本发明专利技术公开了一种从红豆杉枝叶或树皮中分离纯化紫杉醇的方法。所述方法首先将红豆杉枝叶或树皮先用甲醇浸泡，超声提取或回流提取，经减压浓缩得到浸膏；浸膏依次用石油醚和乙酸乙酯进行萃取，得到乙酸乙酯浸膏；乙酸乙酯浸膏经过碱性氧化铝柱层析后得到富含紫杉醇的组分，再利用以甲醇-水为体系的部分沉淀法处理，得到紫杉醇粗品，最后以快速制备色谱为分离手段，以甲醇-水为洗脱体系，最终精制得到紫杉醇（纯度>98.5%）。本发明专利技术的方法操作简便、成本低、重复性好、效率高、所得产品纯度高，可用于紫杉醇的规模化生产。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了。所述方法首先将红豆杉枝叶或树皮先用甲醇浸泡，超声提取或回流提取，经减压浓缩得到浸膏；浸膏依次用石油醚和乙酸乙酯进行萃取，得到乙酸乙酯浸膏；乙酸乙酯浸膏经过碱性氧化铝柱层析后得到富含紫杉醇的组分，再利用以甲醇-水为体系的部分沉淀法处理，得到紫杉醇粗品，最后以快速制备色谱为分离手段，以甲醇-水为洗脱体系，最终精制得到紫杉醇（纯度>98.5%）。本专利技术的方法操作简便、成本低、重复性好、效率高、所得产品纯度高，可用于紫杉醇的规模化生产。【专利说明】
本专利技术属于天然药物提取
。更具体地，涉及一种从红豆杉枝叶或树皮中 分离纯化紫杉醇的方法。
技术介绍
南方红豆杉（Tkras var. Mairei)，又称美丽红豆杉，为裸子植物门 (Gymnospermae )、红豆杉科（Taxaceae )、红豆衫属（Taxus )植物。它作为红豆杉属植物中 分布最广泛的一种，主要分布于长江流域、南岭山脉山区等地，是我国生产抗癌药物紫杉醇 (Taxol)的主要树种。紫杉醇是红豆杉属植物特有的次生代谢产物，它是最具抗癌活性的天 然化合物之一，也是目前国际市场上最热门的新型抗癌药物。紫杉醇的作用机理为促进微 管蛋白聚合抑制解聚，保持微管蛋白稳定，抑制细胞有丝分裂，主要用于治疗肺癌、白血病、 前列腺癌、子宫癌等肿瘤疾病及艾滋病。然而，紫杉醇在红豆杉属植物中的含量相当低（占 树皮干重的〇. 〇1%~〇. 06%左右)，而红豆杉植物中含有许多与紫杉醇结构相似的其它紫杉烷 (Taxanes)。由于这些紫杉烷类化合物在化学结构和极性等方面都同紫杉醇极为相似，导致 紫杉醇的分离比较困难，分离纯化工艺复杂。 目前紫杉醇的分离纯化方法主要有：（1)柱层析法，但操作比较复杂，效率不高， 而且需要不同填料结合使用；（2)制备型高效液相色谱法，对设备和试剂要求高，成本较 高，难以规模化生产；（3)高速逆流色谱法，需要进行大量实验选择合适的溶剂系统；（4)超 临界流体萃取法，设备成本高，提取得到的化合物纯度较低。 因此，研究出一套简单可行的分离纯化方案对提高植物中紫杉醇的利用率具有非 常重要的意义。 紫杉醇的结构式如下： 【权利要求】1. ，其特征在于，包括如下步骤：51. 原料处理：将粉碎的红豆杉材料过筛，用甲醇浸泡，超声或回流提取后，经减压浓 缩得到浸膏；浸膏依次用石油醚和乙酸乙酯进行萃取，得到乙酸乙酯浸膏；52. 碱性氧化铝柱层析：乙酸乙酯浸膏用二氯甲烷溶解后，利用碱性氧化铝柱层析；以 二氯甲烷-甲醇溶液为洗脱剂，洗脱液经减压浓缩得到富含紫杉醇的组分1 ;53. 部分沉淀法处理：将组分1以5?10 :1 mg/mL的料液比，用45%?55%的甲醇-水 溶液超声溶解，过滤，再_20°C?10°C放置沉淀24?72 h后过滤，得到紫杉醇粗品；54. 快速制备液相色谱分离： S4. 1.色谱柱预处理：以体积浓度为50%?75%的甲醇-水溶液为洗脱体系溶液平衡 制备型中低压液相色谱柱； S4. 2.进样：步骤S3获得的紫杉醇粗品加入体积浓度70%?90%的甲醇-水溶解，得浓 度为100?250 mg · ml/1的样品溶液，离心，取上清，得到样品溶液，进样体积为1?5 mL ; S4. 3.洗脱：以体积浓度为50%?75%的甲醇-水溶液为洗脱体系溶液洗脱色谱柱，流 速控制在8?15 mL · mirT1，收集洗脱液； S4. 4.洗脱液经减压浓缩和真空干燥，得到紫杉醇固体。