本发明专利技术提供鸡新城疫和传染性法氏囊二联灭活疫苗及其制备方法，属于生物工程领域。所述疫苗活性成分为灭活的鸡新城疫病毒LaSota株和传染性法氏囊病毒NJ09株CGMCC NO：7758。本发明专利技术提供该疫苗的制备方法，将鸡新城疫病毒LaSota株病毒液与传染性法氏囊病毒NJ09株病毒液分别浓缩、灭活，然后混合均匀，得到混合病毒液；将混合病毒液与佐剂混合均匀。本发明专利技术灭活疫苗，含有灭活的传染性法氏囊病毒NJ09株，该毒株是超强的流行毒株、免疫原性强、攻毒保护性好；该二联灭活疫苗免疫后抗体水平高，免疫攻毒保护率高，对传染性法氏囊标准强毒株、超强毒株攻毒保护率达到90%以上，免疫持效期达到5个月。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物工程领域，具体涉及一种。
技术介绍
鸡新城疫又称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟，具有很高的发病率和病死率，是危害养禽业的一种主要传染病，OIE将其列为A类疫病。鸡新城疫(Newcastle diseaSe，ND)是由鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的禽的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病，以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征。该病死亡率高，对养鸡业危害严重。1926年首先发现于印度尼西亚，不久又在英国新城发现，世界各国均有流行记载。 传染性法氏囊病毒(Infect1us bursal disease Virus,缩写为IBDV)隶属于双RNA病毒科双RNA病毒属，此病主要损害鸡体淋巴器官造成免疫抑制，从而导致多种疫苗免疫无效及对其它疾病如新城疫、球虫病等的易感性增高而引起经济损失。传染性法氏囊病(Infect1us bursal disease, IBD)于 1957 年首次发生于美国 Delware 州南部 Gumboro地区，我国于1979年相继在广州、北京、上海发现本病，对实际养殖生产造成重大损失，IBDV疫苗研究随即展开，至今国内外已开发出弱毒、中等毒力活疫苗、灭活疫苗和基因工程疫苗，对该病防控起到一定作用。但是近年来，我国一些地方，特别是在法氏囊母源抗体高低不齐的蛋鸡和肉鸡饲养区， 仍然屡有传染性法氏囊病(IBDV)的发生和流行，其原因主要为:一是超强毒株出现。IBDV在野外环境中变异能力很强，每年均有超强毒力的IBDV野毒出现，这一类毒株的毒力极有可能突破现有疫苗的保护，从而导致免疫鸡群出现感染发病、死亡的现象。二是弱毒疫苗无法突破母源抗体。现行免疫程序中IBDV弱毒苗一般在14~18日龄免疫，接种后进入鸡体内的活病毒会被母源抗体捕获、中和而失去复制活性，因而不能达到保护效果。同时雏鸡体内母源抗体由高逐渐消减，虽有一定保护力但开始有部分鸡暴露在感染威胁当中。三是传染性法氏囊灭活疫苗研究落后。目前市场上使用的灭活疫苗一类是法氏囊全病毒灭活疫苗，使用传染性法氏囊病毒株适应细胞制备，另一类是基因工程疫苗，采用大肠杆菌表达传染性法氏囊病毒VP2基因制备。这两种疫苗可以产生一定的免疫保护效果，但是，对于出现基因变异的超强毒株，会出现保护性下降的情况。因此，针对目前我国鸡传染性法氏囊病发病趋势，分离法氏囊超强毒流行毒株，筛选其中免疫原性好、且可以适应细胞繁殖的种毒制备疫苗，对于该病的预防具有极其重要的意义，是符合生产实际需求的重要产品。 目前新城疫、传染性法氏囊严重危害家禽养殖业的发展，在各种防控措施中，疫苗的免疫仍为最重要的措施。针对新城疫、传染性法氏囊，已有相应的灭活单苗及二联灭活苗，但是免疫剂量大，抗体水平低，保护率不高，给免疫鸡群带来一定的风险。因此，研制出免疫剂量小，免疫效果更好的新城疫、传染性法氏囊二联苗是一项具有重要意义的工作。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供鸡新城疫和传染性法氏囊二联灭活疫苗，含有灭活的传染性法氏囊病毒NJ09株，该毒株是超强的流行毒株、免疫原性强、攻毒保护性好；该二联灭活疫苗免疫后抗体水平高，免疫攻毒保护率高，对传染性法氏囊标准强毒株及目前流行的法氏囊超强毒株攻毒保护率达到90%以上，一次免疫，免疫持效期达到5个月。 本专利技术的另一目的在于提供鸡新城疫和传染性法氏囊二联灭活疫苗的制备方法，该方法简单，安全、成本低。 本专利技术的目的采用如下技术方案实现。 一种鸡新城疫和传染性法氏囊二联灭活疫苗，其活性成分为灭活的鸡新城疫病毒La Sota株和传染性法氏囊病毒NJ09株，所述传染性法氏囊病毒NJ09株的保藏号为CGMCCNO:7758o 本专利技术还提供所述鸡新城疫和传染性法氏囊二联灭活疫苗的制备方法，将鸡新城疫病毒La Sota株病毒液与传染性法氏囊病毒NJ09株病毒液分别浓缩、灭活，然后混合均匀，得到混合病毒液；将所述混合病毒液与佐剂混合均匀，得到所述鸡新城疫和传染性法氏囊二联灭活疫苗。 