快速检测油脂氧化程度的方法及测试盒技术

本发明专利技术涉及油脂氧化程度的快速检测方法，及在此基础上制备的油脂氧化程度快速测试盒。本发明专利技术基于Kreis试验，即油脂氧化二次分解产物与间苯三酚的显色反应，在此基础上引入丙二醛作为定量指标，并将1,1,3,3-四乙氧基丙烷加入空白油样作为参比液对油脂氧化程度进行定量检测。本发明专利技术点克服Kreis试验受人员、容器、操作、样品本身等方面显色不稳定的缺陷，解决了Kreis试验的定量问题，操作简单方便，利于现场操作，快速给出检测结果，另外成本低廉，利于推广。

【技术实现步骤摘要】
快速检测油脂氧化程度的方法及测试盒
本专利技术涉及油脂氧化程度的检测技术，具体涉及快速检测油脂氧化程度的方法及测试盒。
技术介绍
油脂氧化是危及油脂安全的重要方面。受来源、存放等因素影响，油脂往往会发生氧化、酸败反应，其产生的过氧化物会渐进地影响身体组织、破坏细胞膜结构，引起贫血、肝肾异常、昏睡等问题；产生的衍生物(醛)会降低食欲引起下痢；另外蛋白质与次级氧化产物发生交联反应，降低蛋白质的消化吸收。能够实现快速检测油脂氧化程度对于油脂的实际采购和品控有非常重要的意义。目前检测油脂氧化的试验方法有酸值、硫氰酸铁法、二甲酚橙、碘量法、硫代巴比妥法(TBA值或丙二醛含量)、Kreis试验(克雷斯试验)、茴香胺值法(pAnisidineValue,pAV)等。其中硫代巴比妥法(TBA值或丙二醛含量)即《猪油中丙二醛的测定》(GB/T5009.181-2003)已在国标《食用动物油脂卫生标准》(GB10146-2005)中被采用；茴香胺值在国标《动植物油脂茴香胺值的测定》(GB/T24304-2009)中被采用。这两种方法测定过程繁琐，或需要高温水浴；或试剂配制复杂、现配现用；或需要萃取分离，且二者均需使用分光光度计，大大限制了两者现场快速检测的应用。上述试验方法中可以实现快速检测油脂氧化方法的有酸值、硫氰酸铁法、碘量法、Kreis试验等；其中前三种方法受油脂产品中是否加入抗氧化剂、是否调整过酸碱度等的影响很大，往往不能准确的反映产品品质、油脂氧化程度。Kreis试验是应用较多的一种测试方法，可定性反映样品是否被氧化，操作简单，检测速度快。其检测方法为：取试样5mL于试管中，加入浓盐酸5mL，用橡皮塞塞好管口，剧烈振荡10s左右，再加0.1％间苯三酚乙醇溶液5mL，加塞剧烈振荡10s左右，使酸层分离，观察下层溶液颜色。但Kreis试验，测定过程影响因素很多，结果不稳定，且无相应的定量基准，即其所产生的颜色无法等量于相应的氧化程度，特别对于饲料用油脂，通常都会有不同程度的氧化，这样其应用受到大大的限制，迄今该方法也仅被用于定性测定；特别随着现在仪器检测的快速发展、检测要求的不断提高，该方法已逐步退出。为了克服上述现有技术的不足，本专利技术提供一种基于Kreis试验，不需要仪器设备、针对油脂氧化程度的快速检测方法，及配合该检测方法制备的油脂氧化程度快速测试盒。
技术实现思路
