子组生物单元的选择性释放制造技术

提供了一种从包括在异质组生物单元中的子组生物单元的实体一个或多个成员单独释放的方法。该方法包括通过连接体将包括所述子组生物单元的所述组生物单元结合至所述实体。结合之后，确定在所述实体上的所述一个或多个成员的位置。一旦位置被确定，则就将局部物理脉冲施加至所述一个或多个成员。通过分离连接体，局部物理脉冲将一个或多个成员从实体单独释放。

【技术实现步骤摘要】
子组生物单元的选择性释放
本专利技术涉及一种从包括在异质组生物单元中的子组生物单元的实体一个或多个成员单独释放的方法、一种通过检测从受试者获得的子组生物单元来检测所述受试者疾病的方法、以及一种将子组生物单元的一个或多个成员从一组生物单元中分离的方法。
技术介绍
用于分析细胞生物学的现代技术已经创建了日益增加的制备由同质群体细胞或者检测或分离单个细胞或者小颗粒构成的样品的需求。基因组和蛋白质组的研究、遗传克隆、干细胞研究、以及基于细胞的筛选都将从增强的能力中获益，以获得单个细胞或小同质生物样品用于随后的分析。这些样品包括各种分子，比如DNA或RNA以及细胞或生物体。在从混合群体中选择细胞的情况下，必须分析具有所需特征的各个细胞，之后识别和分离所需的子群。用于哺乳动物细胞的标准分类方法需要细胞分散在单细胞悬浮液中，并且采用以此方式自然生长的造血细胞是最成功的。这些方法不太适用于贴壁细胞，目前最常见的细胞表型。通常，通过将贴壁细胞电镀在生长表面上然后使用显微镜寻找它们而对它们进行分析。用于将所关注的细胞与混合群体细胞分离的传统分选技术通常需要将贴壁细胞从它们的不利于细胞健康的生长表面酶或机械释放，或者涉及用于基于有限稀释或对选择性环境的基因工程抗性的选择的扩展协议。分离提供适于下游分析的完好细胞或颗粒的异质群体的单个细胞或颗粒或其中的低数量的有效方法仍不见踪影。
技术实现思路
本专利技术提供了用于将适于下游分析和诊断的单细胞或颗粒分离的新方法。提供了一种从包括在异质组生物单元中的子组生物单元的实体一个或多个成员单独释放的方法。该方法包括通过连接体将包括所述子组生物单元的所述组生物单元结合至所述实体。结合之后，确定在所述实体上的所述一个或多个成员的位置。一旦位置被确定，则就将局部物理脉冲施加至所述一个或多个成员。通过分离连接体，局部物理脉冲将一个或多个成员从实体单独释放。一种通过检测从受试者获得的子组生物单元来检测所述受试者疾病的方法，其中，所述子组生物单元是表示此外所提供的疾病。该方法包括提供包含至少一个子组生物单元的异质组生物单元，该组生物单元从受试者获得，且该组生物单元中的每个成员通过连接体被结合至实体，最好是固体支承。确定在实体上的子组生物单元的位置。然后，将局部物理脉冲施加至所述一个或多个成员。通过分离连接体，局部物理脉冲将一个或多个成员从实体单独释放。然后收获子组生物单元的一个或多个成员。通过收获子组生物单元的一个或多个成员，分离子组生物单元的一个或多个成员。然后对于存在表示该疾病的至少一个标记，分析所收获的一个或多个成员。公开了一种将子组生物单元的一个或多个成员从一组生物单元中分离的方法。该方法包括：提供包括至少一个子组生物单元的异质组生物单元，该组生物单元中的每个成员通过连接体被结合至实体，最好是固体支承；以及确定子组生物单元的所述一个或多个成员的位置；将局部物理脉冲施加至所述一个或多个成员，其中，通过分离所述连接体，所述局部物理脉冲将所述一个或多个成员从所述实体单独释放；分离子组生物单元的所释放的一个或多个成员。具体实施方式描述了一种从包括在异质组生物单元中的子组生物单元的实体一个或多个成员单独释放的方法。该方法包括：通过连接体将包括所述子组生物单元的所述组生物单元结合至所述实体；确定在所述实体上的所述一个或多个成员的位置；将局部物理脉冲施加至所述一个或多个成员，其中，通过分离所述连接体，所述局部物理脉冲将所述一个或多个成员从所述实体单独释放。术语“单独释放”是指可以释放子组的一个或多个成员，而不释放另一子组的任何其他成员。在一实施例中，可以单独释放子组的单个成员，而不释放该子组或任何其他子组的任何其他成员。“实体”是指子组生物单元所结合至的对象。在一实施例中，该实体是结合基体。在一实施例中，该结合基体是固体支承。下面将对固体支承的实施例进行进一步说明。术语“子组生物单元的成员”涉及子组的单独的部分。在其中生物单元是细胞的实施例中，成员可以是单个细胞。在其中生物单元是病毒颗粒的实施例中，成员可以是单个病毒颗粒。在其中生物单元是大分子的实施例中，成员还可以是属于子组大分子的单个大分子。除了已经列出的实施例之外，生物单元还可以是细胞、细胞器、细胞组分的一部分，比如蛋白质核酸、受体、标记、代谢物等。任何一个所述生物单元的成员将据此得出。术语“异质组生物单元”涉及其中不是所有成员都相同的组。组的一个或多个成员在至少一个特征方面不同于该组的其他成员。子组的一个或多个成员相同的话称为同质子组对象。例如，异质组生物单元可以是细胞，且该组可以包括不同的细胞类型，例如表达不同表面标记的细胞。在一实施例中，这样的表面标记可以具有特定子类型的细胞比如癌细胞的特征。如上所述，包括子组生物单元的一组生物单元通过连接体结合至实体。该连接体是能够结合该组生物单元的成员和该组生物单元的成员所结合至的实体的结构。因此，连接体形成了成员与实体之间的连接，从而允许成员被结合至实体。此外，连接体被形成为使得其可以在施加物理脉冲时被分解成多个部分。然后，这使得可以从实体释放成员。下面对连接体的具体实施例作进一步说明。在一实施例中，生物单元通过使用离心被固定在实体上。离心以足以允许细胞更迅速地接触实体而不会对细胞造成损害的速度进行。在一实施例中，细胞与实体直接接触。在另一实施例中，细胞与连接至实体的连接体接触。这种方法的优点在于可以更迅速地固定细胞。本文将对用于实施该方法的示例性装置进行说明。在上述方法中，确定所述一个或多个成员的位置。所述一个或多个成员的位置的确定可以采用本领域技术人员所公知的任何合适的装置来完成。在一实施例中，该位置的确定通过采用显微镜、扫描显微镜或光学扫描仪观察来进行。在一实施例中，采用特别结合至子组生物单元的一个或多个成员的荧光染料使所述一个或多个成员可见，并且光学荧光显微镜可用来定位。在一实施例中，显微镜是具有照相机和扫描或定位平台的自动显微镜，自动基于一个或多个成员的染色或它们的形状等，使用自动图像处理来找到一个或多个成员的位置。限定一个或多个成员的位置的坐标列表然后被转移至控制单元，用于定位物理脉冲来释放一个或多个成员。在另一实施例中，显微镜是手动显微镜。操作者选择子组生物单元的一个或多个成员。子组生物单元的所选择的一个或多个成员的坐标列表被转移至控制单元，用于定位物理脉冲来释放一个或多个成员。一旦确定子组生物单元的一个或多个成员的位置，则就将局部物理脉冲施加至要被释放的一个或多个成员。因此，可以精确地施加局部脉冲。在一实施例中，局部脉冲被施加至子组生物单元的单个成员。这具有的优点是，可以单独或共同地释放并收获子组生物单元的每个成员。在一实施例中，物理脉冲选自光子光源、热源及布置。布置是光源或热源与其他部件例如自由空间光学、光纤、机械布置的组合。具体的实施例集中于光源、光纤耦合光源、包括在每个交叉处具有光发射元件带有可寻址像素的矩阵的阵列光源；或包括在每个交叉处具有电本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从包括在异质组生物单元中的子组生物单元的实体一个或多个成员单独释放的方法，包括：‑通过连接体将包括所述子组生物单元的所述组生物单元结合至所述实体，‑确定在所述实体上的所述一个或多个成员的位置，‑将局部物理脉冲施加至所述一个或多个成员，其中，通过分离所述连接体，所述局部物理脉冲将所述一个或多个成员从所述实体单独释放。

