山蚂蝗提取物及从中分离的总黄酮和山萘苷及其医药用途制造技术

本发明专利技术涉及医药技术领域，是圆菱叶山蚂蝗提取物以及从中分离到的圆菱叶山蚂蝗总黄酮和山萘苷单体化合物在制备防治骨质疏松药物或食品中的应用。本发明专利技术以圆菱叶山蚂蝗干燥全草为原料进行了提取分离，得到了圆菱叶山蚂蝗提取物，由圆菱叶山蚂蝗提取物制备圆菱叶山蚂蝗总黄酮并分离到山萘苷单体化合物。经体内外实验，表明圆菱叶山蚂蝗提取物、圆菱叶山蚂蝗总黄酮或山萘苷单体化合物都具有良好的抗骨质疏松的生物活性，因此可用于制备防治骨质疏松的药物或食品。本发明专利技术制备方法简单，为抗骨质疏松提供了新的药物来源。

【技术实现步骤摘要】
山蚂蝗提取物及从中分离的总黄酮和山萘苷及其医药用途
本专利技术涉及医药
，是圆菱叶山蚂蝗提取物以及从中分离到的圆菱叶山蚂蝗总黄酮和山萘苷单体化合物在制备防治骨质疏松药物或食品中的应用。本申请是专利申请号为201210587958.6的分案申请。
技术介绍
骨质疏松症(Osteoporosis,OP)是一种常见病多发病。目前，全世界约有2亿人患骨质疏松症，其发病率已经跃居世界各种常见症的第7位。目前，治疗骨质疏松症的化学药主要使用雌激素类骨吸收抑制剂或雄性激素类等骨形成刺激剂，长期服用具有较大的副作用。从天然的植物中寻找治疗骨质疏松疾病且副作用小的有效提取物、有效部位及单体化合物成为研究热点。圆菱叶山蚂蝗Podocarpiumpodocarpum(DC.)YangetHuang或DesmodiumpodocarpumDC.是豆科蝶形花亚科(Papilionaceae，Leguminosae)山蚂蝗属或长柄山蚂蝗属植物，生于海拔700～1000米山谷密林中或溪边，我国东部和西南部地区有分布。圆菱叶山蚂蝗以根、叶及全草入药，具有发表散寒，止血功能，主治急性风湿痹痛、跌打损伤，刀伤等(国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草[M].上海科学技术出版社，3341-3343.)。现代药理学研究表明，圆菱叶山蚂蝗具有镇痛、解热和抗炎作用(Zhu,Z.Z.,Ma,K.J.,Ran,X.,Zhang,H.,Zheng,C.J.,Han,T.,Zhang,Q.Y.,Qin,L.P.,2010.Analgesic,anti-inflammatoryandantipyreticactivitiesofthepetroleumetherfractionfromtheethanolextractofDesmodiumpodocarpum.Journalofethnopharmacology133,1126-1131.)。目前，仅有文献报道从长柄山蚂蝗的变种尖叶长柄山蚂蝗(Podocarpiumpodocarpum(DC.)YangetHuangvar.oxyphyllum(DC.)YangetHuang)分离得到5个化合物：β-谷甾醇、正三十烷醇、木栓酮、齐墩果酸和脱镁叶绿素甲酯(Ma,X.Q.,Zheng,C.J.,Hu,C.L.,Rahman,K.,Qin,L.P.,2011.ThegenusDesmodium(Fabaceae)-traditionalusesinChinesemedicine,phytochemistryandpharmacology.J.Ethnopharmacol.138,314-332.)。至今未见有关圆菱叶山蚂蝗提取物、圆菱叶山蚂蝗总黄酮或山萘苷单体化合物具有防治骨质疏松症的报道。
技术实现思路
本专利技术提供一种圆菱叶山蚂蝗提取物以及从中分离到的圆菱叶山蚂蝗总黄酮和山萘苷单体化合物，以及圆菱叶山蚂蝗提取物、圆菱叶山蚂蝗总黄酮或山萘苷单体化合物在制备防治骨质疏松药物或食品中的应用。本专利技术以圆菱叶山蚂蝗干燥全草为原料进行了提取分离，得到了圆菱叶山蚂蝗提取物，由圆菱叶山蚂蝗提取物制备圆菱叶山蚂蝗总黄酮并分离到山萘苷单体化合物。制备方法如下：1、制备圆菱叶山蚂蝗提取物将干燥圆菱叶山蚂蝗全草用水或体积百分比不超过95％的乙醇水溶液按常规水煎煮或回流提取，优选为60～80％乙醇，最佳为80％乙醇，将提取液减压浓缩至无醇味的浸膏，得圆菱叶山蚂蝗提取物。2、制备圆菱叶山蚂蝗总黄酮将上述制得的圆菱叶山蚂蝗提取物采用大孔吸附树脂或聚酰胺柱层析纯化，优选大孔吸附树脂，先用水和20％乙醇水溶液洗脱，弃洗脱液，再用30～80％乙醇洗脱，收集洗脱液，优选收集30～60％乙醇的洗脱液，减压浓缩干燥，得圆菱叶山蚂蝗总黄酮。以山萘苷为对照采用紫外分光光度法(341nm)测定其中总黄酮含量在52～65％。3、制备山萘苷单体化合物将上述制备的圆菱叶山蚂蝗提取物用水溶解成混悬液后，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取，将正丁醇萃取液减压浓缩成流浸膏状，用硅胶(100～200目)拌样，干法上柱，以二氯甲烷：甲醇为10∶1～1∶1的不同比例进行洗脱，收集二氯甲烷：甲醇为10∶1～5∶1的洗脱液，减压浓缩，用少量甲醇溶解后即析出黄色晶体，用甲醇清洗后得黄色粉末，即山萘苷单体化合物，HPLC测定含量为95～99％。山萘苷单体化合物的化学结构式如下：其中rha为鼠李糖。经过体内外药理试验，表明圆菱叶山蚂蝗提取物、圆菱叶山蚂蝗总黄酮或山萘苷单体化合物均具有抗骨质疏松的效果。因此可用于制备防治骨质疏松药物或食品。本专利技术圆菱叶山蚂蝗提取物、圆菱叶山蚂蝗总黄酮或山萘苷单体化合物制备方法简单，抗骨质疏松效果明显，因此可用于制备防治骨质疏松的药物或食品。本专利技术为抗骨质疏松提供了新的药物来源。附图说明图1是各组动物骨密度BMD，其中vs模型对照组，*P<0.05，**P＜0.05图2是各组动物血清中ALP活性，其中vs模型对照组，*P<0.05图3是各组动物血清中TRAP活性，其中vs模型对照组，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。具体实施方式现结合附图和实施例对本专利技术作详细描述，本专利技术的保护范围不限于实施例。实施例1制备圆菱叶山蚂蝗提取物和山萘苷单体化合物圆菱叶山蚂蝗全草20kg，粉碎。按常规水煎煮，料液比为1∶15(v/v)，提取时间为2小时，提取次数为3次。将提取液热过滤，滤液合并后减压蒸干，得提取物浸膏3kg，提取物得率为15％。将提取物浸膏以1倍量水(3L)混悬，依次用石油醚(3L×3)、二氯甲烷(3L×3)、乙酸乙酯(3L×3)和正丁醇(3L×3)等体积萃取，取正丁醇萃取液减压浓缩成流浸膏，加入1.5倍柱层析硅胶拌匀，干法上样，以二氯甲烷：甲醇为10：1～5：1的洗脱液洗脱，收集洗脱液，蒸干后以少量甲醇溶解，常温放置过夜析晶，滤出结晶，再用甲醇重结晶，得山萘苷14g，HPLC测定山萘苷纯度为98.5％。实施例2制备圆菱叶山蚂蝗总黄酮圆菱叶山蚂蝗干燥全草15kg，粉碎，加8倍体积量95％乙醇，回流提取，提取时间为3小时，提取次数为3次。将提取液热过滤，滤液合并后减压浓缩至流浸膏状，此为圆菱叶山蚂蝗提取物。将圆菱叶山蚂蝗提取物加入至预先处理好的AB-8大孔吸附树脂，其中大孔树脂与原药材生药重量比为1：1。先以5倍柱体的水进行洗脱至无色，再依次以20％乙醇、30％乙醇、60％乙醇、80％乙醇进行洗脱，收集30～60％部位的洗脱液，将洗脱液蒸干，得圆菱叶山蚂蝗总黄酮18.1g。以实施例1制备的山萘苷为对照，紫外分光光度法(341nm)测定圆菱叶山蚂蝗总黄酮中总黄酮含量为58.4％。实施例3制备圆菱叶山蚂蝗提取物和圆菱叶山蚂蝗总黄酮圆菱叶山蚂蝗干燥全草15kg，粉碎，加8倍体积量80％乙醇，回流提取，提取时间为3小时，提取次数为3次。热过滤，滤液合并后减压浓缩至流浸膏状，此为圆菱叶山蚂蝗提取物。将圆菱叶山蚂蝗提取物加入至预先处理好的60～100目聚酰胺树脂，其中树脂与原药材生药重量比为1：1。先用水洗脱至无色，再依次以10％乙醇、30％乙醇、60％乙醇、80％乙醇进行洗脱，分别收集30％乙醇、60％乙醇、本文档来自技高网...

