一种海南暗罗根提取物的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种海南暗罗根提取物的制备方法，是取海南暗罗根的干燥粉末用碱水润湿后，加入溶剂提取；提取液经过滤、减压浓缩得到总提取物，加水混悬，用氯仿萃取，减压回收得到氯仿萃取部位，即为海南暗罗根亲脂性总生物碱部位，该部位包括四个咔唑类、三个阿朴菲类和一个酰胺类生物碱。本发明专利技术制得的提取物得率高，工艺流程简单，成本低廉，适合较大规模的制备，提取物具有很好的广谱抗肿瘤活性，可以应用于预防和治疗肿瘤药物中。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了，是取海南暗罗根的干燥粉末用碱水润湿后，加入溶剂提取；提取液经过滤、减压浓缩得到总提取物，加水混悬，用氯仿萃取，减压回收得到氯仿萃取部位，即为海南暗罗根亲脂性总生物碱部位，该部位包括四个咔唑类、三个阿朴菲类和一个酰胺类生物碱。本专利技术制得的提取物得率高，工艺流程简单，成本低廉，适合较大规模的制备，提取物具有很好的广谱抗肿瘤活性，可以应用于预防和治疗肿瘤药物中。【专利说明】
本专利技术属于天然植物有效成分的提取分离
，涉及。
技术介绍
番蒸枝科(Annonaceae)暗罗属(Polyalthia)植物，常为直立灌木。据中国植物志记载，该属植物全世界约有200种，分布于马来西亚、菲律宾、印度、斯里兰卡等亚热带地区。在印度民间，暗罗属植物被用作传统退烧药、堕胎药、降压药等。目前化学成分研究已从暗罗属植物中得到了生物碱类、二萜类(主要为克罗烷和对映贝壳衫烷)、三萜类等多种结构类型化学成分，同时药理研究发现部分化合物表现出良好抗肿瘤、抗菌等生物活性。暗罗属植物我国有17种， 主要分布于云南、广东、广西南部及海南。在海南民间，该属植物被用于治疗气滞腹痛、痛经、梅核气等疾病。其中，海南暗罗(Polyalthia IauiMerr.)为我国特有植物，仅分布于海南岛。前期初步研究发现，海南暗罗的乙醇提取物具有很好的抗肿瘤活性，但目前国内外未见到有关生物碱提取及相关生物活性的研究报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术的不足而提供，利用简单的提取分离方法对海南暗罗的根部位中亲脂性总生物碱进行制备，完成抗肿瘤活性测试，经多次柱层析，阐明其化学成分。本专利技术所采用的技术方案:，其步骤如下:1、取海南暗罗根的干燥粉末，用碱水润湿后，加入溶剂进行提取。所述碱水是5~30 %的石灰乳溶液、5~30 %的Na2CO3溶液或10 %氨水；所述溶剂是85~95 %的乙醇或甲醇溶液。2、将海南暗罗的根提取液经过滤、减压浓缩得到总提取物，提取物加水混悬，氯仿萃取，减压回收得到氯仿萃取部位，即亲脂性总生物碱。3、氯仿萃取部位经反复柱层析，得到8个生物碱类化合物，其中4个为咔唑类、3个为阿朴菲类、I个为酰胺类生物碱。上述方法中，所述海南暗罗根的干燥粉末是将海南暗罗的根经阴干后粉碎得到。上述方法中，所述提取方法包括室温浸泡、加热或超声提取。上述方法中，海南暗罗根药材与溶剂的体积比为1:1~1:10。上述方法中，柱层析用填料为柱层析用硅胶或葡聚糖凝胶。上述方法中，8个生物碱类化合物(4个为咔唑类，3个阿朴菲类和I个为酰胺类)，分别为 Darienine、Isooncodine、Onychine >5, 8-dihydroxy-6-methoxy-onychine>Liridine、Liriodenine、Oxostephanine 和香豆酉先基酪胺。本专利技术的提取物具有广谱抗肿瘤活性， 可以广泛应用于预防和治疗肿瘤药物中。本专利技术的优点在于:I)利用简单的提取分离方法，对海南暗罗的根部位中亲脂性总生物碱进行提取制备，抗肿瘤活性筛选，并经多次柱层析，阐明该活性部位的化学成分。2)本专利技术所得提取物的化学成分明确。3)所得提取物具有很好的广谱抗肿瘤活性，可以广泛用于预防和治疗肿瘤药物中。4)本法明制得的提取物得率高，工艺流程简单，成本低廉，适合较大规模的制备。【具体实施方式】下面结合实施例，对本专利技术的【具体实施方式】作进一步详细描述。以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。