【技术实现步骤摘要】
一种黄曲霉素BI快速检测试纸条及其制备方法与应用
本专利技术涉及一种黄曲霉素BI快速检测试纸条及其制备方法与应用，尤其是涉及一种黄曲霉素BI胶体金免疫层析快速检测试纸条及其制备方法与应用。
技术介绍
黄曲霉毒素Bl(aflatoxin BI称AFB1)是真菌的次级代谢产物，主要是由黄曲霉(Aspergillus flavus)、寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)和特曲霉(Aspergillusnomius)产生。它易天然存在于花生、棉籽、玉米、小麦和稻米等农作物中，具有强烈的毒性和致癌性；它是目前化学致癌物中最强的一种致癌诱变剂，其毒性比氰化钾强10倍，其致癌性比二甲基亚硝胺强75倍。1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为I类致癌物，其作用的靶器官主要为肝脏。我国国标中规定，大米中的黄曲霉素含量不得高于10 μ g/kg。目前，黄曲霉素BI的检测方法主要有:薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、酶联免疫吸附法(ELISA)。这类方法虽然检测精度较高，但存在仪器昂贵，检测成本高，操作不便捷等问题。...
【技术保护点】
一种黄曲霉素B1快速检测试纸条，其特征在于，按照以下方法制备而成：（1）抗黄曲霉素B1单抗的制备和纯化:用黄曲霉素B1偶联牛血清蛋白，混合弗氏不完全佐剂免疫BALB/c小鼠，取免疫小鼠脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞融合，筛选出稳定分泌抗镉离子单克隆抗体的阳性细胞株并扩大培养，注射细胞进小鼠体内诱生腹水；取2‑4 ml黄曲霉毒素B1腹水，加入相当于腹水体积1.8－2.2倍的摩尔浓度为 0.03‑0.08 mol/L的pH 4.5‑5.5的乙酸缓冲液，用摩尔浓度为0.08‑0.12mol/L的HCl调pH 至4.0‑5.0，于室温搅拌下逐滴加入辛酸，所述辛酸的加入量为每毫升稀释前...
【技术特征摘要】
1.一种黄曲霉素BI快速检测试纸条，其特征在于，按照以下方法制备而成: (1)抗黄曲霉素BI单抗的制备和纯化: 用黄曲霉素BI偶联牛血清蛋白，混合弗氏不完全佐剂免疫BALB/c小鼠，取免疫小鼠脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞融合，筛选出稳定分泌抗镉离子单克隆抗体的阳性细胞株并扩大培养，注射细胞进小鼠体内诱生腹水； 取2-4 ml黄曲霉毒素BI腹水，加入相当于腹水体积1.8 — 2.2倍的摩尔浓度为0.03-0.08 mol/L的pH 4.5-5.5的乙酸缓冲液，用摩尔浓度为0.08-0.12mol/L的HCl调pH至4.0-5.0，于室温搅拌下逐滴加入辛酸，所述辛酸的加入量为每毫升稀释前的腹水加入30 - 40 μ I 辛酸，搅拌 20-40min，2-8°C静置 l_2h，然后在 2_8°C下，在 8000-12000r/min 转速下离心20-40min，取上清液；上清液经砂芯漏斗过滤后加入相当于上清液体积1/20-1/5的PH为7.0-7.5的磷酸盐缓冲液，在2-8°C冷水浴下加入硫酸铵，使硫酸铵的终浓度为0.25-0.30 g/ml，静置 l_2h，2_8°C、8000_12000r/min 离心 10_20min，弃上清液，将沉淀溶于摩尔浓度为0.008-0.012mol/L的PBS溶液中进行透析:2_8°C静置过夜，8000_12000r/min离心10-20min,弃沉淀；得上清液抗黄曲霉素BI单抗； (2)胶体金溶液的制备:取质量浓度为0.008-0.012%的氯金酸水溶液100ml，搅拌加热至沸腾，一次性快速加入质量浓度为0.8-1.2%的柠檬酸三钠水溶液2.0 — 2.5ml，继续搅拌加热0.5-24h，直至溶液呈酒红色，室温冷却，得到含有粒径为20 - 40nm的胶体金颗粒的胶体金溶液，胶体金溶液4°C保存； (3)胶体金标记抗体:取步骤(2)所得胶体金溶液90- 110ml，用摩尔浓度为0.2 一0.311101/1的碳酸钾溶液将其？!1值调至8.0 — 8.5 ;将步骤(1)所得抗黄曲霉素BI单抗1.6mg加入到胶体金溶液中，搅拌均匀，静置0.5 — 24小时；逐滴加入质量浓度为8 一 12%的无菌牛血清蛋白10 - 12ml，搅拌0.5 — 24h，4°C 一 30°C静置过夜；将标记后的胶体金溶液于12000 - 14000r/min离心30 — 50min，弃上清液，往所得沉淀中加入摩尔浓度为0.01 - 0.02mol/L的磷酸盐缓冲液3 — 5ml重悬，得到抗黄曲霉素BI单抗标记的胶体金溶液； (4)喷金:将步骤(3)所得抗黄曲霉素BI单抗标记的胶体金溶液按2— 10 μ 1/cm的喷量喷在结合垫上，37°C — 45°C抽风烘干，时间为5 - 24h，得到喷金后的结合垫； (5)硝酸纤维素膜上包被C，T线:在硝酸纤维素膜上包被C线和T线，其中C线为质控线，包...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘博，林亲录，杨涛，罗非君，孙术国，肖华西，汪龙，
申请(专利权)人：中南林业科技大学，
类型：发明
国别省市：湖南;43
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