【技术保护点】
山萘苷单体化合物，制备方法如下： 1)将干燥圆菱叶山蚂蝗全草用水或体积百分比不超过95％的乙醇水溶液按常规水煎煮或回流提取，将提取液减压浓缩至无醇味的浸膏，得圆菱叶山蚂蝗提取物； 2)将上述提取物用水溶解成混悬液后，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取，将正丁醇萃取液减压浓缩成流浸膏状，用硅胶(100～200目)拌样，干法上柱，以二氯甲烷：甲醇为10∶1～1∶1的不同比例进行洗脱，收集二氯甲烷：甲醇为10∶1～5∶1的洗脱液，减压浓缩，用少量甲醇溶解后即析出黄色晶体，用甲醇清洗后得黄色粉末，即山萘苷单体化合物，其化学结构式如下： 其中rha为鼠李糖。

【技术特征摘要】
1.一种山萘苷单体化合物在制备防治骨质疏松药物中的应用，其特征在于，该山奈苷单体化合物的制备方法包括如下步骤：1)将干燥圆菱叶山蚂蝗全草用水或体积百分比不超过95％的乙醇水溶液按常规水煎煮或回流提取，将提取液减压浓缩至无醇味的浸膏，得圆菱叶山蚂蝗提取物；2)将上述提取物用水溶解成混悬液后，依次用石油醚、二氯甲烷、乙...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑承剑，秦路平，马学琴，张巧艳，韩婷，张宏，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：上海;31