超声-微波协同提取的山茱萸环烯醚萜苷及其提取和测定方法技术

本发明专利技术超声-微波协同提取山茱萸环烯醚萜苷的方法包括如下步骤，1)得到山茱萸粗粉；2)将山茱萸粗粉按料液比为1:5～1:25的比例加入体积分数为80％的甲醇溶液并密封，称定重量，连接好冷凝装置，在微波功率300～700W，超声功率120～600W的条件下提取3～15min得到提取液；3)将提取液抽滤后得到滤液，经定容过滤浓缩干燥纯化后得到本发明专利技术提供的山茱萸环烯醚萜苷。山茱萸环烯醚萜苷测定方法包括如下步骤，a.混合对照品溶液的制备；b.供试品溶液的制备，c.采用HPLC-UV法测定混合对照品及供试品中莫诺苷、马钱苷、獐芽菜苷和山茱萸新苷的含量；d.根据液相色谱分析结果计算分别得到4种苷的含量。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术超声-微波协同提取山茱萸环烯醚萜苷的方法包括如下步骤，1)得到山茱萸粗粉；2)将山茱萸粗粉按料液比为1:5～1:25的比例加入体积分数为80％的甲醇溶液并密封，称定重量，连接好冷凝装置，在微波功率300～700W，超声功率120～600W的条件下提取3～15min得到提取液；3)将提取液抽滤后得到滤液，经定容过滤浓缩干燥纯化后得到本专利技术提供的山茱萸环烯醚萜苷。山茱萸环烯醚萜苷测定方法包括如下步骤，a.混合对照品溶液的制备；b.供试品溶液的制备，c.采用HPLC-UV法测定混合对照品及供试品中莫诺苷、马钱苷、獐芽菜苷和山茱萸新苷的含量；d.根据液相色谱分析结果计算分别得到4种苷的含量。【专利说明】超声-微波协同提取的山茱萸环烯醚萜苷及其提取和测定 方法
本专利技术属于山茱萸环烯醚萜苷的提取和测定领域，具体为超声-微波协同提取的 山茱萸环烯醚萜苷及其提取和测定方法。
技术介绍
山茱萸（Cornus officinalis Sieb. et Zucc.)为山茱萸科植物山茱萸的干燥成熟 果肉，其味酸、涩，性微温，归肝、肾经，具有补益肝肾、涩精固脱之功效，主治眩晕耳鸣、腰膝 酸痛、阳痿遗精、遗尿尿频、崩漏带下、大汗虚脱、内热消渴。主产于我国陕西、浙江和河南等 省，四川、安徽、山东、山西等地亦有栽培。山茱萸是常用中成药"六、八味地黄丸"、"杞菊地 黄丸"等的原料，为我国传统名贵中药材，是国家40种用量较大的重点药材之一。近年来， 国内外学者对山茱萸的多种有效成分进行了研究，从中分离得到环烯醚萜苷类、总多糖、鞣 质和皂苷等多种活性成分，莫诺苷、马钱苷、獐芽菜苷和山茱萸新苷为环烯醚萜苷类物质中 的主要成分，具有抗肿瘤、降血糖、保肝和调节免疫等药理作用。因此，山茱萸环烯醚萜苷的 开发及利用对人体的功能保健具有重要意义。 山茱萸环烯醚萜苷的提取方法主要为索式提取、加热回流提取、超声辅助提取、微 波辅助提取、索式提取和加热回流提取这两种传统方法均具有提取时间长，提取率低，提取 物结构易被破坏等缺点。而环烯醚萜苷类成分性质大多不稳定，遇酸、高温等易分解，而索 式提取和加热回流提取法正是利用高温冷凝回流使原料成分析出，而单纯的超声辅助提取 可以利用超声波产生强烈的振动、空化和搅拌等作用，加速物质的溶解度和运动速度，但是 提取时间相对较长；微波辅助提取法具有选择性高、提取时间短等优点，但其受热不均匀。 现有技术中，不仅对山茱萸环烯醚萜苷的提取方法不能满足要求，而且不能对提 取后得到产物中的有效物质的含量进行快速有效的同时分离和测定，测定山茱萸多种有效 成分的HPLC色谱方法具有色谱峰分离度低，且各色谱峰没有完全达到基线分离。
技术实现思路
针对现有技术中存在的问题，本专利技术提供一种操作简单，耗时短，提取效率高，检 测准确，重现性好的。 本专利技术是通过以下技术方案来实现： 本专利技术超声-微波协同提取山茱萸环烯醚萜苷的方法，包括如下步骤， (1)将新鲜成熟的山茱萸果实在开水中浸泡数分钟后，流水冲洗冷却，剥除果核； 将剩余的果肉干燥后粉碎，过40目筛，得到山茱萸粗粉； (2)称取一定量的山茱萸粗粉，置于反应容器中，按料液比为1:5?1:25的比例 加入体积分数为80%的甲醇溶液并密封，称定重量，连接好冷凝装置，在微波功率300? 700W，超声功率120?600W的条件下提取3?15min得到提取液； (3)将提取液抽滤后得到滤液，将滤液用80%的甲醇溶液补充至称定的重量，摇 匀过0. 22 μ m微孔滤膜，浓缩干燥，再经纯化后得到山茱萸环烯醚萜苷。 