为了实现快速、便捷、定量的检测油脂氧化程度，本专利技术提供一种快速检测油脂氧化程度的方法及测试盒。本专利技术中涉及的术语与定义：测试液：本专利技术中用于显色的溶液，包括盐酸、间苯三酚溶液；间苯三酚溶液优选间苯三酚的乙醇溶液或间苯三酚乙醚溶液。待测油样：需要检测的油脂样品。待测比色液：待测油样经显色后的液体。空白油样：空白油样可使用新鲜无氧化的油脂样品；也可采用丙二醛含量小于等于(≤)最低检测要求值1/10的油脂样品[可用GB/T5009.181-2003硫代巴比妥法(TBA法)检测]。优选空白油样与待测油样种类相同或组分相近。例如：检测要求油脂中丙二醛含量不得超过1mg/100g，则本专利技术所述空白油样中丙二醛含量则小于等于(≤)0.1mg/100g。再如：若需要检测丙二醛含量为0.1-1.0mg/100g范围的待测油样，则本专利技术所述空白油样中丙二醛含量则小于等于(≤)0.01mg/100g；或者采用本专利技术方法进行检测，油样下层溶液呈无色或淡黄色，则也可定为空白油样。参比液：向空白油样中添加1,1,3,3-四乙氧基丙烷制得参比液；优选参比液中1,1,3,3-四乙氧基丙烷的含量为0.00306-30.6mg/100g，相当于参比液中丙二醛含量为0.001-10mg/100g。参比比色液：参比液经显色后的液体。比色卡：配制一系列丙二醛含量已知的参比液(如丙二醛含量分别为0.001-10mg/100g的参比液，即分别将0.00306-30.6mg的1,1,3,3-四乙氧基丙烷溶于100g空白油样中而制得)，取适量参比液依次与盐酸、间苯三酚溶液混合，显色稳定后得参比比色液，根据参比比色液下层颜色印制相应比色卡。比色卡上可印有与其颜色相对应的丙二醛值。限度参比液：设定1,1,3,3-四乙氧基丙烷或丙二醛含量限度的参比液；即限度参比液中1,1,3,3-四乙氧基丙烷或丙二醛含量已知。其配制方法同参比液。可根据油脂限度要求配制，如要求油脂产品中丙二醛值不得大于0.2mg/100g，则配制的限度参比液丙二醛含量为0.2mg/100g。限度参比比色液：限度参比液经显色后的液体。本专利技术基于Kreis试验方法，原理为油脂氧化二次分解产物与间苯三酚发生显色反应。通用方法为：取试样5mL于试管中，加入浓盐酸5mL，用橡皮塞塞好管口，剧烈振荡10s左右，再加0.1％间苯三酚乙醇溶液5mL，加塞剧烈振荡10s左右，使酸层分离，观察下层溶液颜色，以判断油脂氧化程度。本专利技术可根据待测油样、检测要求、比色杯形状大小等实际情况对油样用量及测试液浓度和用量、振摇时间和显色时间进行灵活调整和变动，如可减少油样、盐酸、间苯三酚溶液的用量，如各加1mL，或1滴试样，5滴盐酸，5滴间苯三酚溶液等；还可调整盐酸与间苯三酚溶液的浓度，如盐酸20-40％，间苯三酚0.01-2％，以达到更稳定的显色效果和更显著的色阶变化。本专利技术关键之处在于将丙二醛与Kreis试验结合，采用丙二醛值作为Kreis试验定量指标，同时引入空白油样，制备参比液。在相同条件下，将待测油样和参比液分别进行显色反应，然后对比二者下层所显颜色。该过程，一方面引入公认有效的丙二醛值作为检测指标，另一方面配制参比液，消除了因人员、容器、操作、样品本身等方面所引起的误差，克服了Kreis试验的不稳定、不能定量的缺陷。本专利技术提供一种快速检测油脂氧化程度的方法，包括：分别移取等量的参比液和待测油样于两容器中，分别向两容器中加入等量盐酸振摇一定时间，再分别加入等量的间苯三酚溶液振摇一定时间，显色一定时间后，得到参比比色液和待测比色液；比较待测比色液与参比比色液下层颜色，即可得出待测油样中丙二醛含量，实现快速判断油脂氧化程度的目的；或者根据参比比色液下层颜色印制成比色卡，将待测比色液下层颜色与比色卡相比较即可得出待测油样中丙二醛含量。为消除误差，提高检测准确性，优选参比液和待测油样振摇时间相同；优选参比液和待测油样显色时间相同。