识别流行性感冒血凝素的受体-结合袋状结构的广泛中和人类抗体制造技术

本发明专利技术的特征为与流行性感冒凝血素特异性地结合，并且减少或抑制凝血素与唾液酸结合的新颖流行性感冒抗体。本发明专利技术亦提供特征为新颖抗体和其用于预防或治疗流行性感冒感染的方法、组合物以及试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】识别流行性感冒血凝素的受体-结合袋状结构的广泛中和人类抗体相关申请案的对照参考本申请案主张于2011年8月3日提出申请的美国临时专利申请案第61/514,662号的优先权，其内容以参考方式全部并入本文。美国联邦赞助的研究下进行的专利技术的权利声明此研究成果是由来自美国国家卫生院的补助款第U19AI067854号和第P01GM62580号支持。美国政府对于本专利技术有特定权利。
技术介绍
流行性感冒病毒抗原性的周知季节性漂移说明了在先前感染的个体中缺乏长期免疫保护。血凝素(HA)是一种结合病毒受体、促进融合以及从低pH核内体穿透的三聚体表面碳水化合物蛋白，而且为流行性感冒病毒粒子的主表面抗原。HA呈现保守以及可变表位，但针对后者的中和抗体主宰对免疫接种和感染的反应。从而，对于发展可有效地治疗或预防流行性感冒的漂移株的广泛中和治疗剂有需求。
技术实现思路
如下述，本专利技术是基于广泛中和流行性感冒抗原变异体的新颖抗体的发现。本专利技术的特征为含有新颖抗体的组合物和试剂盒、以及使用此等新颖治疗分子治疗或预防流行性感冒病毒感染的方法。于方面中，本专利技术提供与流行性感冒血凝素(HA)的表位特异性地结合的单离的抗流行性感冒抗体或抗体片段。抗体或抗体片段与流行性感冒HA表位的结合减少或抑制流行性感冒HA与唾液酸的结合。于具体实施例中，流行性感冒HA的表位包括唾液酸结合结构域。于具体实施例中，HA为H1HA、H2HA、H3HA或H5HA(来自适应人类的H5病毒株的HA)。于相关具体实施例中，流行性感冒HA表位包括对应于来自A/SolomonIslands/3/2006的CDRH1残基158；CDRH2残基158至160；CDRH3残基135至136、190至195以及226；CDRLl残基222、225以及227；以及CDRL3残基187和189的氨基酸于相关具体实施例中，流行性感冒HA表位包括SEQIDNO：17至44中任一者所表示的氨基酸。于相关具体实施例中，流行性感冒HA表位包括SEQIDNO：17至44中任一者中的CH65至CH67结合残基(例如，图15中辨识的CH65至CH67结合残基)。于具体实施例中，抗流行性感冒抗体或抗体片段包括可变重(VH)链，而且其中VH链包括SEQIDNO：9、SEQIDNO：10、SEQIDNO：11或SEQIDNO：12中所表示的氨基酸序列。于具体实施例中，抗流行性感冒抗体或抗体片段包括一个或多个存在于SEQIDNO：9、SEQIDNO：10、SEQIDNO：11或SEQIDNO：12的可变重(VH)链氨基酸序列中的重链CDR区。于相关具体实施例中，一个或多个重链CDR区包括存在于SEQIDNO：9、SEQIDNO：10、SEQIDNO：11或SEQIDNO：12的可变重(VH)链氨基酸序列中的CDR3区。于具体实施例中，抗流行性感冒抗体或抗体片段包括可变轻(VL)链，而且其中VL链包括SEQIDNO：13、SEQIDNO：14、SEQIDNO：15或SEQIDNO：16所表示的氨基酸序列。于具体实施例中，抗流行性感冒抗体或抗体片段包括一个或多个存在于SEQIDNO：13、SEQIDNO：14、SEQIDNO：15或SEQIDNO：16的可变轻(VL)链氨基酸序列中的轻链CDR区。于相关具体实施例中，一个或多个轻链CDR区包括存在于SEQIDNO：13、SEQIDNO：14、SEQIDNO：15或SEQIDNO：16的可变重(VL)链氨基酸序列中的CDR3区。于具体实施例中，抗流行性感冒抗体或抗体片段包括i)可变重(VH)链氨基，其包括SEQIDNO：10所表示的氨基酸序列，以及ii)可变轻(VL)链，其包括SEQIDNO：14所表示的氨基酸序列。于具体实施例中，抗流行性感冒抗体或抗体片段包括可变重(VH)链，其中VH链的CDR3区包括Arg104、Ser105、Va1106、Asp107、Tyr109、Tyr110、Tyr112或其组合。于具体实施例中，抗流行性感冒抗体为单克隆抗体或其抗体片段。