【技术特征摘要】
2013.05.01 EP 13166110.01.一种从实体单独释放包括在异质组生物单元中的子组生物单元的一个或多个成员的方法，包括：
-通过连接体将包括所述子组生物单元的所述组生物单元结合至所述实体，
-确定所述一个或多个成员在所述实体上的位置，
-将局部物理脉冲施加至所述一个或多个成员，其中，通过分离所述连接体，所述局部物理脉冲将所述一个或多个成员从所述实体单独释放，
其中，所述连接体包括部分a和部分b，其中，所述部分a在将所述组生物单元结合至所述实体的过程中结合所述部分b，并且所述部分a在施加局部物理脉冲时与所述部分b分离，
其中，所述连接体分子包括寡核苷酸，其中，部分a是第一寡核苷酸，部分b是部分地互补于第一寡核苷酸序列的第二寡核苷酸。


2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述确定通过采用显微镜、扫描显微镜或光学扫描仪观察来进行。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述局部物理脉冲选自光子光源、热光源或其他布置。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，所述部分a通过由所述物理...

【专利技术属性】
技术研发人员：J布兰德梅尔，C彻鲁比尼，A德雷克斯勒，N格沃德，M科普，E奥斯特布罗克，E萨罗菲姆，
申请(专利权)人：霍夫曼拉罗奇有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH