一种兔脐带间充质干细胞的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种兔脐带间充质干细胞的制备方法，选用兔脐带为原材料，包括以下步骤，兔脐带组织的清洗、兔脐带组织的消化、细胞接种、传代培养、即时使用或冷冻保存备用。按照本发明专利技术获得的兔脐带间充质干细胞经表面抗原检测及多向分化鉴定，符合间充质干细胞产品合格标准，具有较高的增殖及分化潜力。按照本发明专利技术获得的兔脐带间充质干细胞为以兔为实验动物的干细胞相关应用研究提供了一种新的同种异体移植的种子细胞，极大程度上保证了脐带间充质干细胞的低免疫原性，极大地丰富了现有的种子细胞库。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种兔脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于：选用兔脐带为原材料，包括以下步骤，A.兔脐带组织的清洗：在无菌条件下，收集兔脐带组织，用无菌生理盐水或无菌PBS液体冲洗3‑5次兔脐带组织，直至兔脐带组织内无兔血；B.兔脐带组织的消化：将兔脐带组织放到100ml的无菌烧杯中，用无菌组织剪将兔脐带组织剪成1mm3的兔脐带组织块后，加入兔脐带组织块体积3‑4倍的0.1％无菌胶原酶，无菌封装后，置于37‑39℃、体积分数为4.5‑5.5％CO2培养箱中消化，直至兔脐带组织块消化完全；兔脐带组织块消化完全后，用含体积分数为10％FBS、100U/ml青霉素和链霉素的L‑DMEM培养基中止消化；C.细胞接种：将中止后的混合液置于低温离心机内离心后去除上清液，保留沉淀物，用含10％FBS、100U/ml青霉素和链霉素的L‑DMEM培养基吹匀；将重悬液接种于培养瓶或培养皿中，静置于37‑39℃、4.5‑5.5％CO2、92‑96％饱和湿度的恒温培箱中培养；培养24h后全量换液，去除残存组织和未贴壁细胞，之后3天换液一次，至细胞融合达到80％时，传代培养，即时使用或冷冻保存备用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：董有海，何益群，林荣强，
申请(专利权)人：复旦大学附属上海市第五人民医院，
类型：发明
国别省市：上海;31