一种海洋细菌可湿性粉剂的制备方法及其用途技术

本发明专利技术是一种海洋细菌可湿性粉剂的制备方法，其步骤是选用海洋细菌GM-1菌株制备菌株种子液，然后介入到装有发酵培养基的发酵罐中对GM-1菌株进行发酵，制备GM-1菌株发酵液；按饱和吸附量向海洋细菌GM-1的发酵液中加入载体硅藻土，使载体吸附菌体，菌体形成芽孢后，离心，沉淀烘干，即得GM-1菌株菌粉；向菌粉中加入助剂，气流粉碎机粉碎过300目筛，即得成品海洋细菌可湿性粉剂。本发明专利技术方法采用现有的海洋细菌制成可湿性粉剂，其可操作性强。制得的可湿性粉剂的性质和稳定性好，活菌数含量可以达到4.90×1010cfu/g，可湿性粉剂对水稻纹枯病有较高的防治效果。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术是一种海洋细菌可湿性粉剂的制备方法，其步骤是选用海洋细菌GM-1菌株制备菌株种子液，然后介入到装有发酵培养基的发酵罐中对GM-1菌株进行发酵，制备GM-1菌株发酵液；按饱和吸附量向海洋细菌GM-1的发酵液中加入载体硅藻土，使载体吸附菌体，菌体形成芽孢后，离心，沉淀烘干，即得GM-1菌株菌粉；向菌粉中加入助剂，气流粉碎机粉碎过300目筛，即得成品海洋细菌可湿性粉剂。本专利技术方法采用现有的海洋细菌制成可湿性粉剂，其可操作性强。制得的可湿性粉剂的性质和稳定性好，活菌数含量可以达到4.90×1010cfu/g，可湿性粉剂对水稻纹枯病有较高的防治效果。【专利说明】
本专利技术涉及一种抗菌剂的制备方法，特别是一种海洋细菌活菌可湿性粉剂的制备 方法，本专利技术还涉及该海洋细菌活菌可湿性粉剂的用途。
技术介绍
水稻纹枯病是我国水稻三大主要病害之一，一般发病田 块能导致减产159Γ 20%，严重的可达60% ~ 70%，甚至绝收，严重威胁水稻的高产稳产。目 前尚缺乏免疫和高抗品种，纹枯病的防治主要依靠井R霉素，长期使用单一农药容易产生 抗药性，甚至已出现了抗药性，生物防治已经成为水稻纹枯病防治研究的重点，国内外很多 学者开展水稻纹枯病的生物防治研究，筛选出多个对纹枯病菌有较好防治效果的微生物菌 株，有的已经用于生产。 由淮海工学院海洋学院实验室从连云港海域海泥中筛选出的海洋细菌GM-1菌株 是解淀粉芽孢杆菌，具有较强的抑菌作用，对9种植物病 原菌均有很强的抑菌作用，而且在光照和紫外线照射下，GM-1菌株的稳定性良好，在pH值 6?8的条件下，GM-1菌株的抗菌作用稳定，且对蛋白酶不敏感。GM-1菌株在以下公开出版 物上均有记截：《油菜菌核病菌拮抗海洋细菌GM-1菌株的种类鉴定及抑菌作用研究》（《植 物保护》2013, 39 (2) 50 - 60)、《海洋解淀粉芽孢杆菌GM-1培养基及摇瓶发酵条件优化》 (作物杂志，2013. 3)、《海洋解淀粉芽孢杆菌GM-1菌株发酵液抗菌谱及稳定性测定》(农药第 51卷第10期，2012年10月）。 GM-1菌株具有广谱性和较强的稳定性，表现出良好的开发应用前景。但现在技术 中还没有对其具体的应用进行研发，而该研发对对于减少化学农药的使用，避免井R霉素 抗药性的产生具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种抗菌效果好的、制 备方法简单的海洋细菌可湿性粉剂的制备方法。 本专利技术所要解决的另一个技术问题是提供了前述海洋细菌可湿性粉剂的制备方 法制得的海洋细菌可湿性粉剂的用途。 本专利技术所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本专利技术是一种海洋 细菌可湿性粉剂的制备方法，其特点是，其步骤如下： (1) 海洋细菌GM-1菌株种子液的制备：将活化的海洋细菌GM-1菌株斜面菌种用2ml 无菌水清洗下，配制成浓度为l〇9cfu/ml的菌悬液，接入到装有50miro培养基的250ml三 角瓶中，28°C、180r/min摇床培养24h，即得种子液，调整浓度为为10 9个细胞/mL作为种子 液； (2) 发酵：用50L发酵罐对海洋细菌GM-1菌株进行发酵，制备海洋细菌GM-1菌株发酵 液；发酵条件：装液量30L，接种量7%，种子液菌龄24h、浓度10 9cfu/ml，温度28°C，搅拌速 度200r/min，通气量3L/min，发酵时间36h ;生物量达2. 40 X 101(lcfu/mL ;得GM-1菌株发酵 液； (3)成品粉剂制备：按饱和吸附量向发酵好的GM-1菌株发酵液中加入载体硅藻土，每 间隔lh搅拌一次，使载体充分吸附菌体，48h后GM-1菌体形成芽孢后，离心，沉淀置于60°C 电热恒温鼓风干燥箱中烘干，即制得海洋细菌GM-1菌粉；最后将菌粉与稳定剂硬脂酸钙、 分散剂聚乙烯醇、湿润剂十二烷基苯磺酸钠按重量比75 :15 :6 :4进行混合，气流粉碎机粉 碎，过300目筛，制备得到海洋细菌GM-1菌株可湿性粉剂。 