一种适用马铃薯品种“川芋10号”转基因方法技术

本发明专利技术提供一种适用马铃薯品种“川芋10号”转基因方法，该方法的特征在于第一天充分培养农杆菌，第二天按一定比例稀释菌液继续培养待OD600=0.3时取出，5000rpm离心3min，弃上清，加入液体MS重悬菌体。在超净工作台中将试管薯放在被少量无菌水浸湿的滤纸上，切成1-2mm厚的薄片（顶端和底部舍去），转移试管薯切片至重悬菌体中浸染5min左右。然后将薯片移至无菌滤纸上吸干水分，接着将薯片平放入共培养基上，在24℃黑暗中共培养2d。共培养后，放入含500mg/L Cef+500mg/L Carb的无菌水中清洗3～4遍，吸干水分后转入芽筛选培养基中。每隔12d左右换1次新鲜的芽筛选培养基。30d之后可见从薯肉中长出的芽，待芽长到2～3cm左右时，剪下接入生根筛选培养基中进行生根。

【技术实现步骤摘要】
—种适用马铃薯品种“川芋10号”转基因方法
本专利技术属于植物基因工程
，特别涉及。
技术介绍
马铃薯(5b7a/w? tuberosum L.)是世界上继水稻、小麦和玉米之后的第四大粮食作物，具有产量高、营养丰富、可食用加工等特点。由于马铃薯普通栽培种是同源四倍体，遗传组成的复杂性及遗传背景的狭窄性是制约马铃薯育种发展的主要因素，因此，利用转基因技术进行马铃薯的遗传改良具有重要的意义。王清等通过研究发现通过转基因技术在马铃薯中沉默PPO能降低块茎的褐化，同时可以降低块茎中酚物质的含量。汤莉等通过研究发现转铜锌超氧化物歧化酶和抗坏血酸过氧化物酶基因的马铃薯提高了对氧化和盐胁迫的耐性，为培育抗逆性强的马铃薯品种奠定了重要基础。目前进行马铃薯转基因工作的前提是建立高效的转基因体系，本专利技术的目的在于提供，该方法能高效的将外源基因转入马铃薯品种“川芋10号”中。
技术实现思路
剪取试管苗带1-2叶片茎段插入诱薯培养基中(9株/瓶)，接种好的试管苗在温度为(18±2) °C，光照强度2000 lx、每天8h光/16h暗条件下培养6-8周左右后收获试本文档来自技高网...

【技术保护点】
将挑取含有目的基因的农杆菌单菌落接种至5mL液体LB中（含50 mg/L 卡纳霉素和50 mg/L 利福平），200rpm 28℃培养过夜，二天按1：200的比例稀释菌液于新鲜的液体LB中，继续培养待OD600=0.1‑0.3时取出备用。

【技术特征摘要】
1.将挑取含有目的基因的农杆菌单菌落接种至5mL液体LB中(含50mg/L卡纳霉素和50 mg/L利福平)，200rpm 28°C培养过夜，二天按1:200的比例稀释菌液于新鲜的液体LB中，继续培养待0D600=0.1-0.3时取出备用。2.在超净工作台中将试管薯放在被少量无菌水浸湿的滤纸上，在其上将试管薯块切成l-2mm厚的薄片(顶端和底部舍去)，并转移至水中备用，以防止材料发生栓化。3.取制备好的菌液，5000rpm离心3min，弃上清，加入液体MS重悬菌体用于浸染，室温下，转移试管薯切片至重悬菌体中浸染5min左右，其间不断摇动以利于充分接触。4.侵染结束后将薯片移至无菌滤纸上吸干水分，然后将薯片平放入共培养基上，在24°C，黑暗中共培养2d，共培养基配方是MS+3%蔗糖+0.8%琼脂，PH值调至5.8-6.0。...

【专利技术属性】
技术研发人员：李立芹，王西瑶，鲁黎明，倪苏，刘帆，杨先泉，曾富春，彭茂林，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川;51