本发明专利技术属于天然产物的提取、分离和纯化领域，公开了一种虎奶菇多糖及其提取方法。所述方法包括以下步骤：虎奶菇干燥粉末加水超声波萃取2～4h，离心，利用旋转蒸发仪进行浓缩，用木瓜蛋白酶进行水解，用Sevag试剂进行脱蛋白，利用体积百分数95％乙醇进行醇析，多糖重溶于蒸馏水，超滤膜超滤并收集10000道尔顿以上的组分，再进行Sephadex G-100柱层析得纯化多糖，收集多糖组分，冷冻干燥，得到虎奶菇多糖。该提取方法产品回收率高、纯度好，虎奶菇多糖得率为1.8％，多糖的纯度为91.2％，其中主要含有质量百分数44.2％的葡萄糖、质量百分数40.0％的半乳糖。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术属于天然产物的提取、分离和纯化领域，公开了。所述方法包括以下步骤：虎奶菇干燥粉末加水超声波萃取2～4h，离心，利用旋转蒸发仪进行浓缩，用木瓜蛋白酶进行水解，用Sevag试剂进行脱蛋白，利用体积百分数95％乙醇进行醇析，多糖重溶于蒸馏水，超滤膜超滤并收集10000道尔顿以上的组分，再进行Sephadex G-100柱层析得纯化多糖，收集多糖组分，冷冻干燥，得到虎奶菇多糖。该提取方法产品回收率高、纯度好，虎奶菇多糖得率为1.8％，多糖的纯度为91.2％，其中主要含有质量百分数44.2％的葡萄糖、质量百分数40.0％的半乳糖。【专利说明】
本专利技术属于天然产物的提取、分离和纯化领域，具体涉及。
技术介绍
虎奶燕,属于担子菌纲(Basid1mycetes)侧耳属，是热带地区一种珍贵的食用菌及药用菌，主要分布在我国云南省以及部分东南亚国家。担子菌纲的很多食用菌含有被称作生物应答调节剂(B1logical ResponseModifiers, BRMs)的生物活性多糖,如香燕多糖(Lentinan)、云芝多糖(Krestin)、裂裙菌多糖(Sizofiran)等。这些多糖因具有增强机体免疫功能及抗肿瘤等药理作用，且没有毒性，而成为当前的研究热点。对虎乃菇多糖的研究表明，虎奶菇多糖亦是一种生物应答调节剂，能显著提高机体免疫功能，在医学、保健品、食品、药物载体等领域有良好的应用前景。 多糖是由二十多个到上万个单糖组成的大分子，在植物、动物、微生物广泛。多糖的分离纯化过程包括提取、分离、纯化和纯度鉴定。食用菌子实体的多糖，因细胞或组织外多有脂质包围，故常用醇或醚回流脱脂，然后利用不同的温度、极性、PH的溶剂提取多糖。此夕卜，也可采用一些生化和物理的处理方法:如酶解、弱碱溶解或超声波处理以破坏细胞壁，增加多糖的溶出。
技术实现思路
为了克服现有技术的缺点与不足，本专利技术的首要目的在于提供一种产品回收率高、纯度好的虎奶菇多糖的提取方法。 本专利技术的另一目的在于提供上述提取方法得到的虎奶菇多糖。 本专利技术的目的通过下述技术予以实现: —种虎奶菇多糖的提取方法，按照以下操作步骤: (I)将自然风干的虎奶菇进行粉碎并过筛，得到虎奶菇干燥粉末； (2)往虎奶菇干燥粉末中加入虎奶菇干燥粉末质量30?50倍的蒸馏水，在80?100°C下用输出功率为50?100W超声波萃取2?4h，离心5?20min，取上清液；离心后的虎奶菇固体残渣再加入其质量30?50倍的蒸馏水，重复上述超声波萃取操作3?5次，上清液合并，得到虎奶菇多糖提取液A ; (3)利用旋转蒸发仪在80?100°C下对虎奶菇多糖提取液A进行浓缩2?4h，得到虎奶菇多糖提取液B ; (4)将虎奶菇多糖提取液B的pH值调节至3?8，加入虎奶菇多糖提取液B质量0.5?2倍的木瓜蛋白酶，30?70°C下水解I?5h，沸水浴处理5?lOmin，得虎奶菇多糖提取液C ;所述木瓜蛋白酶的活性为80000?100000U/g ； (5)往虎奶菇多糖提取液C中加入占其体积1/3的Sevag试剂，充分抽提0.5?3h,离心5?20min,取上清液；上清液继续用其1/3体积的Sevag试剂进行脱蛋白，充分抽提0.5?3h，离心5?20min最终获得的上清液为虎奶菇多糖提取液D ； (6)往虎奶菇多糖提取液D中加入占其体积3?5倍的乙醇，在O?25°C下醇析2?24h，离心10?20min，弃上清液并室温挥发干乙醇，得到多糖；再用多糖质量5?15倍的蒸馏水进行溶解，得到虎奶菇多糖提取液E ; (7)利用超滤膜将虎奶菇多糖提取液E进行超滤，收集分子量10000道尔顿以上的组分，再进行Sephadex G-100于25°C下进行柱层析得纯化多糖，收集多糖组分，冷冻干燥，得到虎奶菇多糖。 步骤⑴所述过筛是过50?120目筛。 步骤(4)所述pH值调节至4.5?7.2，所述木瓜蛋白酶的活性为80000U/g。 步骤(5)所述充分抽提的时间为0.5?Ih ;所述Sevag试剂为体积比为4:1的氯仿和正丁醇配制成的混合液。 步骤(6)所述乙醇是浓度为体积百分比95%的乙醇。 步骤⑵、步骤(5)和步骤(6)所述离心的速度为8000?12000转/分钟。 一种由上述提取方法得到的虎奶菇多糖。 本专利技术与现有技术相比具有如下的优点及有益效果: (I)本专利技术提取方法产品回收率高、纯度好，虎奶菇多糖得率为1.8%，多糖的纯度为91.2%，其中主要含有葡萄糖(质量百分含量44.2% )、半乳糖(质量百分含量40.0% )。 (2)本专利技术工艺简单，所用试剂易得，生产成本低，易于实现工业化。 【具体实施方式】 下面结合具体的实例对本专利技术作进一步详细的叙述，但本专利技术的实施方法灵活，不仅仅限于此例所述的具体操作方式。 实施例1 (I)将自然风干的虎奶菇进行粉碎并过80目筛，得到虎奶菇干燥粉末； (2)往虎奶菇干燥粉末中加入虎奶菇干燥粉末质量30倍的蒸馏水，在80°C下用输出功率为50W超声波萃取2h，10000转/分钟转速离心lOmin，取上清液；离心后的虎奶菇固体残渣再加入其质量30倍的蒸馏水，重复上述超声波萃取操作3次，上清液合并，得到虎奶菇多糖提取液A ; (3)利用旋转蒸发仪在100°C下对虎奶菇多糖提取液A进行浓缩2h，得到虎奶菇多糖提取液B ； (4)将虎奶菇多糖提取液B的pH值调节至7.2，加入虎奶菇多糖提取液B质量0.5倍的木瓜蛋白酶，50°C下水解2h，沸水浴处理lOmin，得虎奶菇多糖提取液C ;所述木瓜蛋白酶的活性为80000U/g ； (5)往虎奶菇多糖提取液C中加入占其体积1/3的Sevag试剂(体积比为4:1的氯仿和正丁醇配制成的混合液)，充分抽提lh，10000转/分钟转速离心lOmin，取上清液；上清液继续用其1/3体积的Sevag试剂进行脱蛋白，充分抽提lh，10000转/分钟转速离心1min最终获得的上清液为虎奶菇多糖提取液D ； (6)往虎奶菇多糖提取液D中加入占其体积3倍的乙醇(体积百分比浓度95%)，在10°C下醇析2h，10000转/分钟转速离心lOmin，弃上清液并室温挥发干乙醇，得到多糖；再用多糖质量10倍的蒸馏水进行溶解，得到虎奶菇多糖提取液E ； (7)利用超滤膜将虎奶菇多糖提取液E进行超滤(B1maX-10，MillipOre公司，下同)，压力不超过0.4MPa，收集分子量10000道尔顿以上的组分，再进行S^)hadex G-1OO于25°C下进行柱层析得纯化多糖，收集多糖组分，冷冻干燥，得到虎奶菇多糖。虎奶菇多糖得率为1.6%，多糖的纯度为91.2%，其中主要含有葡萄糖(质量百分含量44.2% )、半乳糖(质量百分含量40.0% )。 本实施例制备的虎奶菇多糖为浅褐色粉末，易吸湿，易溶于水，质量含量为91%，经检测符合下述指标: 1.重金属指标:pb〈l.5ppm、As〈l.0ppm、Hg〈0.3ppm。 2.卫生指标:细菌数〈1000个/g大肠杆菌、活螨不得检出，霉菌数〈35个/g。 多糖含量的检测: 准确称取虎奶菇多糖1mg于10mL烧杯中，让其充本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种虎奶菇多糖的提取方法，其特征在于按照以下操作步骤：(1)将自然风干的虎奶菇进行粉碎并过筛，得到虎奶菇干燥粉末；(2)往虎奶菇干燥粉末中加入虎奶菇干燥粉末质量30～50倍的蒸馏水，在80～100℃下用输出功率为50～100W超声波萃取2～4h，离心5～20min，取上清液；离心后的虎奶菇固体残渣再加入其质量30～50倍的蒸馏水，重复上述超声波萃取操作3～5次，上清液合并，得到虎奶菇多糖提取液A；(3)利用旋转蒸发仪在80～100℃下对虎奶菇多糖提取液A进行浓缩2～4h，得到虎奶菇多糖提取液B；(4)将虎奶菇多糖提取液B的pH值调节至3～8，加入虎奶菇多糖提取液B质量0.5～2倍的木瓜蛋白酶，30～70℃下水解1～5h，沸水浴处理5～10min，得虎奶菇多糖提取液C；所述木瓜蛋白酶的活性为80000～100000U/g；(5)往虎奶菇多糖提取液C中加入占其体积1/3的Sevag试剂，充分抽提0.5～3h，离心5～20min，取上清液；上清液继续用其1/3体积的Sevag试剂进行脱蛋白，充分抽提0.5～3h，离心5～20min最终获得的上清液为虎奶菇多糖提取液D；(6)往虎奶菇多糖提取液D中加入占其体积3～5倍的乙醇，在0～25℃下醇析2～24h，离心10～20min，弃上清液并室温挥发干乙醇，得到多糖；再用多糖质量5～15倍的蒸馏水进行溶解，得到虎奶菇多糖提取液E；(7)利用超滤膜将虎奶菇多糖提取液E进行超滤，收集分子量10000道尔顿以上的组分，再进行Sephadex G‑100于25℃下进行柱层析得纯化多糖，收集多糖组分，冷冻干燥，得到虎奶菇多糖。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：巫光宏，叶志伟，涂玉佩，詹福建，张志鹏，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东;44
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