一种规模化制备蟛蜞菊内酯化学对照品的方法技术

本发明专利技术涉及一种规模化制备蟛蜞菊内酯化学对照品的制备新工艺。通过蟛蜞菊内酯稳定性及制备工艺流线化优化，采用自制大型中压或减压硅胶柱色谱纯化，批量获取纯度大于98%的蟛蜞菊内酯化学对照品，其规模可达十克级。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种规模化制备蟛蜞菊内酯（Wedelolactone）化学对照品的制备新工艺。主要包括乙酸乙酯萃取、自制大型中压或减压硅胶柱色谱纯化、重结晶三个步骤。
技术介绍
蟛蜞菊内酯为香豆素类化合物，具有保肝、抗炎、增强免疫等功效，中国药典（2010版）将其列为中药墨旱莲的新增定量指标成分，实际应用缺口巨大，加上该对照品分离纯化步骤繁琐，均导致该对照品价格昂贵（市售1000-1500元，20mg/支）。因此批量获取大量对照品，不仅能满足墨旱莲相关制品的质量控制所需，而且对于深入研究其作用机制具有重要意义。目前，从墨旱莲中制备蟛蜞菊内酯的报道多为实验室规模，步骤较繁琐，如张金生等（药学学报，36(1):34-37，2011）报道采用石油醚-乙醚-甲醇或95%甲醇渗滤提取、甲醇溶解除杂或乙酸乙酯萃取除杂、硅胶柱分离获取蟛蜞菊内酯，其中分离洗脱剂采用甲苯-丙酮-醋酸（6:8:1）或二氯甲烷-甲醇-水（14:9:4下层）；原红霞等（中国实验方剂学杂志，17（16）：103-105，2011）报道采用95%乙醇渗滤提取、乙酸乙酯萃取、硅胶柱石油醚-乙酸乙酯梯度分离、sephadex LH-20纯化获取蟛蜞菊内酯；Wagner等（Ger.DE3525363，德国专利）采用甲醇浸泡提取、乙酸乙酯萃取、C18反相HPLC梯度洗脱制备蟛蜞菊内酯，Kokai等（JP83228353，日本专利）采用水回流提取，丁醇-水(1:1)逆流-逆流分布、Sephadex LH-20，该类文献或采用含苯及二氯甲烷毒性较大的洗脱溶剂，或采用Sephadex LH-20、C18价格昂贵的分离填料，且几乎均采用非常耗时的渗滤或浸泡提取，无法进行工业规模放大生产，对照品产量无法满足实际应用所需。本专利技术通过系统提取、分离工艺优化研究，发现虽然蟛蜞菊内酯结构中含有一个内酯键和三个酚羟基（图1），结构不太稳定，但用含醇量70%以上的乙醇提取，50℃减压浓缩时其含量未见明显变化，提示可以用回流提取代替渗滤提取，大大加快提取效率；萃取时热水的温度不大于40℃，蟛蜞菊内酯可以较好地保持稳定。硅胶柱分离时，采用柱床紧密、柱效较高的中压或减压层析柱进行分离，不仅可以获得更好的分离效果，且大大加快了分离进度；采用自制多种不锈钢柱作为层析柱，可方便加工为任意所需大直径柱，显著提高分离通量；同时通过仔细优化洗脱溶剂，最终选择在石油醚-乙酸乙酯混合流动相中添加适量醋酸，选用该洗脱溶剂，可实现硅胶柱上的等度洗脱且回收率较高，对于批量制备非常有利，因为只需调配一种比例的洗脱剂，大大降低了溶剂回收调配的难度。采用系统优化的本制备工艺，可实现蟛蜞菊内酯的规模化制备，其纯度在98%以上，制备规模可达10克级以上。