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1所述过筛是过24目筛；步骤S1 所述料液比为1 :1〇?20 g/mL ;所述超声的时间为0. 5?2 h。3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2的具体操作如下： S2.1.层析用碱性氧化铝190°C干燥6 h后，置干燥器中放至室温，用二氯甲烷溶液浸 泡，超声脱气5 min，装柱，平衡； S2. 2.乙酸乙酯浸膏用二氯甲烷溶解至浓度为100?250 mg · ml/1，离心取上清液，得 到样品溶液； S2. 3.清洗柱后上样，以甲醇体积浓度为2%?5%的二氯甲烷-甲醇溶液为洗脱剂除去 未被吸附的杂质，流速为3?5mL · mirT1，洗脱50 min ; S2. 4.再以甲醇体积浓度为5%?10%的二氯甲烷-甲醇溶液为洗脱剂洗脱色谱柱，流 速为3?5 mLmiiT1，洗脱30 min，收集洗脱液，60°C以下减压浓缩得到富含紫杉醇的组分 1〇4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S3所述部分沉淀法处理是将组分1 以8. 9 :1 mg/mL的料液比，用48. 1%的甲醇-水溶液超声溶解后，过滤，再-20°C放置沉淀 48. 7 h后过滤。5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S4.1.所述制备型中低压液相色谱 柱为C18键合相填料；色谱柱填料平均粒径为30?6〇Mm ;所述甲醇-水溶液的用量为柱体 积的5?10倍。6. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S4. 3.的洗脱过程采用在线双波长 紫外检测，自动收集洗脱液，紫外检测波长为227 nm和254 nm;步骤S4. 4.所述真空干燥 的温度为30°C?60°C，优选温度为30°C?35°C。【文档编号】C07D305/14GK104230858SQ201410388561【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年8月8日 优先权日:2014年8月8日 【专利技术者】徐新军, 梁智坤, 陶俊妃 申请人:中山大学本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种从红豆杉枝叶或树皮中分离纯化紫杉醇的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.原料处理：将粉碎的红豆杉材料过筛，用甲醇浸泡，超声或回流提取后，经减压浓缩得到浸膏；浸膏依次用石油醚和乙酸乙酯进行萃取，得到乙酸乙酯浸膏；S2.碱性氧化铝柱层析：乙酸乙酯浸膏用二氯甲烷溶解后，利用碱性氧化铝柱层析；以二氯甲烷‑甲醇溶液为洗脱剂，洗脱液经减压浓缩得到富含紫杉醇的组分1；S3.部分沉淀法处理：将组分1以5～10：1 mg/mL的料液比，用45%～55%的甲醇‑水溶液超声溶解，过滤，再‑20℃～10℃放置沉淀24～72 h后过滤，得到紫杉醇粗品；S4.快速制备液相色谱分离：S4.1.色谱柱预处理：以体积浓度为50%～75%的甲醇‑水溶液为洗脱体系溶液平衡制备型中低压液相色谱柱；S4.2.进样：步骤S3获得的紫杉醇粗品加入体积浓度70%～90%的甲醇‑水溶解，得浓度为100～250 mg·mL‑1的样品溶液，离心，取上清，得到样品溶液，进样体积为1～5 mL；S4.3.洗脱：以体积浓度为50%～75%的甲醇‑水溶液为洗脱体系溶液洗脱色谱柱，流速控制在8～15 mL·min‑1，收集洗脱液；S4.4.洗脱液经减压浓缩和真空干燥，得到紫杉醇固体。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：徐新军，梁智坤，陶俊妃，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东;44
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