所述一种快速检测油脂氧化程度的方法，具体地说，包括以下步骤：1)选择空白油样；2)制备参比液；3)分别移取等量的参比液和待测油样于两容器中，分别向两容器中加入等量盐酸振摇一定时间(二者时间相同)，再分别加入等量的间苯三酚溶液振摇一定时间，显色一定时间后，得到参比比色液和待测比色液；为消除误差，提高检测准确性，优选参比液和待测油样振摇时间相同；优选参比液和待测油样显色时间相同；4)比较待测比色液与参比比色液下层下层颜色，即可得出待测油样中丙二醛含量，实现快速判断油脂氧化程度的目的。或者根据参比比色液下层颜色印制成比色卡，将待测比色液下层颜色与比色卡相比较即可得出待测油样中丙二醛含量。基于上述快速检测油脂氧化程度的方法，本专利技术提供两种快速检测油脂氧化程度的测试盒，一种为带有比色卡的快速检测油脂氧化程度的测试盒，另一种为带有限度参比液的快速本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速检测油脂氧化程度的方法，包括：分别移取等量的参比液和待测油样于两容器中，分别向两容器中加入等量盐酸振摇一定时间，再分别加入等量的间苯三酚溶液振摇一定时间，显色一定时间后，得到参比比色液和待测比色液；比较待测比色液与参比比色液下层颜色，即可得出待测油样中丙二醛含量；所述参比液为向空白油样中添加1,1,3,3‑四乙氧基丙烷而制得。

【技术特征摘要】
1.一种快速检测油脂氧化程度的方法，包括：分别移取等量的参比液和待测油样于两容器中，分别向两容器中加入等量盐酸振摇一定时间，再分别加入等量的间苯三酚溶液振摇一定时间，显色一定时间后，得到参比比色液和待测比色液；比较待测比色液与参比比色液下层颜色，即可得出待测油样中丙二醛含量；所述参比液为向空白油样中添加1,1,3,3-四乙氧基丙烷而制得；所述参比液和待测油样振摇时间相同；所述参比液和待测油样显色时间相同。2.根据权利要求1所述快速检测油脂氧化程度的方法，其特征在于，参比液中1,1,3,3-四乙氧基丙烷的含量为0.00306-30.6mg/100g，相当于参比液中丙二醛含量为0.001-10mg/100g。3.根据权利要求1或2所述快速检测油脂氧化程度的方法，其特征在于，还包括选择空白油样；所述空白油样为新鲜的油脂样品或丙二醛含量小于等于最低检测要求值1/10的油脂样品或采用所述检测方法下层溶液呈无色或淡黄色的油样。4.根据权利要求3所述快速检测油脂氧化程度的方法，其特征在于，所述空白油样为与待测油样组分相同或相近。5.一种快速检测油脂氧化程度的测试盒，其特征在于，包含测试液、比色杯和比色卡，用于测定待测油样中丙二醛含量，或测定待测油样中丙二醛含量范围；所述测试液包括盐酸、间苯三酚溶液；所述比色卡制备方法包括：配制一系列丙二醛含量已知的参比液，取适量参比液依次与盐酸、间苯三酚溶液混合，显色稳定后得参比比色液，根据参比比色液下层颜色印制相应比色卡。6.根据权利要求5所述快速检测油脂氧化程度的测试盒，其特征在于，所述参比液丙二醛含量为0.001-10mg/100g。7.根据权利要求5或6所述快速检测油脂氧化程度的测试盒，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘咏梅，蔡萌萌，蒙雪艳，裴双秀，胡文静，
申请(专利权)人：北京桑普生物化学技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11