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种工艺简单、易规模化的制备新方法，可以以墨旱莲醇提物为原料，经乙酸乙酯萃取、中压或减压硅胶柱色谱纯化、重结晶三个步骤，即可获得纯度大于98%的蟛蜞菊内酯化学对照品，其规模可达十克级。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案：1）乙酸乙酯萃取：墨旱莲醇提物，或墨旱莲药材经体积分数不小于70%的乙醇提取后减压干燥获得醇提物，加入提取物重量3-5倍体积的水，加热使其溶解，温度控制在30℃-40℃；加入提取物重量1-2倍体积的乙酸乙酯萃取，重复萃取2-4次，合并萃取液，减压浓缩至醇提物重量的1/3～1/6体积（ml/g），然后拌入等比例重量（g/ml）的硅胶，干燥获得乙酸乙酯萃取物干粉；2）中压或减压硅胶柱色谱纯化：取径高比为2～12.5的不锈钢柱作为层析柱，装入萃取物干粉1-2倍重量的硅胶作为层析分离硅胶，干法上样；用石油醚：乙酸乙酯：醋酸（体积比8:2:1-6:4:1）混合溶剂洗脱，中压柱压力0.2-0.3MPa，减压柱压力在-0.08-0.09MPa，薄层色谱检测，以石油醚：乙酸乙酯：醋酸（体积比3:7:0.5-5:5:0.5）为展开剂，收集Rf值在0.40-0.48的洗脱液，减压浓缩，析出浅白色沉淀为蟛蜞菊内酯粗品；3）重结晶：上述对照品粗品用乙酸乙酯或甲醇溶解，-4℃-10℃以下放置析晶，即可获得纯度大于98%的蟛蜞菊内酯对照品，其外观为白色粉末。所述步骤1）中拌样硅胶一定采用100-200目硅胶，否则上样硅胶比层析硅胶颗粒细，将在加压和减压中下沉，严重影响分离效果。所述步骤2）的具体参数为，层析分离硅胶为100-200目或200-300目，装柱前不不需干燥活化处理，如将硅胶活化，其吸附能力太强，将大大降低对照品的回收率。洗脱剂中的石油醚沸程为60-90℃，洗脱剂洗脱控制在8～12倍柱体积，流速为100-150ml/min。所述步骤3）的具体过程为，重结晶时所用乙酸乙酯为分析纯重蒸溶剂，甲醇为色谱级，母液需过滤后再行放置结晶。以本专利技术从墨旱莲中分离蟛蜞菊内酯化学对照品具有如下优点和进步：1）本专利技术工艺简单，便于流线化生产本专利技术采用墨旱莲醇物经乙酸乙酯萃取，萃取液合并浓缩时不需浓缩成稠浸膏即可直接加入100-200目的硅胶拌样，通风橱挥干即可得萃取物干粉，适量研磨后即可作为第二步硅胶柱层析的待分离样品。第二步硅胶柱层析时采用等度洗脱溶剂，获得目标流份后通过减压干燥，一方面可获得蟛蜞菊内酯粗品，一方面回收溶剂便于重新调配循环使用，减压干燥时仍不需抽干溶剂，浓缩至小体积即可过滤放置析晶，获取蟛蜞菊内酯粗品，随后采用重蒸乙酸乙酯或色谱纯甲醇溶解过滤即可进行重结晶。三个分离步骤衔接的非常好，非常便于流线化生产。相较文献分离工艺每个步骤均需浓缩至干或稠浸膏，大大提高了分离效率。2）本专利技术采用的技术手段非常适宜放大进行规模化生产。本制备工艺对原料要求不高，工艺采用常见的70%乙醇提取，而非文献中采用的渗滤及浸泡操作，非常易于批量备料；硅胶柱层析采用不锈钢中压或减压层析，不但克服了传统玻璃中压柱的压力限制，同时不锈钢柱易于加工，可方便加工至所需的大直径柱，达到生产所需的大规模及高通量；硅胶填料便宜易得，所用溶剂仅涉及石油醚、乙酸乙酯、醋酸等常规溶剂，成本价廉。