优选的，步骤2)中，1:15?1:25的比例加入体积分数为80%的甲醇溶液并密封， 称定重量，连接好冷凝装置，在微波功率500?700W，超声功率240?480W的条件下提取 6?12min得到提取液。 优选的，步骤2)中，1:21的比例加入体积分数为80%的甲醇溶液并密封，称定重 量，连接好冷凝装置，在微波功率641W，超声功率360W的条件下提取9min得到提取液。 进一步的，料液比1:21，微波功率为641W，超声功率为360W和时间9min的提取条 件由响应面法优化得到，步骤如下； 1)制备山茱萸环烯醚萜苷样品液；精密称取山茱萸粗粉l.OOg，置于反应瓶中， 加入80%甲醇溶液密封，称定重量，连接好回流装置，超声微波组合反应系统中提取，抽 滤，所得滤液再用80%甲醇溶液补至原重量，摇匀，过0.22 μ m微孔滤膜，得到山茱萸环 烯醚萜苷样品液备用；分别精密称取莫诺苷、马钱苷、獐芽菜苷、山茱萸新苷对照品1.00、 0. 50、0. 10、0. 20mg，置lmL容量瓶中，用色谱甲醇溶解并定容，0. 22 μ m微孔滤膜过滤即得 1. 00mg/mL莫诺苷、0· 50mg/mL马钱苷、0· 10mg/mL猜芽菜苷和0· 20mg/mL山茱萸新苷混合对 照品溶液；绘制标准曲线得线性回归方程，并根据线性回归方程计算出山茱萸样品液中环 烯醚萜苷的含量； 2)单因素实验；根据步骤1)中山茱萸环烯醚萜苷样品液的制备方法，分别按料液 t匕、超声功率、微波功率和提取时间四个单因素设计若干组单因素实验； 3)响应面法优化；以山茱萸环烯醚廠苷提取率为响应因子，采用Design-Expert 软件中的Box-Behnken原理在步骤2)中单因素实验的基础上进行响应面实验，模拟得到二 次多元回归方程如下： R1 = 26. 25+0. 49A-0. 098B+1. 42C-0. 080D+0. 21AB+0. 65AC+0. 88AD-0. 29BC+0. 54 BD-0. 22CD-0. 91A2-1. 02B2-2. 89C2 其中，R1为相应因子，A为微波功率的影响量，B为超声功率的影响量，C为料液比 的影响量，D为时间的影响量； 4)通过Design-Expert软件对回归方程的求解，得到山茱萸环烯醚廠苷提取的最 佳条件为：料液比1:21. 45、微波功率640. 57W、超声功率356. 59W、时间9. 22min ;再以实际 操作为约束条件，将修正得到最佳提取工艺参数为：料液比1:21、微波功率641W、超声功率 360W、时间 9min。 本专利技术超声-微波协同提取的山茱萸环烯醚萜苷，由所述的任意一种所述的提 取方法制得。 再进一步，山茱萸环烯醚萜苷至少包括莫诺苷、马钱苷、獐牙菜苷和山茱萸新苷四 种物质。 本专利技术超声-微波协同提取的山茱萸环烯醚萜苷的测定方法，对再进一步中所述 的山茱萸环烯醚萜苷进行测定，包括如下步骤， a.混合对照品溶液的制备；分别精密称取莫诺苷、马钱苷、獐芽菜苷、山茱萸新苷 对照品1. 〇〇、〇. 50、0. 10、0. 20mg，置lmL容量瓶中，加色谱甲醇溶解并定容，0. 22μπι微孔滤 膜过滤即得1. 〇〇mg/mL莫诺苷、0· 50mg/mL马钱苷、0· 10mg/mL猜芽菜苷和0· 20mg/mL山茱 萸新苷混合对照品溶液； b.供试品溶液的制备，精密称取过40目筛的山茱萸粉末1. 00g，置于X0-200型专 用玻璃本文档来自技高网...

【技术保护点】
超声‑微波协同提取山茱萸环烯醚萜苷的方法，其特征在于，包括如下步骤，(1)将新鲜成熟的山茱萸果实在开水中浸泡数分钟后，流水冲洗冷却，剥除果核；将剩余的果肉干燥后粉碎，过40目筛，得到山茱萸粗粉；(2)称取一定量的山茱萸粗粉，置于反应容器中，按料液比为1:5～1:25的比例加入体积分数为80％的甲醇溶液并密封，称定重量，连接好冷凝装置，在微波功率300～700W，超声功率120～600W的条件下提取3～15min得到提取液；(3)将提取液抽滤后得到滤液，将滤液用80％的甲醇溶液补充至称定的重量，摇匀过0.22μm微孔滤膜，浓缩干燥，再经纯化后得到山茱萸环烯醚萜苷。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：康杰芳，杨宁，王红菊，王韶君，白嫄，王喆之，
申请(专利权)人：陕西师范大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61