MFG-E8及其用途制造技术

本发明专利技术公开了使用乳脂球表皮生长因子-因子VIII(MFG-E8)治疗脑缺血症的方法，同样地公开了重组人MFG-E8及其在用于治疗缺血/再灌注后炎症和器官损伤、以及脓毒症和肺损伤的药物组合物、产品和方法中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】MFG-E8及其用途相关申请的交叉参考本申请要求保护2011年4月28日提交的美国临时专利申请N0.61/480，031的利益，将其内容通过引用整体并入本文。政府资助声明本专利技术是在国立卫生研究院授予的基金号GM057468由政府支持进行的。政府具有本专利技术的某些权利。专利技术背景在整个本申请中，在括号中提及各种出版物。这些参考资料的完全引用可见于说明书的结尾。将这些出版物的公开内容通过引用整体并入本申请中以更全面地描述本专利技术所属的领域。炎症和细胞凋亡在缺血损伤后脑梗塞的演化中起着至关重要的作用。在脑梗塞核心的坏死细胞死亡后，相对低灌注的半阴影中的细胞死亡通过炎症和细胞凋亡机制随时间发生。炎症过程牵涉NF-K B介导的可引起细胞损伤的细胞因子(例如TNF-α )的释放(Dirnagl等人1999)。细胞凋亡包括促细胞凋亡分子例如bax的释放和半胱天冬氨酸蛋白酶的激活，从而导致DNA片段化和细胞死亡。被缺血激活的细胞损伤机制被细胞存活机制(包括抗细胞凋亡分子例如bcl-2的上调)抵消(Antonsson2004)。过氧化物酶体增生物激活受体-Y (PPAR-Y)是已显示通过下调细胞因子释放而对抗炎症的配体诱导性转录因子(Ricote和Glass2007)。炎症和细胞凋亡的治疗性抑制可在缺血性卒中后拯救半阴影。脓毒症是最盛行的疾病之一，占据重症监护室(I⑶)接收者的20% (Angus，等人，2001)。证据表明仅在美国，每年就有超过750，000人发生脓毒症，总体死亡率为28.6%(Angus，等人，2001)。尽管已在脓毒症患者的治疗中取得进展，但大量此类患者死于紧接着发生的脓毒症休克和多器官衰竭(Ferrer,等人，2008; Strehlow,等人，2006;Martin,等人，2003;Guidet,等人，2005)。医院记录分析表明已死于脓毒症的患者的总数实际上在不断增加(Martin,等人，2003)。随着美国人口老龄化，脓毒症的发病率预计将增加，因为脓毒症的发病率和死亡率随年龄增长而稳定上升(Angus，等人，2001;Martin,等人，2003)。因此，存在对脓毒症患者的有效新型疗法的紧迫而未满足的医学需要。乳脂球表皮生长因子VIII(MFG_E8)，也称为乳粘素(lactadherin)，是最初在小鼠乳和乳腺上皮中发现的66-kDa糖蛋白(Stubbs等人1990)。其为抑制肠病原体结合和感染性的重要乳黏液蛋白相关防御组分(Yolken，等人，1992)。随后发现MFG-E8广泛地分布 在小鼠和其它哺乳动物物种包括人的不同组织中(Aziz等人2009;Hanayama等人2004; Larocca等人1991)。在脑中，MFG-E8在星形细胞(Boddaert等人2007)和小神经胶质细胞中表达(Fuller和Van Eldik2008)。MFG-E8包含两个N-末端表皮生长因子(EGF)样重复，和两个C末端盘菌素(discoidin)/F5/8C结构域。MFG-E8通过第二个EGF结构域中包含的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)基序结合ανβ3/5整联蛋白异二聚体(Andersen等人1997)。最近的研究已显示MFG-E8还可由活化的巨噬细胞和未成熟树突细胞分泌，并且已与凋亡细胞的调理作用关联(Hanayama,等人，2002;Hanayama,等人，2004;Miyasaka,等人，2004; Thery,等人，1999; Oshima,等人，2002)。MFG-E8 的第二个 F5/8C 结构域对阴离子膜磷脂例如磷脂酰丝氨酸具有高亲和力，所述磷脂在细胞凋亡过程中变得外露(Andersen等人1997; Shao等人2008)。已显示MFG-E8通过在凋亡细胞上暴露的磷脂酰丝氨酸与吞噬细胞上的α νβ 3/5整联蛋白受体之间充当桥接分子来促进凋亡细胞的吞噬去除。凋亡细胞的这种增强的清除阻止了会释放导致组织损伤的促炎介质的继发性坏死(Hanayama等人2002)。