本专利技术中所述的海洋细菌GM-1菌株在《油菜菌核病菌拮抗海洋细菌GM-1菌株的 种类鉴定及抑菌作用研究》（《植物保护》2013,39 (2)50 - 60)中已经公开，该菌株是为公 知公用的材料，如公众需要，淮海工学院海洋学院实验室可以对外提供。 本专利技术所述的制备方法所制得的可湿性粉剂对植物病原真菌的毒力测定方法，其 步骤如下：将制备得到的GM-1菌株可湿性粉剂加入到装有70mL PDA培养基的250ml的 三角瓶中，混合均匀，制成浓度不同的含药平板，每个三角瓶为一个浓度，平均倒入3个培 养皿中，为3个重复；打取直径为5mm的供试水稻纹枯病菌，核 盘菌(5W<9roii/?io 黄瓜枯萎病菌〇工_75/7(〇--)，菠菜早疫病菌 4种植物病原真菌菌苔，放入不同的含药平板中央，28°C下培养5d ; 以不加粉剂为对照，用十字交叉法测量菌落直径，计算不同浓度的GM-1菌株可湿性粉剂粉 剂对不同病原真菌的抑制率，查询抑制率几率值，以粉剂浓度的对数为横坐标，抑制率的机 率值为纵坐标，建立GM-1可湿性粉剂对4种植物病原真菌的毒力回归方程，计算的EC 5(I和 ec90。 本专利技术所述的制备方法制得的海洋细菌可湿性粉剂作为防治水稻纹枯病的用途。 与现有技术相比，本专利技术制备方法采用现有的海洋细菌制成可湿性粉剂，其可操 作性强，制得的可湿性粉剂的性质和稳定性好，粉剂中活菌数量达到4. 90X 101° cfu/g，可 以作为防治水稻纹枯病的农药。 【具体实施方式】 以下进一步对本专利技术的技术方案进行描述，以使本领域技术人员进一步的理解本 专利技术，而不构成对本专利技术权利的限制。 实施例1，一种海洋细菌可湿性粉剂的制备方法，其步骤如下： (1) 海洋细菌GM-1菌株种子液的制备：将活化的海洋细菌GM-1菌株斜面菌种用2ml 无菌水清洗下，配制成浓度为l〇9cfu/ml的菌悬液，接入到装有50miro培养基的250ml三 角瓶中，28°C、180r/min摇床培养24h，即得种子液，调整浓度为为10 9个细胞/mL作为种子 液； (2) 发酵：用50L发酵罐对海洋细菌GM-1菌株进行发酵，制备海洋细菌GM-1菌株发酵 液；发酵条件：装液量30L，接种量7%，种子液菌龄24h、浓度10 9cfu/ml，温度28°C，搅拌速 度200r/min，通气量3L/min，发酵时间36h ;生物量达2. 40 X 101(lcfu/mL ;得GM-1菌株发酵 液； (3) 成品粉剂制备：按饱和吸附量向发酵好的GM-1菌株发酵液中加入载体硅藻土，每 间隔lh搅拌一次，使载体充分吸附菌体，48h后GM-1菌体形成芽孢后，离心，沉淀置于60°C 电热恒温鼓风干燥箱中烘干，即制得海洋细菌GM-1菌粉；最后将菌粉与稳定剂硬脂酸钙、 分散剂聚乙烯醇、湿润剂十二烷基苯磺酸钠按重量比75 :15 :6 :4进行混合，气流粉碎机粉 碎，过300目筛，制备得到海洋细菌GM-1菌株可湿性粉剂。 实施例2,海洋细菌活菌粉剂的制备方法筛选及应用实验： 1材料与方法 1. 1菌种 海洋解淀粉本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种海洋细菌可湿性粉剂的制备方法，其特征在于，其步骤如下：（1）海洋细菌GM‑1菌株种子液的制备：将活化的海洋细菌GM‑1菌株斜面菌种用2ml无菌水清洗下，配制成浓度为109cfu/ml的菌悬液,接入到装有50mlPD培养基的250ml三角瓶中，28℃、180r/min摇床培养24h，即得种子液，调整浓度为109个细胞/mL作为种子液；（2）发酵：用50L发酵罐对海洋细菌GM‑1菌株进行发酵，制备海洋细菌GM‑1菌株发酵液；发酵条件：装液量为30L，接种量7%，种子液菌龄24h、浓度109cfu/ml，温度28℃，搅拌速度200r/min，通气量3L/min，发酵时间36h；生物量达2.40×1010cfu/mL；得GM‑1菌株发酵液；（3）成品粉剂制备：按饱和吸附量向发酵好的GM‑1菌株发酵液中加入载体硅藻土，每间隔1h搅拌一次，使载体充分吸附菌体，48h后GM‑1菌体形成芽孢后，离心，沉淀置于60℃电热恒温鼓风干燥箱中烘干，即制得海洋细菌GM‑1菌粉；最后将菌粉与稳定剂硬脂酸钙、分散剂聚乙烯醇、湿润剂十二烷基苯磺酸钠按重量比75：15：6：4进行混合，气流粉碎机粉碎，过300目筛，制备得到海洋细菌GM‑1菌株可湿性粉剂。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：暴增海，马桂珍，王淑芳，周向红，
申请(专利权)人：淮海工学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32