附图说明图1蟛蜞菊内酯的结构；图2硅胶柱层析后获得的蟛蜞菊内酯粗品的HPLC分析图谱（351nm）；图3蟛蜞菊内酯对照品重结晶后的HPLC分析图谱（351nm）；图4蟛蜞菊内酯的ESI-MS负离子质谱图谱；图5蟛蜞菊内酯的紫外色谱图。具体实施方式现结合实本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种规模化制备蟛蜞菊内酯化学对照品的方法，其特征在于：墨旱莲醇提物，经乙酸乙酯萃取、中压或减压硅胶柱色谱纯化、重结晶三个步骤，批量获取纯度大于98%的蟛蜞菊内酯对照品；具体步骤如下：1）乙酸乙酯萃取：墨旱莲醇提物，或墨旱莲药材经体积分数不小于70%的乙醇提取后减压干燥获得醇提物，加入提取物重量3‑5倍体积的水，加热使其溶解，温度控制在30℃‑40℃；加入提取物重量1‑2倍体积的乙酸乙酯萃取，重复萃取2‑4次，合并萃取液，减压浓缩至醇提物重量的1/3～1/6体积（ml/g，浓缩液体积/醇提物重量），然后拌入等比例重量（g/ml，硅胶重量/浓缩液体积）的硅胶，干燥获得乙酸乙酯萃取物干粉；2）中压或减压硅胶柱色谱纯化：取径高比为2～12.5的不锈钢柱作为层析柱，装入萃取物干粉1‑2倍重量的硅胶作为层析分离硅胶，干法上样；用石油醚：乙酸乙酯：醋酸（体积比8:2:1‑6:4:1）混合溶剂洗脱，中压柱压力0.2‑0.3MPa，减压柱压力在‑0.08‑0.09MPa，薄层色谱检测，以石油醚：乙酸乙酯：醋酸（体积比3:7:0.5‑5:5:0.5）为展开剂，收集Rf值在0.40‑0.48的洗脱液，减压浓缩，析出浅白色沉淀为蟛蜞菊内酯粗品；3）重结晶：上述对照品粗品用乙酸乙酯或甲醇溶解，‑4℃‑10℃放置析晶，即可获得纯度大于98%的蟛蜞菊内酯对照品，其外观为白色粉末。...

【技术特征摘要】
1.一种规模化制备蟛蜞菊内酯化学对照品的方法，其特征在于：墨旱
莲醇提物，经乙酸乙酯萃取、中压或减压硅胶柱色谱纯化、重结晶三个步
骤，批量获取纯度大于98%的蟛蜞菊内酯对照品；具体步骤如下：
1）乙酸乙酯萃取：
墨旱莲醇提物，或墨旱莲药材经体积分数不小于70%的乙醇提取后减压
干燥获得醇提物，加入提取物重量3-5倍体积的水，加热使其溶解，温度控
制在30℃-40℃；加入提取物重量1-2倍体积的乙酸乙酯萃取，重复萃取2-4
次，合并萃取液，减压浓缩至醇提物重量的1/3～1/6体积（ml/g，浓缩液体
积/醇提物重量），然后拌入等比例重量（g/ml，硅胶重量/浓缩液体积）的
硅胶，干燥获得乙酸乙酯萃取物干粉；
2）中压或减压硅胶柱色谱纯化：
取径高比为2～12.5的不锈钢柱作为层析柱，装入萃取物干粉1-2倍重量
的硅胶作为层析分离硅胶，干法上样；用石油醚：乙酸乙酯：醋酸（体积
比8:2:1-6:4:1）混合溶剂洗脱，中压柱压力0.2-0.3MPa，减压柱压力在
-0.08-0.09MPa，薄层色谱检测，以石油醚：乙酸乙酯：醋酸（体积比
3:7:0.5-5:5:0.5）为展开剂，收集Rf值在0.4...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖红斌，王莉，彭杰，程孟春，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁;21