于具体实施例中，抗流行性感冒抗体为人源化抗体。于具体实施例中，抗体片段为Fab片段、Fab'片段、Fd片段、Fd'片段、Fv片段、dAb片段、F(ab')2片段、单链片段、双链抗体或线性抗体。于具体实施例中，抗流行性感冒抗体或抗体片段进一步包括与抗流行性感冒抗体或其抗体片段偶联的剂。于相关具体实施例中，与抗体或其抗体片段偶联的剂是治疗剂或可检测的标记。治疗剂可为任何适合与新颖抗体共享的治疗剂。此剂为本领域中周知，而且包含小分子、纳米粒子、多肽、放射性同位素、抑制性核酸等。于具体实施例中，治疗剂为抗病毒剂或毒素。于具体实施例中，治疗剂为减少流行性感冒病毒生产的siRNA、shRNA或反义核酸分子。可检测的标记可为适合与新颖抗体共享的任何可检测的标记。此标记为本领域中周知，而且包含可由光谱、光化学、生化、免疫化学、物理或化学手段检测的标记。于具体实施例中，可检测的标记为已制成可检测的酶、荧光分子、颗粒标记、电子致密试剂、放射性标记、微泡、生物素、地高辛或半抗原或蛋白质。于方面中，本专利技术提供含有本文所述的至少一种抗流行性感冒抗体或抗体片段的医药组合物。于具体实施例中，医药组合物含有医药可接受的载体、稀释剂或赋形剂。于方面中，本专利技术提供编码本文所述抗流行性感冒抗体或抗体片段的单离的多核苷酸。于相关方面中，本专利技术提供包括此单离的多核苷酸的表达载体。于进一步相关方面中，本专利技术提供包括此表达载体的宿主细胞。于方面中，本专利技术提供治疗或预防有需要的受试者的流行性感冒病毒感染的方法。所述方法涉及对受试者给药有效量的本文所述抗流行性感冒抗体或抗体片段或含有所述抗体或抗体片段的医药组合物。所述方法治疗或预防受试者的流行性感冒病毒感染，包含减少或缓和与感染相关的症状。于方面中，本专利技术提供中和有需要的受试者中的流行性感冒病毒的方法。所述方法涉及对受试者给药有效量的本文所述抗流行性感冒抗体或抗体片段或含有所述抗体或抗体片段的医药组合物。所述方法中和受试者中的流行性感冒病毒，从而治疗或预防受试者的流行性感冒病毒感染，包含减少或缓和与感染相关的症状。于方面中，本专利技术提供在有需要的受试者中建立流行性感冒病毒感染的方法。所述方法涉及对受试者给药有效量的本文所述抗流行性感冒抗体或抗体片段或含有所述抗体或抗体片段的医药组合物。所述方法抑制在受试者中建立流行性感冒病毒感染，从而预防与感染相关的症状。于方面中，本专利技术提供抑制有需要的受试者的流行性感冒病毒感染的散播的方法。所述方法涉及对受试者给药有效量的本文所述抗流行性感冒抗体或抗体片段或含有所述抗体或抗体片段的医药组合物。所述方法抑制受试者中的流行性感冒病毒感染的散播，从而减少或缓和与感染相关的症状。于方面中，本专利技术提供抑制流行性感冒病毒进入受试者中的细胞的方法。所述方法涉及对受试者给药有效量的本文所述抗流行性感冒抗体或抗体片段或含有所述抗体或抗体片段的医药组合物。所述方法抑制流行性感冒病毒进入受试者中的细胞，从而预防与感染相关的症状或减少或缓和与感染相关的症状。于方面中，本专利技术提供抑制流行性感冒病毒进入细胞的方法。所述方法涉及使具有流行性感冒病毒感染或有发展流行性感冒病毒感染的风险的细胞接本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种单离的抗流行性感冒抗体或抗体片段，所述抗体或抗体片段与流行性感冒血凝素(HA)的表位特异性地结合，从而减少或抑制与唾液酸结合的流行性感冒血凝素。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.08.03 US 61/514,6621.一种单离的抗流行性感冒抗体或抗体片段，所述抗体或抗体片段与流行性感冒血凝素特异性地结合于所述血凝素多肽序列的残基136、137和226，从而减少或抑制与唾液酸结合的流行性感冒血凝素；所述抗流行性感冒抗体或抗体片段包括可变重链和可变轻链，所述可变重链包括SEQIDNO：9、SEQIDNO：10、SEQIDNO：11或SEQIDNO：12中所表示的氨基酸序列，且所述可变轻链包括SEQIDNO：13、SEQIDNO：14、SEQIDNO：15或SEQIDNO：16中所表示的氨基酸序列。2.