人体细胞因子的表达、纯化和复性方式制造技术

本发明专利技术公开了一种人体细胞因子的表达、纯化和复性方式，属于生物技术领域，通过将人的IL-1beta基因插入到带GST的表达载体pGEx-4T-1中，在大肠杆菌中表达IL-1beta，并通过低温冻存法将包涵体大量释放，进而采用连续梯度法透析，一方面能大量制备IL-1beta，同时又能使IL-1beta很好的复性。

【技术实现步骤摘要】
人体细胞因子的表达、纯化和复性方式
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种人体细胞因子的表达、纯化和复性方式。
技术介绍
IL-1是一类小分子的细胞因子多肽，主要有IL-1alpha和IL-1beta两种亚型。IL-1主要由活化的巨噬细胞产生，此外在几乎所有有核细胞如B细胞、NK细胞、T细胞、树突状细胞等细胞中均可产生。两种不同亚型IL-1可以以同样的亲和力与其受体结合，发挥同样的生物学功能。IL-1功能广泛:可以与抗原协同作用使CD4+T细胞发生活化；促进B细胞生长和分化；促进单核巨噬细胞的抗原递呈能力；与11^-2或正^^协同作用增强NK细胞活性等。在目前肿瘤细胞免疫治疗中，使用IL-1beta和IFNy及IL-2等共同刺激NK的活性，从而达到治疗肿瘤作用，因此大量制备IL-1beta成为市场的巨大需求，但通常的市售的IL-1beta产品存在很多不尽如人意的技术问题，如产量低，由于细胞因子在制备过程中往往碰到复性困难而使细胞因子活性受到极大的影响。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种人体细胞因子的表达、纯化和复性方式，通过将人的IL-1beta本文档来自技高网...

【技术保护点】
人体细胞因子的表达、纯化和复性方式，主要包括以下步骤：（1）根据基因序列表查找人IL‑1beta的cDNA序列（IL1βaccession number NM_000576.2）并设计PCR引物：（2）运用pfu多聚酶进行PCR，并将PCR产物运用BamHI和XhoI进行酶切，同时用相同酶对pGEx‑4T‑1进行酶切，将酶切产物回收后用T4连接酶连接，所述PCR的反应体系由下列物质组成： 5ul 的10×Pfu Buffer with MgSO4 ；5ul的d NTPmix,2mM each；2ul的Forward Primer；2ul的Reverse Primer；5ul的Template ...

【技术特征摘要】
1.人体细胞因子的表达、纯化和复性方式，主要包括以下步骤: (1)根据基因序列表查找人IL-1beta的cDNA序列(ILlβ accession numberNM_000576.2)并设计 PCR 引物: (2)运用pfu多聚酶进行PCR，并将PCR产物运用BamHI和XhoI进行酶切，同时用相同酶对pGEx-4T-l进行酶切，将酶切产物回收后用T4连接酶连接，所述PCR的反应体系由下列物质组成:5ul 的 IOXPfu Buffer with MgS04 ；5ul 的 d NTPmix, 2mM each ；2ul 的 ForwardPrimer ；2ul 的 Reverse Primer ；5ul 的 Template DNA 和 I ul 的 Pfu DNA polymerase ;在对Pfu多聚酶进行PCR的过程中，按照以下方式进行:首先在95°C的条件下进行3min的预变性，在95°C的条件下进行30s的变性处理，然后在58°C的条件下进行30s的退火处理，同时在72°C的条件下进行2min的延伸，如此进行30个循环过程，然后保存于4°C的环境中； (3)将连接好的质粒用热刺激法转化到感受态BL21，并涂在氨苄板中； (4)撬取阳性克隆，进行菌落PCR鉴定和测序鉴定，并将鉴定为阳性的菌落保存； (5)接种步骤(4)中的阳性菌落与LB培养基中，并用IPTG诱导过夜，放置于温度为25°C，转速为250rpm的环境中； (6)收集步骤(5)中的细菌5000g，在温度为4°C的环境中，离心20min； (7)去上清后用PBS洗两次,然后将沉淀放置于_80°C过夜,过夜后取出，放置室温融化； (8)加入含溶菌酶的裂解液，所述裂解液的浓度为0.lmg/ml，室温裂解2h ； (9)利用超声进一步裂解细菌，所述裂解方式为:超声5s，然后间隔5s，共计30min，超声后经12000g,在4°C的环境中离心15min ； (10)用含detergen的缓冲液洗涤包涵体3_4次直到蛋白变白； (11)用含...

【专利技术属性】
技术研发人员：张进平，
申请(专利权)人：苏州景美生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32