抗ASIC1抗体及其使用制造技术

本发明专利技术提供了与表达酸敏感离子通道-1(ASIC1)的细胞特异性结合的抗体及其抗原结合片段。依照本发明专利技术的某些实施方案，该抗体抑制表达人ASIC1的细胞内酸诱导的ASIC1介导的离子流。本发明专利技术之抗体可用于治疗疼痛，包括与外科手术及各种疾病和失调相关的疼痛。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗AS IC1抗体及其使用 专利
本专利技术涉及对人ASIC1具有特异性的抗体及其抗原结合片段，以及其使用方法。
技术介绍
酸敏感离子通道（ASIC)是在中枢和外周神经系统表达的质子门控阳离子通道。 人类的ASIC家族包括ASIC1、ASIC2、ASIC3和ASIC4等亚单位，它们在神经细胞膜内排列 成同源或异源多聚体离子通道。ASICUASIC2和ASIC3显著地表达在小型和中型伤害性感 觉神经元内，该伤害性感觉神经元能够检测有害的化学刺激、热刺激以及高阈值机械刺激。 ASIC2和ASIC3也表达在大型、基本上相当于低阈值机械性刺激感受器的神经元内。 ASIC可让Na+和Ca2+离子通过，且被外部ρΗ6· 8至4.0的pH变化激活。据信ASIC 在感觉局部酸中毒过程中起重要作用。局部组织酸中毒是疼痛和炎症的特点标志，发炎的 组织经常显示出低pH值（低达约4. 7)。ASIC的阻断已被建议作为治疗各种失调和病症的 方法。ASIC1的阻断尤其被建议为治疗疼痛、神经退行性疾病以及精神疾病等各种病症的方 法。 ASIC1的药理学抑制剂包括特异性抑制ASIC1同聚体的狼蛛肽Psalmotoxin-1 (普 萨莫毒素 PcTxl)，以及小分子、非选择性ASIC抑制剂阿米洛利和A-317567。业已显示，从 海葵分离出的40种氨基酸肽毒素 APETx2能抑制ASIC3同聚体以及ASIC3/1和ASIC3/2异 聚体。 目前，尚无已知能特异性阻断ASIC的抗体。因此，本领域需要可用于治疗ASIC信 号介导的疾病和病症的新型ASIC抑制剂，如抗ASIC1抗体。 专利技术概述 本专利技术提供了与人ASIC1特异性结合的抗体，包括例如与细胞表面表达的ASIC1 特异性结合的抗体。依照某些实施方案，本专利技术之抗体抑制表达人ASIC1的细胞内酸诱导 的ASIC1介导的离子流。除其他用途之外，本专利技术之抗体还可用于抑制ASIC1介导的信号 以及治疗由ASIC1活性和/或信号所引起的或与其相关的疾病和失调。例如，本专利技术之抗 体可施予患者以治疗或减轻疼痛及相关病症。 本专利技术之抗体可以是全长的（例如IgGl或IgG4抗体），或可仅包含一个抗原结合 部分（例如Fab、F(ab'） 2或scFv片段），并可加以修饰以实现其功能，例如消除残余的效 应子功能（Reddy et al.，2000, J. Immunol. 164:1925-1933)。 本专利技术还提供了一种包含一个重链可变区（HCVR)的抗体或抗体的抗原结合片 段，该重链可变区含有一个选自下列一组序列的氨基酸序列：2、18、34、50、66、82、98、114、 130、146、162、178、194、210、226、242、258、274、290、306、322、338、354、370 和 386,或一个 与其基本上相似且具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的序列。 本专利技术还提供了一种包含一个轻链可变区（LCVR)的抗体或抗体的抗原结合片 段，该轻链可变区含有一个选自下列一组序列的氨基酸序列：10、26、42、58、74、90、106、 122、138、154、170、186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346、362、378 和 394，或 一个与其基本上相似且具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的序 列。 本专利技术还提供了一种抗体或其抗原结合片段，其包含一个选自下列一组序列对 的 HCVR 和 LCVR(HCVR/LCVR)序列对：2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、 114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250、 258/266、274/282、290/298、306/314、322/330、338/346、354/362、370/378 及 386/394。 本专利技术还提供了一种抗体或抗体的抗原结合片段，其包含一个重链⑶R3(HCDR3) 结构域，该结构域含有一个选自下列一组序列的氨基酸序列：8、24、40、56、72、88、104、120、 136、152、168、184、200、216、232、248、264、280、296、312、328、344、360、376 和 392,或一个 与其基本上相似且具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的序列；以 及一个轻链CDR3(LCDR3)结构域，该结构域含有一个选自下列一组序列的氨基酸序列：16、 32、48、64、80、96、112、128、144、160、176、192、208、224、240、256、272、288、304、320、336、 352、368、384和400,或一个与其基本上相似且具有至少90%、至少95%、至少98%或至少 99 %序列同一性的序列。 在某些实施方案中，该抗体或抗体的抗原结合片段包含一个选自下列一组序 列对的 HCDR3/LCDR3 氨基酸序列对：8/16、24/32、40/48、56/64、72/80、88/96、104/112、 120/128、136/144、152/160、168/176、184/192、200/208、216/224、232/240、248/256、 264/272、280/288、296/304、312/320、328/336、344/352、360/368、376/384及 392/400。 本专利技术还提供了一种抗体或其片段，其进一步包含一个重链⑶Rl(HCDRl)结构 域，该结构域含有一个选自下列一组序列的氨基酸序列：4、20、36、52、68、84、100、116、132、 148、164、180、196、212、228、244、260、276、292、308、324、340、356、372 和 388,或一个与其 基本上相似且具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的序列；以及一 个重链⑶R2(HCDR2)结构域，该结构域含有一个选自下列一组序列的氨基酸序列：6、22、 38、54、70、86、102、118、134、150、166、182、198、214、230、246、262、278、294、310、326、342、 358、374和390,或一个与其基本上相似且具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99% 序列同一性的序列；以及一个轻链CDRl(LCDRl)结构域，该结构域含有一个选自下列一组 序列的氨基酸序列：12、28、44、60、76、92、108、124、140、156、172、188、204、220、236、252、 268、284、300、316、332、348、364、380和396，或一个与其基本上相似且具有至少90%、至少 95%、至少98%或至少99%序列同一性的序列；以及一个轻链⑶R2 0XDR2)结构域，该结构 域含有一个选自下列一组序列的氨基酸序列：14、30、46、62、78、94、本文档来自技高网...