一种单离的抗流行性感冒抗体或抗体片段，所述抗体或抗体片段与流行性感冒血凝素特异性地结合于所述血凝素多肽序列的残基136、137和226，从而减少或抑制与唾液酸结合的流行性感冒血凝素；所述抗流行性感冒抗体或抗体片段包括一个或多个重链CDR区和一个或多个轻链CDR区，所述重链CDR区存在于SEQIDNO：9、SEQIDNO：10、SEQIDNO：11或SEQIDNO：12所表示的可变重链氨基酸序列中，且所述轻链CDR区存在于SEQIDNO：13、SEQIDNO：14、SEQIDNO：15或SEQIDNO：16所表示的可变轻链氨基酸序列中。3.根据权利要求1所述的抗流行性感冒抗体或抗体片段，其中所述抗流行性感冒抗体或抗体片段包括：i)包括SEQIDNO：10所表示的氨基酸序列的可变重链氨基，以及ii)包括SEQIDNO：14所表示的氨基酸序列的可变轻链。4.根据权利要求2所述的抗流行性感冒抗体或抗体片段，其中所述一个或多个重链CDR区包括存在于SEQIDNO：9、SEQIDNO：10、SEQIDNO：11或SEQIDNO：12的可变重链氨基酸序列中的CDR3区。5.根据权利要求4所述的抗流行性感冒抗体或抗体片段，其中所述一个或多个轻链CDR区包括存在于SEQIDNO：13、SEQIDNO：14、SEQIDNO：15或SEQIDNO：16的可变轻链氨基酸序列中的CDR3区。6.根据权利要求4所述的抗流行性感冒抗体或抗体片段，其中所述抗流行性感冒抗体或抗体片段包括可变重链，其中所述可变重链的所述CDR3区包括Arg104、Ser105、Val106、Asp107、Tyr109、Tyr110、Tyr112或其组合；或其中所述抗流行性感冒抗体或抗体片段与血凝素结合于一个或多个选自由下列所组成组的血凝素残基：血凝素残基158至160；血凝素残基190至195；血凝素残基222、225和227；以及A/SolomonIslands/3/2006血凝素残基187和189；或其中所述抗体或抗体片段还与选自由血凝素残基190至195所组成组的血凝素残基接触；或其中所述抗体或抗体片段CDRH1区与血凝素残基158接触；所述CDRH2区与血凝素残基158至160接触；所述CDRH3区与血凝素残基135至136、190至195和226接触；所述CDRL1区与血凝素残基222、225和227接触；或所述CDRL3区与血凝素残基187和189；或其中所述抗体或抗体片段是衍生自可改善所述抗体或抗体片段的溶解度、生物半衰期或吸收的部分；或其中所述抗体或抗体片段还与流行性感冒血凝素特异性地结合于所述血凝素多肽序列的残基153和194；或其中所述抗体或抗体片段与流行性感冒血凝素特异性地结合于下列残基：(a)一个或多个选自由血凝素残基158至160所组成组的残基；(b)一个或多个选自由血凝素残基135至136所组成组的残基；(c)一个或多个选自由血凝素残基190至195所组成组的残基；以及(d)血凝素残基226。7.根据权利要求1所述的抗流行性感冒抗体或抗体片段，其中所述抗流行性感冒抗体或抗体片段与流行性感冒血凝素特异性地结合于下列残基：(a)一个或多个选自由血凝素残基158至160所组成组的残基；(b)一个或多个选自由血凝素残基135至136所组成组的残基；(c)一个或多个选自由血凝素残基190至195所组成组的残基；以及(d)血凝素残基226，还特异性地结合于一个或多个选自由下列所组成组的血凝素残基：(e)一个或多个选自由残基222、225和227所组成组的残基；以及(f)一个或多个选自由残基187和189所组成组的残基。8.根据权利要求1或2所述的抗流行性感冒抗体或抗体片段，其中所述抗流行性感冒抗体或抗体片段为单克隆抗体或其抗体片段。9.根据权利要求1或2所述的抗流行性感冒抗体或抗体片段，其中所述血凝素多肽序列是选自由SEQIDNO:17至44所组成组；或其中所述血凝素是选自由H1血凝素、H2血凝素、H3血凝素和H5血凝素所组成组。10.根据权利要求1或2所述的抗流行性感冒抗体或抗体片段，其中所述抗体片段为Fab片段、Fab'片段、Fd片段、Fd'片段、Fv片段、dAb片段、F(ab')2片段、单链片段、双链抗体或线性抗体。11.根据权利要求1或2所述的抗流行性感冒抗体或抗体片段，其还包括偶联所述抗流行性感冒抗体或抗体片段的剂。12.根据权利要求11所述的抗流行...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·惠特尔，S·C·哈里森，B·F·海恩斯，Hx·廖，M·A·穆迪，T·B·开普勒，A·G·施密特，
申请(专利权)人：儿童医疗中心有限公司，杜克大学，
类型：发明
国别省市：美国;US