本发明专利技术属于猪的遗传标记制备技术领域，具体涉及一种与猪胴体性状相关的分子标记制备及在标记辅助选择上的应用。所述的分子标记由GSK3α基因启动子序列克隆得到，它的核苷酸序列如序列表SEQIDNO：1所示。在序列表SEQIDNO：2所示序列的第154位碱基处有一个C154-A154的碱基突变，导致Hin1IPCR-RFLP多态性。本发明专利技术还公开了获得上述分子标记的制备方法和多态性检测方法的应用，为猪的标记辅助选择提供了新的遗传标记。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术属于猪的遗传标记制备
，具体涉及一种与猪胴体性状相关的分子标记制备及在标记辅助选择上的应用。所述的分子标记由GSK3α基因启动子序列克隆得到，它的核苷酸序列如序列表SEQIDNO：1所示。在序列表SEQIDNO：2所示序列的第154位碱基处有一个C154-A154的碱基突变，导致Hin1IPCR-RFLP多态性。本专利技术还公开了获得上述分子标记的制备方法和多态性检测方法的应用，为猪的标记辅助选择提供了新的遗传标记。【专利说明】GSK3 α基因启动子SNP作为猪胴体性状的遗传标记及应用
本专利技术属于动物分子标记制备
，具体涉及一种与猪胴体性状相关基因 GSK3 α基因启动子片段的克隆，分子标记的制备及在标记辅助选择上的应用。
技术介绍
遗传因素对猪重要经济性状的影响在不同的品种或者同一品种不同个体中存 在着差异，这些差异一部分是由于存在多基因的微效作用。但是这些经济性状也存在着 许多的单基因效果，这些基因就是影响猪经济性状的主效基因，这些基因可以用于标记 辅助选择来进行猪经济性状的改良（Rosenvold, K and Andersen, H.J. Factors of significance, for pork quality-a review. Meat Science 2003,64: 219-237·)。猪 的选择育种已经进行了几千年，如此强烈的选择产生了许多具有良好表型效应的新变异， 这些变异给我们提供了新的育种改良的方法（Andersson, L. Genetic dissection of phenotypic diversity in farm animals. Nat Rev Genet, 2001, 2: 130-138. )〇 由 于胴体性状属于低遗传力性状，通过传统的选择育种并不能快速并有效的选择，并且胴体 性状在测定方面也比较困难，代价也很昂贵（Gao, Y et.al. Application of genomic technologies to the improvement of meat quality of farm animals. Meat Science, 2007,77: 36-45.)。因此，利用鉴定的主效基因来进行分子标记辅助选择，通过遗传方面的 控制来改良猪胴体性状是一个很好的选择。 目前已经分离鉴定影响猪经济性状的主效基因还只仅限于几个重要的影响肌肉 品质的基因，比如：氟烷基因、酸肉基因你/以及基因，而影响胴体性状的主效基因还没 有研究报道，所以我们还需要寻找更多的影响猪胴体性状的主效基因，并且对其影响猪胴 体性状的分子机理与调控机制进行深入的研究。影响猪胴体性状的一个重要因素是蛋白质 合成代谢过程，因此本研究将重点在猪肌肉蛋白质合成通路来寻找影响猪胴体性状的重要 候选基因，揭示其在猪肌肉发育代谢过程中的作用机理和调控机制，并且检测影响猪胴体 性状的基因突变。 糖原合成酶激酶3 (glycogen synthase kinase 3，GSK3)是一种丝氨酸/苏氨酸 类蛋白激酶。1980年该激酶在肌肉组织中首先被发现并纯化出来，因为最初发现它是磷酸 化糖原合成酶的激酶之一（Woodgett, J. R. and Cohen, P. Multisite phosphorylation of glycogen synthase. Molecular basis for the substrate specificity of glycogen synthase kinase-3 and casein kinase-II (glycogen synthase kinase-5). Biochim Biophys Acta，1984，788: 339-347)，引起糖原合成酶磷酸化使其失活，所以被命名为糖 原合成酶激酶3。在哺乳动物中GSK3有两个高度同源的亚型GSK3a和GSK3 0，是由两个 不同的基因编码，在不同组织和细胞中广泛表达，尤其在脑组织中表达量最高(Woodgett， J. R. Molecular cloning and expression of glycogen synthase kinase-3/factor A. EMB0J，1990，9: 2431-2438.)。两种亚型在它们的激酶催化区域大约有97%的同源性， 但在其C-端和N-端则同源性较低，并且在GSK3 α的N端有一个富含甘氨酸的序列。 GSK3 α基因参与了许多的信号通路，其中就包括了 Wnt、Hedgehog和IGF-1等重 要的信号通路（Frame, S and Cohen, Ρ· GSK3 takes centre stage more than 20 years after its discovery. Biochemical Journal, 2001，359: 1-16)。膜岛素或者 IGF-1 作 用于靶细胞，激活下游的磷酯酰肌醇3激酶（PI3-kinase )，然后PI3K活化AKT，使后者磷酸 化（Ser-21，GSK3a和GSK3 0，Ser-9)，从而抑制GSK3的活性，然后在磷酸酯酶的作用下糖 原合成酶（GS)和真核生物翻译起始因子（elFB)去磷酸化，从而使糖原与蛋白质的合成正 常进行（Rommel，C et. al. Mediation of IGF-l-induced skeletal myotube hypertrophy by PI(3)K/Akt/mT0R and PI (3)K/Akt/GSK3 pathways. Nature Cell Biology, 2001, 3: 1009-1013)。GSK3 α在蛋白质合成和糖原代谢过程中起着重要的作用，肌肉组织是需要大 量蛋白质合成的部位。因此，我们推测猪GSK3 a基因可能是一个影响猪肌肉生长发育的重 要基因。另外，到目前为止仍没有见到研究猪GSK3CI基因启动子的相关报道。所以 申请人: 将猪GSK3 α基因作为影响猪胴体性状的重要侯选基因，研究该基因启动子区域突变位点 在群体中的多态性，并对这些多态位点与猪生产性状的关系进行了进一步的分析，期望能 够发现影响猪胴体性状的重要多态位点。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克隆与猪胴体性状相关的基因 GSK3 α基因的启动子区域，寻 找基因突变位点，并建立相应的多态性检测方法进行性状关联分析，为猪的标记辅助选择 提供一种有用的分子标记。 本专利技术通过以下技术实现： 一种作为分子标记应用的与猪胴体性状相关的GSK3 α基因启动子区域序列，全长为 1387bp，它的核苷酸序列如序列表SEQ ID N0:1所述。依据获得的如序列表SEQ ID N0: 1所述DNA序列设计引物，通过扩增和测序获得了 GSK3 α基因启动子部分核苷酸序列，该 序列长度为337bp，其中第154bp处有一个C154-A154的碱基突变，导致Hinll PCR-RFLP 多态性。 申请人:设计了一种检测基因片段突变的引物对，所述引物对的正向引物为：5' TAGGAAGCGTGAGGATGCA 3' 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种作为分子标记应用的与猪胴体性状相关的GSK3α基因启动子片段，它的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：2所述。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王林杰，张红平，李利，王艳，仲涛，侯郁果，王薏林，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川;51
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