本发明专利技术公开了一种柳杉无性系离体生根培养方法，包括以下步骤：1）对组织培养材料进行消毒和定瓶；2）将组织培养材料接入继代增殖培养基进行继代增殖培养，诱导分化出不定芽，然后将不定芽转入MS培养基上进行伸长培养；其中，继代增殖培养基配方为DCR+1.0mg/L6-BA+0.05mg/LNAA＋3%蔗糖；3）当不定芽伸长到2～3cm时，转入诱导生根培养基培养，得生根试管苗；诱导生根培养基以1/2DCR+0.05～0.2mg/LIBA+0.05～0.2mg/LNAA＋蔗糖2%；4）移栽生根试管苗。该方法以萌条为组织培养材料，通过继代增殖培养进行不定芽诱导；当不定芽伸长到2～3cm时，以1/2DCR为基本培养基，添加植物生长调节剂进行根诱导，通过本方法生根率平均为84%，最高可达93.3%，平均每株苗的生根数目达到5.7条，移栽成活率达平均86%以上。
【技术实现步骤摘要】
一种柳杉无性系罔体生根培养方法
本专利技术属于植物生根培养
，具体涉及一种柳杉无性系离体生根培养方 法。
技术介绍
柳杉（Cryptomeria. fortunei)是常绿乔木，高达40米，胸径可达2米多；树皮红 棕色，纤维状，裂成长条片脱落；大枝近轮生，平展或斜展；小枝细长，常下垂，绿色，枝条中 部的叶较长，常向两端逐渐变短。柳杉天然林仅见于中国东南的天目山、武夷山、日本本州 岛及九州岛等地。中国的大多数植物分类学家认为柳杉属共两种：柳杉（C. fortunei)和日 本柳杉（C. japonica)。中国柳杉为我国特有树种，产于浙江天目山、福建南屏三千八百坎及 江西庐山等地海拔1100米以下地带，有数百年的老树。在江苏南部、浙江、安徽南部、河南、 湖北、湖南、四川、贵州、云南、广西及广东等地均有栽培，生长良好。 柳杉遗传育种的研究大多数都采用常规育种的方法。通过扦插和播种的方式进 行育苗，但存在着种子萌发率低（大多10%以下）。对于柳杉优良无性系的推广和保持需 要探索组织培养的技术体系，为柳杉优良无性系的的增殖扩繁及加快柳杉优良品种的扩展 等，提供技术的支持。
技术实现思路
专利技术目的：针对现有技术中存在的不足，本专利技术的目的在于提供一种柳杉无性系 离体生根培养方法，提高成活率，满足工业化育苗需求。 技术方案：为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案为： -种柳杉无性系离体生根培养方法，包括以下步骤： 1)选取柳杉优良无性系的当年生幼嫩萌条为组织培养材料，进行消毒和定瓶； 2)将组织培养材料接入继代增殖培养基进行继代增殖培养，诱导分化出不定芽， 然后将不定芽转入MS培养基上进行伸长培养；其中，继代增殖培养基配方为DCR+1. Omg/L 6-BA+O. 05mg/L NAA+3% 蔗糖； 3)当不定芽伸长到2?3cm时，转入诱导生根培养基培养，得生根试管苗；诱导生 根培养基以 1/2DCR+0. 05 ?0· 2mg/L ΙΒΑ+0. 05 ?0· 2mg/L NAA+ 蔗糖 2% ; 4)移栽生根试管苗，选用重量比为1:1的珍珠岩和泥炭混合后用作移栽基质，进 行日常管理，移栽成活； 其中，各培养基均附加琼脂〇. 6%，培养温度为25°C，光强为1500-20001X，光照时 间为12h/d。 步骤1)中，截取柳杉优良无性系当年生幼嫩萌条，除掉多余的叶片，用去离子水 稀释的洗涤剂浸泡30min后，再用流水冲洗Ih ;在无菌条件下，用70%酒精浸泡90s，再经 〇. 1 %升汞分别处理l〇min，然后用无菌水冲洗3-4次，每次l-2min ;冲洗后将其置于培养皿 中，无菌滤纸吸取残余水分后，切除茎段两端受伤部位，；然后将其切成2-3cm长的茎段，接 种于已灭菌的MS培养基上。 步骤1)中，所述的柳杉无性系为柳杉011#、柳杉3#和柳杉70#。 步骤3)中，所述的诱导生根培养基为1/2DCR+0. 10mg/L ΙΒΑ+0. 20mg/L NAA+蔗糖 2%。 步骤4)中，待试管苗生根后，将株高3cm、根系发达的健壮幼苗在培养室内炼苗 5-7d后，将根系附着的培养基洗净，移植到已灭菌的基质中，用塑料布盖住，每天喷水2-3 次，14d揭开塑料布，每天喷水1-2次，定期观察，50d后试管苗移栽成活。 有益效果：与现有技术相比，本专利技术的柳杉无性系离体生根培养方法，选取柳杉优 良无性系的基部萌条为组织培养材料，通过继代增殖培养进行不定芽诱导；当不定芽伸长 到2?3cm时，以1/2DCR为基本培养基，添加植物生长调节剂进行根诱导，通过本方法生根 率平均为84%，最高可达93. 3 % (011#)，平均每株苗的生根数目达到5. 7条，移栽成活率达 平均86%以上，具有很好的实用性，能满足工业化使用需求。 【附图说明】 图1是柳杉011#优良无性系生根情况图； 图2是试管苗移栽生长情况图； 图3是柳杉3#优良无性系生根情况图； 图4是柳杉70#优良无性系生根情况图。 