε的miR-103结合位点的核苷酸1564至1570 互补的分离的核苷酸（互补序列：3'-ACGACG-5'）；与SRC的miR-203结合位点的核苷酸656 至662互补的分离的核苷酸（互补序列：3' -UAAAGU-5'）；与SRC的miR-203结合位点的核 苷酸1116至1122互补的分离的核苷酸（互补序列：3'-UAAAGU-5'）；与SRC的miR-203结合 位点的核苷酸1595至1601互补的分离的核苷酸（互补序列：3' -UAAAGU-5'）；和与SRC的 miR-203结合位点的核苷酸1706至1712互补的分离的核苷酸（互补序列：3' -UAAAGU-5'）。2. -种分离的核酸，其包含选自下列的核酸：5' -ATGTAGC-3' ；5' -TGTTTACA-3' ； 3,-ACGACG-5,和 3,-UAAAGU-5,。3. 本文权利要求的任一项的分离的核酸或组合物，其还包含选自启动子、增强子、重复 序列、标志物和报道基因的元件。4. 本文权利要求的任一项的分离的核酸，其为探针、引物、miRNA、质粒、载体、病毒、细 胞或修饰的生物。5. -种物质组合物，其包含至少一种选自下列的miR :miR-103、miR-203、抗-miR-30和 抗-miR-221。6. 本文权利要求的任一项的组合物，其包含至少2种选自miR-103、miR-203、 抗-miR-30 和抗-miR-221 的 miR。7. 本文权利要求的任一项的组合物，其包含至少3种选自miR-103 ;miR-203 ; 抗-miR-30 和抗-miR-221 的 miR。8. 本文权利要求的任一项的组合物，其包含miR-103、miR-203、抗-miR-30和 抗-miR-221。9. 本文权利要求的任一项的组合物，其还包含化学疗法治疗。10. 本文权利要求的任一项的组合物，其还包含肺癌化学疗法治疗。11. 本文权利要求的任一项的组合物，其还包含表皮生长因子受体（EGFR)抑制剂。12. 本文权利要求的任一项的组合物，其还包含酪氨酸激酶抑制剂（TKI)。13. 本文权利要求的任一项的组合物，其还包含选自西妥昔单抗；帕木单抗；扎芦木单 抗；尼妥珠单抗和马妥珠单抗的单克隆抗体。14. 本文权利要求的任一项的组合物，其还包含选自吉非替尼；埃罗替尼；拉帕替尼； AP26113和马铃薯羧肽酶抑制剂的小分子。15. 本文权利要求的任一项的组合物，其还包含吉非替尼。16. 本文权利要求的任一项的组合物，其还包含PKC-ε表达激动剂。17. 本文权利要求的任一项的组合物，其还包含MET抑制剂。18. 本文权利要求的任一项的组合物，其还包含SU11274。19. 本文权利要求的任一项的组合物，其还包含DICER抑制剂。20. 本文权利要求的任一项的组合物，其还包含E-钙粘蛋白表达激动剂。21. 本文权利要求的任一项的组合物，其还包含佐剂、赋形剂和/或其它药学上可接受 的组合物。22. 本文权利要求的任一项的组合物，其被配制用于注射、输注、摄入或跨膜运输。23. -种下调哺乳动物细胞的DICER的方法，包括增加 miR-103和/或miR-203在哺乳 动物细胞中的可用度，和下调哺乳动物细胞的DICER。24. -种减少哺乳动物癌细胞的迁移的方法，包括增加 miR-103和/或miR-203在哺乳 动物癌细胞中的可用度，和减少哺乳动物癌细胞的迁移。25. -种减小哺乳动物癌细胞的EGFR化学疗法抗性的方法，包括增加 miR-103和/或 miR-203在哺乳动物癌细胞中的可用度，和减小哺乳动物癌细胞的EGFR化学疗法抗性。26. -种减小哺乳动物癌细胞的吉非替尼抗性的方法，包括增加 miR-103和/或 miR-203在哺乳动物癌细胞中的可用度，和减小哺乳动物癌细胞的吉非替尼抗性。27. -种减少间充质标志物在哺乳动物癌细胞中的表达的方法，包括增加 miR-103和 /或miR-203在哺乳动物癌细胞中的可用度，和减少哺乳动物癌细胞的间充质标志物的表 达。28. -种增加 E-钙粘蛋白在哺乳动物癌细胞中的表达的方法，包括增加 miR-103和/ 或miR-203在哺乳动物癌细胞中的可用度，和增加哺乳动物癌细胞的E-钙粘蛋白的表达。29. -种诱导哺乳动物癌细胞的间充质-上皮转化的方法，包括增加 miR-103和/或 miR-203在哺乳动物癌细胞中的可用度，和诱导哺乳动物癌细胞的间充质-上皮转化。30. 权利要求26的方法，其中通过PKC-ε和/或DICER诱导间充质-上皮转化。31. -种诱导哺乳动物癌细胞的程序化细胞死亡的方法，包括增...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·M·克劳斯，M·加罗法洛，
申请(专利权)人：俄亥俄州国家创新基金会，
类型：发明
国别省市：美国;US