【技术保护点】
与细胞表面表达的ASIC1(序列号401)特异性结合的分离的抗体或其抗原结合片段。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.01.31 US 61/592,837;2012.05.08 US 61/644,038;1. 与细胞表面表达的ASIC1(序列号401)特异性结合的分离的抗体或其抗原结合片 段。2. 如权利要求第1项所述之抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段与 细胞表面表达的ASIC1特异性结合，以FACS (荧光激活细胞分类术）测量的EC5(I值为InM 或以下。3. 如权利要求第1项或第2项所述之抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结 合片段抑制表达人ASIC1的细胞内酸诱导的ASIC1介导的离子流。4. 如权利要求第3项所述之抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段于 约5. 0至约6. 0的pH值在表达ASIC1的细胞内抑制酸诱导的细胞内钙通量，以FLIPR检测 法测量的IC5Q值为6nM或以下。5. 如权利要求第3项所述之抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段于 约5. 0至约6. 0的pH值抑制酸诱导的离子流，以膜片钳分析法测量的IC5(I值为10nM或以 下。6. 分离的抗体或其抗原结合片段，其在与细胞表面表达的ASIC1结合过程中与包 含HCVR/LCVR序列对的参照抗体竞争，该序列对选自如下序列对组：2/10 ;34/42 ;50/58 ; 66/74 ;114/122 ;130/138 ;146/154 ;162/170 ;194/202 ;210/218 ;242/250 ;258/266 ;以及 274/282。7. 如权利要求第6项所述之抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段抑 制表达人ASIC1的细胞内酸诱导的ASIC1介导的离子流。8. 与细胞表面表达的ASIC1(序列号401)特异性结合的分离的抗体或其抗原结合片 段，其中该抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区（HCVR)的互补决定区（CDR)，该 重链可变区含有选自下列序列组的氨基酸序列：2、34、50、66、114、130、146、162、194、210、 242、258和274;以及（b)轻链可变区（LCVR)的CDR，该轻链可变区含有选自下列序列组的 氨基酸序列：10、42、58、74、122、138、154、170、202、218、250、266 以及 282。9. 如权利要求第8项所述之分离的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原 结合片段包含选自下列序列对组的HCVR/LCVR氨基酸序列对的重链和轻链CDR :2/10 ; 34/42 ；50/58 ；66/74 ；114/122 ；130/138 ；146/154 ；162/170 ；194/202 ；210/218 ；242/250 ； 258/266 ;以及 274/282。10. 如权利要求第8项所述之分离的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结 合片段分别包含 HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3 结构域，其选自下列序列组： 4-6-8-12-14-16 ;36-38-40-44-46-48 ;52-54-56-60-62-64 ; 68-70-72-76-78-80 ;116-118-120-124-126-128 ;132-134-136-140-142-144 ; 148-150-152-156-158-160 ； 164-166-168-172-174-176 ； ...

【专利技术属性】
技术研发人员：L·麦克唐纳，M·高，M·R·莫拉，N·M·阿莱桑德里哈贝尔，M·L·拉克鲁瓦福拉丽什，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：美国;US