本发明专利技术涉及一种调节细胞内HUWE1的表达水平的方法，所述方法包括通过调节细胞内BARD1的表达水平来调节细胞内HUWE1的表达水平。具体而言，一方面，所述方法包括用含有编码BARD1的核苷酸的表达质粒转染所述细胞，从而使所述细胞中HUWE1的表达水平降低。另一方面，所述方法包括用BARD1的siRNA转染所述细胞，从而使所述细胞中HUWE1的表达水平提高。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种调节细胞内HUWE1的表达水平的方法，所述方法包括通过调节细胞内BARD1的表达水平来调节细胞内HUWE1的表达水平。具体而言，一方面，所述方法包括用含有编码BARD1的核苷酸的表达质粒转染所述细胞，从而使所述细胞中HUWE1的表达水平降低。另一方面，所述方法包括用BARD1的siRNA转染所述细胞，从而使所述细胞中HUWE1的表达水平提高。【专利说明】-种调节细胞内HUWE1表达水平的方法
本专利技术涉及蛋白质表达调控领域，具体而言，本专利技术涉及一种通过调节细胞内 BARD1的表达水平来调节细胞内HUWE1的表达水平的方法。
技术介绍
乳腺癌是一种常见恶性肿瘤，严重危害女性健康。在中国，乳腺癌的发病率逐年递 增，发病年龄提前，死亡率也不断攀升。大约5-10%的乳腺癌为遗传性乳腺癌，其发病具有 明显的家族聚集性和遗传倾向；其余大部分为散发性乳腺癌，目前对其发病原因并不明确。 蛋白HUWE1 (人源蛋白，含有HECT、UBA和WWE结构域1，NCBI序列登录号为 NM_031407. 4)是一个包含4374个氨基酸残基的大分子，分子量约500kDa。其编码基因位 于染色体Xpll，但在乳腺癌中已检测到其编码基因延伸至染色体Xpll-13上（Xie D，Jauch A，Miller C W, et al. Discovery of over-expressed genes and genetic alterations in breast cancer cells using a combination of suppression subtractive hybridization, multiplex FISH and comparative genomic hybridization . Int J Oncol. 2002,21 (3) :499-507)。其分子 C 端有一个 HECT 结构域（与 E6-AP 羧基 端同源，4036-4374aa)，约有350个氨基酸，这个模序最初发现于细胞内泛素 E3连接酶 E6-AP(E6-相关蛋白）蛋白质中，当E6-AP与致癌的人乳头瘤病毒E6蛋白结合后，这个 复合物具有E3泛素连接酶的活性，就能结合并泛素化降解抑癌基因 P53(SChefTner M， Huibregtse J M， Vierstra R D， et al.The HPV_16E6and E6-AP complex functions as a ubiquitin-protein ligase in the ubiquitination of p53. Cell. 1993, 75(3) :495-505 ；Munger K, Howley P M. Human papillomavirus immortalization and transformation functions · Virus Res. 2002,89 (2) :213-228)。HECT 结构域中含有半 胱氨酸残基，它能够与泛素分子形成硫酯键，对于含有HECT结构域的E3蛋白酶发挥酶活 性起到非常重要的作用（Pickart C M.Mechanismsunderlying ubiquitination.Annu Rev Biochem. 2001，70 :503-533 ;Huang L，Kinnucan E，Wang G，et al. Structure of an E6AP-UbcH7complex ：insights into ubiquitination by the E2-E3 enzyme cascade. Science. 1999,286(5443) :1321-1326)。HECT结构域为酶催化反应区，此结构域内氨基酸 的突变如4341位的半胱氨酸（Cys，C)突变为丙氨酸（Ala，A)之后，可以破坏其E3连接 酶活性（Zhong Q，Gao W，Du F，et al.Mule/ARF-BPl，a BH3_only E3ubiquitin ligase， catalyzes the polyubiquitination of Mcl-land regulates apoptosis. Cell. 2005, 121 (7) :1085-1095);此外，HUWE1 的 N-端具有以下结构域：ARLDl(104-304aa)和 ARLD2(424-815aa)结构域，作用还不是很清楚；一个泛素相关结构域（UBA，1318-1354aa)， 与蛋白质泛素化途径相关，如DNA损伤蛋白Rad23、Cbl中含有此结构（Hicke L，Dunn R. Regulation of membrane protein transport by ubiquitin and ubiquitin-binding proteins. Annu Rev Cell Dev Biol. 2003,19 ：141-172 ；Buchberger A. From UBA to UBX ：new words in the ubiquitin vocabulary. Trends Cell Biol.2002,12 (5)： 216-221) ;WWE结构域（1612-1692aa)，被认为是保守的蛋白质相互作用模序；BH3(Bcl-2同 源区域3,1972-1994aa)结构域，其序列与抗凋亡蛋白Bcl-2有高度同源性，可能与细胞凋 亡有关。 HUWE1的发现及命名经历了一系列变化。在1994年Gu等人发现了此蛋白的一个 小片段，命名为UREB1，其大小比全长蛋白少了约3000个氨基酸残基，它能够结合前脑啡肽 原基因的启动子区域（Gu J，Ren K，Dubner R，et al. Cloning of a DNA binding protein that is a tyrosine kinase substrate and recognizes an upstream initiator-like sequence in the promoter of the preprodynorphin gene. Brain Res Mol Brain Res. 1994,24(1-4) :77-88),但其生物学功能还不是很清楚。1995年Gu等人又发现了在 细胞内UREB1的酪氨酸位点可以被磷酸化（Gu J，Dubner R，Fornace A J，et al.UREBl， a tyrosine phosphorylated nuclear protein, inhibits p53 transactivation. Oncogene. 1995,11 (10) :2175-2178),酪氨酸磷酸化后能够抑制P53的转录激活作用，而酪 氨酸突变后其抑制作用明显减弱。HUWE1的结构与人乳头瘤病毒E6相关蛋白（E6-AP)有 高度同源性。之后也被称为ARF-BP1(ARF-结合蛋白1)，能够直接结合ARF蛋白（人类中 称为P14ARF，鼠中叫做pl9 AKF)，与P53依本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种调节细胞内HUWE1的表达水平的方法，所述方法包括通过调节细胞内BARD1的表达水平来调节细胞内HUWE1的表达水平。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：邵根泽，王晓珍，朱柏力，李莉，杨华，林明，张沙，周柔丽，严考文，易娟，卢广，匡静宇，丁羚昱，漆豪，王亚清，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：北京;11
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