在本专利技术中，将鸡新城疫病毒La Sota株接种鸡胚进行培养，收获鸡胚液作为鸡新城疫病毒La Sota株病毒液；将传染性法氏囊病毒NJ09株接种DF-1细胞或Ve1细胞进行培养，得到所述传染性法氏囊病毒NJ09株病毒液。 [0011 ] 在本专利技术中，所述鸡新城疫病毒La Sota株病毒液的病毒含量大于等于108_0EID50/ml，所述传染性法氏囊病毒NJ09株病毒液的病毒含量大于等于107_°TCID5(l/ml。 优选的技术方案中，所述鸡新城疫病毒La Sota株病毒液浓缩至原体积的1/4-1/2，所述传染性法氏囊病毒NJ09株病毒液浓缩至原体积的1/5-1/7。 优选的技术方案中，所述浓缩后的鸡新城疫病毒La Sota株病毒液和传染性法氏囊病毒NJ09株病毒液分别灭活后，按照体积比2: (1-3)混合均匀，得到混合病毒液。 在本专利技术中，将混合病毒液与吐温-80按照体积比96: 4混合均匀，得水相；将注射用白油和司本一 80按照体积比为94:6混匀，得油相；将油相和水相按照体积比2:1混合均匀，获得鸡新城疫和传染性法氏囊二联灭活疫苗。 有益效果: (I)鸡新城疫病毒La Sota株，是我国鸡新城疫疫苗制造的标准毒株，规模化生产工艺成熟、稳定，免疫原性好，安全。 (2)传染性法氏囊病毒NJ09株，是超强的流行毒株、免疫原性强、攻毒保护性好且适应细胞规模化培养。 (3)本专利技术二联灭活疫苗中含有的鸡新城疫病毒为标准制苗株La Sota株，成品按照20 μ I/羽份免疫SPF鸡后21天，新城疫抗体水平不低于41og2，达到效力检验标准；传染性法氏囊病毒NJ09株，是超强的流行毒株、免疫原性强、攻毒保护性好且适应细胞规模化培养。本专利技术二联灭活疫苗免疫后，抗体水平高，免疫攻毒保护率高，对传染性法氏囊标准强毒株及目前流行的法氏囊超强毒株攻毒保护率达到90%以上，一次免疫，免疫持效期达到5个月。 本专利技术制备鸡新城疫和传染性法氏囊二联灭活疫苗的方法，简单、安全、成本低。 【附图说明】 图1是IBDV NJ09株F1、F2代细胞毒RT-PCR扩增产物的电泳图，其中泳道1-Fl代细胞毒；2_F2代细胞毒；3_法氏囊病毒标准阳性对照；4_阴性对照；M-Marker。 保藏信息如下: 保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。 单位地址:北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所。 参椐的生物材料(株):NJ09株。 分类命名:传染性法氏囊病毒。 保藏号:CGMCCN0.7758。 保藏日期:2013年6月20日。 【具体实施方式】 鸡新城疫病毒La Sota株:购自中国兽医药品监察所。 传染性法氏囊病毒(Infect1usbursal disease Virus)BC6/85 株、B87 株来源: 购自中国兽医药品监察所。 【具体实施方式】 实例I传染性法氏囊病毒NJ09株的分离与鉴定 1.NJ09株的分离 (I)病料 病料为无菌采集疑似法氏囊病死亡病鸡的法氏囊组织、心血、肝、脑、肺。 (2)组织触片 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种鸡新城疫和传染性法氏囊二联灭活疫苗，其活性成分为灭活的鸡新城疫病毒La Sota株和传染性法氏囊病毒NJ09株，所述传染性法氏囊病毒NJ09株的保藏号为CGMCC NO：7758。
【技术特征摘要】
1.一种鸡新城疫和传染性法氏囊二联灭活疫苗，其活性成分为灭活的鸡新城疫病毒LaSota株和传染性法氏囊病毒NJ09株，所述传染性法氏囊病毒NJ09株的保藏号为CGMCC NO:7758。2.权利要求1所述鸡新城疫和传染性法氏囊二联灭活疫苗的制备方法，其特征在于将鸡新城疫病毒La Sota株病毒液与传染性法氏囊病毒NJ09株病毒液分别浓缩、灭活，然后混合均匀，得到混合病毒液；将所述混合病毒液与佐剂混合均匀，得到所述鸡新城疫和传染性法氏囊二联灭活疫苗。3.根据权利要求2所述鸡新城疫和传染性法氏囊二联灭活疫苗的制备方法，其特征在将鸡新城疫病毒La Sota株接种鸡胚进行培养，收获鸡胚液作为鸡新城疫病毒La Sota株病毒液；将传染性法氏囊病毒NJ09株接种DF-1细胞或Ve1细胞进行培养，得到所述传染性法氏囊病毒NJ09株病毒液。4.根据权利要求3所述鸡新城疫和传染性法氏囊二联灭活疫苗的制备方法，其特征在于所述鸡新城疫病毒La Sota株病...
【专利技术属性】
技术研发人员：于漾，朱亚露，揭鸿英，毕志香，褚轩，何家惠，侯继波，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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