【具体实施方式】 下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明。 以下实例采用的是南京林业大学与福建杨梅岭林场选取的3个优良无性系，分别 简称为011#、3#、70#，这些无性系均来源于优良家系的优良个体，均经过了10年的无性系 的子代测定。以下各实施例案中使用的条件（除特别指明）为：培养基附加琼脂0.6%，培 养温度为25°C，日光灯照明，光强为1500-20001X，光照时间为12h/d。 实施例1 1)萌条消毒和定瓶 将柳杉优良无性系011#截取当年生幼嫩萌条，除掉多余的叶片，用去离子水稀释 的洗涤剂浸泡30min后，再用流水冲洗lh。在无菌条件下，用70%酒精浸泡90s，再经0. 1 % 升汞分别处理lOmin，然后用无菌水冲洗3-4次，每次l-2min。在药液灭菌过程中，轻轻晃 动三角瓶，以使得灭菌液与外植体充分接触。冲洗后将其置于培养皿中，无菌滤纸吸取残余 水分后，切除茎段两端受伤部位，以减少升汞的毒害。然后将其切成2-3cm长的茎段，接种 于已灭菌的MS培养基上，培养2周。 2)芽的分化和伸长 将组织材料放入继代增殖培养基中进行继代增殖培养，诱导分化出不定芽，继代 增殖培养基配方为DCR+1.0mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+蔗糖3%，然后将不定芽转入MS培养 基上进行伸长培养。 3)根诱导 当不定芽长到2_3cm时，转入生根培养基进行根诱导。在生根培养基中添加植物 生长调节剂和蔗糖2%，观察统计数据，数据包括：不定根的诱导频率（％)=长出不定根的 不定芽数/接种不定芽数X 100% ;平均不定根数=不定根总数/诱导出不定根的不定芽 数；不定根的形成能力（RFC)=平均不定根数X不定根的诱导频率。 在柳杉011#无性系中，基本培养基大量元素的含量对生根的影响实验结果见表 1，由表1可知，基本培养基大量元素的含量对柳杉011#无性系根的诱导存在一定的影响， 在1/2DCR基本培养基中诱导率最高，达到86. 7%，定根的形成能力为6. 24,均明显优于DCR 和1/4DCR基本培养基。 表1基本培养基对柳杉无性系不定芽诱导的影响本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种柳杉无性系离体生根培养方法，其特征在于，包括以下步骤：1）选取柳杉优良无性系的当年生幼嫩萌条为组织培养材料，进行消毒和定瓶；2）将组织培养材料接入继代增殖培养基进行继代增殖培养，诱导分化出不定芽，然后将不定芽转入MS培养基上进行伸长培养；其中，继代增殖培养基配方为DCR+1.0mg/L 6‑BA+0.05mg/L NAA＋3%蔗糖；3）当不定芽伸长到2～3cm时，转入诱导生根培养基培养，得生根试管苗；诱导生根培养基以1/2DCR+0.05~0.2mg/L IBA+0.05~0.2mg/L NAA＋蔗糖2%；4）移栽生根试管苗，选用重量比为1:1的珍珠岩和泥炭混合后用作移栽基质，进行日常管理，移栽成活；其中，各培养基均附加琼脂0.6%，培养温度为25℃，光强为1500‑2000lx，光照时间为12h/d。
【技术特征摘要】
1. 一种柳杉无性系离体生根培养方法，其特征在于，包括以下步骤： 1) 选取柳杉优良无性系的当年生幼嫩萌条为组织培养材料，进行消毒和定瓶； 2) 将组织培养材料接入继代增殖培养基进行继代增殖培养，诱导分化出不定芽，然 后将不定芽转入MS培养基上进行伸长培养；其中，继代增殖培养基配方为DCR+1. Omg/L 6-BA+O. 05mg/L NAA + 3% 蔗糖； 3) 当不定芽伸长到2?3cm时，转入诱导生根培养基培养，得生根试管苗；诱导生根培 养基以 1/2DCR+0. 05?0· 2mg/L ΙΒΑ+0. 05?0· 2mg/L NAA + 蔗糖 2% ; 4) 移栽生根试管苗，选用重量比为1:1的珍珠岩和泥炭混合后用作移栽基质，进行日 常管理，移栽成活； 其中，各培养基均附加琼脂〇. 6%，培养温度为25°C，光强为1500-20001X，光照时间为 12h/d。2. 根据权利要求1所述的柳杉无性系离体生根培养方法，其特征在于，步骤1)中，截 取柳杉优良无性系当年生幼嫩萌条，除掉多余的叶片，用去离子水稀释...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐进，祝晨辰，施季森，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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