本发明专利技术公开了一种快速、方便、高效、定量检测食品中大豆蛋白的检测装置及其制备方法，属于荧光微球标记的检测技术。本发明专利技术包括标记了特殊性质的具有生物特异性的生物大分子，以具有吸附移动性的聚合材料薄膜作载体，在便携轻巧的方形设备内进行的检测。本发明专利技术的优点是利用标记物的特殊性质对食品基质中的含有的微量大豆蛋白成分进行定量检测，检测限可达到0.1ng/mL。这种特殊的标记物克服了常见标记物的不稳定性，检测值低的问题。本发明专利技术主要应用于食品安全中残余大豆致敏物的定量检测方面。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种快速、方便、高效、定量检测食品中大豆蛋白的检测装置及其制备方法，属于荧光微球标记的检测技术。本专利技术包括标记了特殊性质的具有生物特异性的生物大分子，以具有吸附移动性的聚合材料薄膜作载体，在便携轻巧的方形设备内进行的检测。本专利技术的优点是利用标记物的特殊性质对食品基质中的含有的微量大豆蛋白成分进行定量检测，检测限可达到0.1ng/mL。这种特殊的标记物克服了常见标记物的不稳定性，检测值低的问题。本专利技术主要应用于食品安全中残余大豆致敏物的定量检测方面。【专利说明】
本专利技术属于食品安全中食品中大豆蛋白的检测领域，具体涉及一种定性和定量快 速地检测食品中大豆蛋白的荧光微球标记的装置及其制备方法。
技术介绍
近年来，随着人们的生活水平日渐提高，食品的安全问题越来越突出，包括食物过 敏等。食物过敏是指机体对食品中的某种物质或成分产生的一种变态反应，是一种由IgE 介导和非IgE介导的超敏反应，可引起皮肤、肠胃道、呼吸系统的反应，严重时甚至会导致 系统过敏反应或休克。 大豆制品含有丰富的蛋白质和平衡的氨基酸组分，是人和畜禽优质的植物蛋白 源，但也是世界上公认的八大食物过敏原之一。据报道，人群中大豆过敏的发生率约为 0. 3%?0. 4%，其引起的食物过敏机制属于I型过敏反应机理。临床上，过敏人群若摄食大 豆及其制品或者吸入大豆粉末时，可能出现恶心、呕吐、口周边红斑、舌咽肿、嘴唇红肿、口 腔疼痛和一些肠道疾病等症状，严重的会导致休克甚至死亡。这些症状不仅对生命构成威 胁，更严重影响了过敏患者的生活质量。而目前，对于食物过敏的最好最直接的办法是严格 避免食用含致敏蛋白的食物。但是，大豆作为一种常见的食物原料，已经广泛应用于各种食 物中并加工成各种产品，如酱油、豆豉、豆浆和豆粉等，完全避免大豆过敏原几乎不可能。因 此，欧美等发达国家为了更好地保护食物过敏人群，以立法的方式规定了食品生产商要在 产品标签上标明食物过敏原。所以，人们亟需研究出能够快速检测食物中致敏物质的方法， 达到预防的目的。如今，大豆过敏作为世界各地普遍存在的一个公众性健康问题，得到了广 泛的关注。 目前，有关大豆蛋白的检测手段包括主要包括基于免疫学的方法、聚合酶链式反 应技术、毛细管电泳分析、色谱法、质谱法等，这些检测手法都比较繁琐，且需要一定的设备 仪器和专业人才，不适用于食品的快速检测判断。随着新技术的开发应用，致敏蛋白的检测 逐渐向高灵敏度、简便快速、准确性高方向发展。 这种装置是建立在免疫层析技术的基础上的一种独特的免疫分析方式，它通常以 条状纤维层析材料为固相，通过虹吸作用原理使样品溶液在层析条上扩撒，并同时使样品 中的待测物与层析材料上针对待测物的受体发生高特异高亲和性的免疫反应，层析过程中 免疫复合物被富集或截留在层析材料的一定区域，通过酶反应或直接运用可目测的标记物 而得到直观的实验结果。而游离标记物则越过检测带，达到与结合标记物自动分离之目的。 这种技术目前常见的标记粒子包括胶体金，乳胶，胶体硒、明胶等，其中运用最多和成熟的 是月父体金。 但是，胶体金标记的装置存在以下缺陷： (1)胶体金标记过程是静电吸附过程，是一种物理吸附，故在液相中稳定性较差， 往往造成已标记上的蛋白分子又再次脱落。 (2)结果通过显示单一的紫红色条带来判断，颜色单一，难以实现多检和联检。 (3)只有当金颗粒集聚到一定量时，人肉眼才能观察到紫红的条带，且该颜色条带 与背景对比度不大，从而限制了检测灵敏度。 (4)不同的材料基质效应明显，背景干扰非常大。 (5)检测灵敏度较低。 (6)无法实现准确定量检测。 目前也出现了利用彩色乳胶等标记的检测方法，但是这些方法并不能完全实现对 检测物的定量检测。 专利200910085054. 1公开了一种采用荧光微球免疫层析检测卡来同时检测氯胺 酮与甲基苯丙胺，反应灵敏度较胶体金法有很大提高，快速方便。 专利200910117820. 8公开了一种荧光微球免疫层析试纸条，改进荧光微球的制 备方法来实现对样品进行定性和定量检测。 但是大豆蛋白用常规的荧光微球免疫层析方法来定量检测仍然难以达到灵敏度、 检测稳定性方面的要求。