海南暗罗根提取物的制备方法步骤如下:I)、将粉碎后的海南暗罗根药材(过20~80目筛)用碱水(是5~30%的石灰乳溶液、5~30%的Na2CO3溶液或10%氨水等)润湿后，加入85~95%的乙醇或甲醇溶液，室温浸泡、加热或超声提取，提取时间为60分钟至7天，料液比为1:1~1:10。2)、将海南暗罗的根提取液过滤、减压回收得到总提取物，提取物加水混悬，采用氯仿萃取，减压回收得到氯仿部位，即亲脂性总生物碱。3)、对氯仿部位进行反复柱层析:石油醚-乙酸乙酯(10:l，v/v)硅胶柱层析得到化合物(5);石油醚-氯仿(5:l，v/v)硅胶柱层析得到化合物(6);石油醚-乙酸乙酯(4:1，v/v)重结晶得到化合物(I);氯仿-乙酸乙酯(20:l-l:10，v/v)硅胶柱层析，再经氯仿-甲醇(1:10，v/v)凝胶色谱纯化得到化合物(7);石油醚-乙酸乙酯(3:1，v/v)制备薄层色谱纯化得到化合物(2);氯仿-乙酸乙酯(6:1，v/v)洗脱，再经制备薄层色谱纯化石油醚-乙酸乙酯(2:1，v/v)得到化合物(3);氯仿-乙酸乙酯(5:1，v/v)硅胶柱层析纯化得到化合物(4);氯仿-乙酸乙酯(2:1，v/v)硅胶柱层析纯化得到化合物(8)。4)、综合应用多种光谱和波谱技术(包括IR、UV、MS、1D/2D NMR)结合相关文献参考，对纯化得到的单体化合物进行结构鉴定，上述8个化合物都为生物碱类化合物(分别为4个咔唑类,3个阿朴菲类和I个酰胺类)，具体结构为Darienine (I)、Isooncodine (2)、Onychine (3)、5，8-dihydroxy-6-methoxy-onychine (4)、Liridine (5)、Liriodenine (6)、Oxostephanine (7)和香豆酰基酪胺(8),测定结构可靠。下面结合实施例对本专利技术作详细说明。实例一、海南暗罗的根部位的亲脂性总生物碱的制备取海南暗罗的根(IOKg)阴干后粉碎，10%氨水润湿，室温下采用95%乙醇室温浸泡3次，7天/次，合并提取液，减压浓缩得总提取物(0.5Kg)，加水悬浮分散，采用氯仿萃取，得氯仿萃取部位(25g)。氯仿萃取部位经过反复硅胶、葡聚糖凝胶(Sephdex LH-20)柱层析，得到4个咔唑类，3个阿朴菲类和I个酰胺类生物碱，分别为:石油醚-乙酸乙酯(10:l，v/V)硅胶柱层析Liridine (5) 7.6mg ;石油醚-氯仿(5:1，v/v)硅胶柱层析得到Liriodenine (6) 10.5mg ;石油醚-乙酸乙酯(4:1, v/v)重结晶得到 Darienine (I) 6.3mg ；氯仿-乙酸乙酯(20:1-1:10，v/v)硅胶柱层析，再经氯仿-甲醇(1:10，v/v)凝胶色谱纯化得到Oxostephanine (7) 3.1mg ;石油醚-乙酸乙酯(3:1，v/v)制备薄层色谱纯化得到Isooncodine (2) 7.4mg ;氯仿-乙酸乙酯(6:1，v/v)洗脱，再经制备薄层色谱纯化石油醚-乙酸乙酯(2:1, v/v)得到Onychine (3) 3.4mg;氯仿-乙酸乙酯(5:1，v/v)硅胶柱层析纯化得到 5, 8-dihydroxy-6-methoxy onychine (4) 2.2mg ;氯仿 _ 乙酸乙酯(2:1, v/v)硅胶柱层析纯化得到香豆酰基酪胺(8)2.2mg。化学结构如下:【权利要求】1.，其特征在于，其步骤如下: 1)、取海南暗罗根的干燥粉末，用碱水润湿后，加入溶剂进行提取；所述碱水是本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种海南暗罗根提取物的制备方法，其特征在于，其步骤如下：1)、取海南暗罗根的干燥粉末，用碱水润湿后，加入溶剂进行提取；所述碱水是5～30％的石灰乳溶液、5～30％的Na2CO3溶液或10％氨水；所述溶剂是85～95％的乙醇或甲醇溶液；2)、将海南暗罗的根提取液经过滤、减压浓缩得到总提取物，提取物加水混悬，氯仿萃取，减压回收得到氯仿萃取部位，即亲脂性总生物碱；3)、氯仿萃取部位经反复柱层析，得到8个生物碱类化合物，其中4个为咔唑类、3个为阿朴菲类、1个为酰胺类生物碱。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：宋小平，陈文豪，李小宝，付艳辉，陈光英，
申请(专利权)人：海南师范大学，
类型：发明
国别省市：海南;66