技术实现思路
本专利技术目的是针对上述现有技术的缺陷，提供一种简便快速、灵敏度高且可进行 定量检测的荧光微球标记装置。本专利技术的另一个目的是提供上述装置的制备方法。 为了实现上述目的本专利技术采取的一个技术方案是： 一种快速检测食品中大豆蛋白的装置，包括用于检测大豆蛋白的免疫层析试纸条； 所述免疫层析试纸条为粘性底板上依次搭接滤纸、样本垫、玻璃纤维膜、NC膜和吸水纸； 所述玻璃纤维膜上喷涂的荧光微球垫为荧光微球标记的大豆蛋白多克隆抗体；所述NC膜 的检测区喷涂大豆蛋白；所述NC膜的质控区上喷涂羊抗兔IgG ;所述所述荧光微球是直 径为0. 01?10 μ m的用聚合材料或二氧化硅包裹荧光物质的微球，其表面连接有活性基 团。 所述的装置，还包括底卡和面卡，免疫层析试纸条固定在底卡上，试纸条表面用面 卡压紧；所述面卡上预留有加样孔和观察窗，加样孔的位置与试纸条的样本垫对应，观察窗 的位置与试纸条的NC膜对应，所述底卡和面卡为塑料卡。 所述聚合材料为聚苯乙烯、聚乙烯和聚氯乙烯，所述的活性基团为一 CHO、-C00H、-OH、-NH2或-SH，所述荧光物质为菲咯啉联钌有机染料、异硫氰根荧光素、异硫 氰根罗丹明、6-羧基荧光素酰胺酯、荧光烷衍生物类、1，8-萘二酰亚胺类、香豆素类有机荧 光染料或其掺杂物或量子点。 大豆蛋白用0· 01?0· 1 M pH 7. 2的磷酸盐缓冲液调节至包被物浓度为1. 0 mg/ mL，喷膜量为0. 80 μ L/cm ;羊抗兔IgG用0. 01?0. 1 M pH 7. 2的磷酸盐缓冲液调节至包 被物浓度为1. 〇 mg/mL，喷膜量为0· 80 μ L/cm。 前述述的装置的制备方法，包括如下步骤：（1) NC膜上检测区和质控区的制备； (2)荧光微球垫的制备；（3)装置组装；所述的NC膜上检测区和质控区的制备，包括所述 NC膜的检测区喷涂大豆蛋白，大豆蛋白用0. 01?0. 1 M pH 7. 2的磷酸盐缓冲液调节至包 被物浓度为1. 〇mg/mL，喷膜量为0. 8 μ L/cm ;所述NC膜的质控区上喷涂羊抗兔IgG，羊抗 兔IgG用0. 01?0. 1 M pH 7. 2的磷酸盐缓冲液调节至包被物浓度为1. Omg/mL，喷膜量为 0. 8 μ L/cm ;所述的荧光微球垫的制备，包括如下的步骤：（1)荧光微球标记的大豆蛋白多 克隆抗体的制备（2)将荧光微球标记的大豆蛋白多克隆抗体喷涂在玻璃纤维膜上制备荧光 微球垫。所述的装置组装为在粘性底板上依次搭接滤纸、样本垫、有荧光微球垫的玻璃纤 维膜、固定有检测区和质控区的NC膜、吸水纸制成免疫层析试纸条，并剪成合适大小； 所述检测区和质控区的制备方法如下：用BIODOT Dispensing System将大豆蛋白和羊 抗兔IgG包被到NC膜上：分别用0. 01?0. 1 M pH 7. 2的磷酸盐缓本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种快速检测食品中大豆蛋白的装置，其特征在于包括用于检测大豆蛋白的免疫层析试纸条； 所述免疫层析试纸条为粘性底板上依次搭接滤纸、样本垫、玻璃纤维膜、NC膜和吸水纸； 所述玻璃纤维膜上喷涂的荧光微球垫为荧光微球标记的大豆蛋白多克隆抗体； 所述NC膜的检测区喷涂大豆蛋白； 所述NC膜的质控区上喷涂羊抗兔IgG； 所述所述荧光微球是直径为0.01～10 μm的用聚合材料或二氧化硅包裹荧光物质的微球，其表面连接有活性基团。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：赖卫华，倪小琴，刘道峰，山珊，彭涛，
申请(专利权)人：南昌大学，
类型：发明
国别省市：江西;36
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