MFG-E8还在组织损伤中产生其它有益效应，例如在肠缺血(Cui等人2010)和阿尔茨海默病(Fuller和Van Eldik2008)中抑制炎症和细胞凋亡。先前的研究已显示含大鼠MFG-E8的外来体(exosome)或重组鼠MFG-E8 (rmMFG-E8)的施用会增加凋亡细胞的吞噬作用，减少促炎细胞因子，和在由盲肠结扎穿孔(CLP)诱导的脓毒症的大鼠模型中改善存活(Miksa，等人，2008;Miksa，等人，2009c)。然而，一个阻碍将MFG-E8开发为患者的治疗剂的障碍是动物蛋白质在人中的潜在免疫原性。本专利技术特别地使用重组人MFG-E8 (rhMFG_E8)来解决对治疗脑缺血症和脓毒症以及其它疾病和障碍的需求。专利技术概述本专利技术提供了预防和/或治疗受试者的脑缺血症的方法，包括以有效地预防和/或治疗脑缺血症的量给受试者施用乳脂球表皮生长因子-因子VIII (MFG-E8)。本专利技术还提供制备用于预防和/或治疗脑缺血症的药物组合物的方法，所述方法包括以有效地预防和/或治疗脑缺血症的量在药物组合物中配制乳脂球表皮生长因子-因子 VIII(MFG-E8)。本专利技术还提供了包含以用于预防和/或治疗脑缺血症的剂型存在的乳脂球表皮生长因子-因子VIII (MFG-E8)和药学上可接受的载体的药物组合物。本专利技术还提供了药品，其中包含在药学上可接受的载体中配制的乳脂球表皮生长因子-因子VIII (MFG-E8);和提供关于施用MFG-E8以预防和/或治疗脑缺血症的说明的包装说明书。本专利技术还提供了具有与人MFG-E8(hMFG-E8) (SEQ ID NO:1)具有至少95%的同一性的氨基酸序列的重组人MFG-E8 (rhMFG-E8)，其中所述rhMFG_E8是非糖基化的。本专利技术还提供了预防和/或治疗受试者的缺血/再灌注后炎症和/或器官损伤的方法，包括以有效地预防和/或治疗炎症和/或器官损伤的量给受试者施用重组人乳脂球表皮生长因子-因子VIII (rhMFG-E8)，其中所述rhMFG_E8具有与人MFG-E8 (hMFG_E8) (SEQID NO:1)具有至少95%的同一性的氨基酸序列，并且其中rhMFG-E8是非糖基化的。本专利技术还提供了治疗患有脓毒症的受试者或处于发生脓毒症的风险中的受试者的方法，所述方法包括给受试者施用有效地减弱脓毒症的生理作用的量的重组人乳脂球表皮生长因子-因子VIII(rhMFG-E8)，其中所述rhMFG-E8具有与人MFG-E8(hMFG-E8) (SEQ IDNO:1)具有至少95%的同一性的氨基酸序列，并且其中rhMFG-E8是非糖基化的。 本专利技术还提供了治疗受试者的肺损伤的方法，包括给受试者施用有效地治疗肺损伤的量的重组人乳脂球表皮生长因子-因子VIII (rhMFG-E8)，其中所述rhMFG-E8具有与人MFG-E8 (hMFG-E8) (SEQ ID NO:1)具有至少95%的同一性的氨基酸序列，并且其中rhMFG_E8是非糖基化的。还提供了制备用于预防和/或治疗受试者的缺血/再灌注后炎症和/或器官损伤的药物组合物的方法，所述方法包括以有效地预防和/或治疗缺血/再灌注后炎症和/或器官本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种预防和/或治疗受试者的脑缺血症的方法，包括以有效地预防和/或治疗脑缺血症的量给受试者施用乳脂球表皮生长因子‑因子VIII(MFG‑E8)。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.04.28 US 61/480,0311.一种预防和/或治疗受试者的脑缺血症的方法，包括以有效地预防和/或治疗脑缺血症的量给受试者施用乳脂球表皮生长因子-因子VIII (MFG-E8)。2.权利要求1的方法，其中所述受试者具有脑缺血症。3.权利要求1的方法，其中所述受试者是处于发生脑缺血症的风险中的患者。4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述脑缺血症是由阻塞脑血管的血块引起的局灶性脑缺血。5.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述脑缺血症是由至脑的血流减少引起的全脑缺血。6.权利要求1-5中任一项的方法，其中施用MFG-E8降低了白细胞介素-6(IL_6)的脑水平。7.权利要求1-6中任一项的方法，其中施用MFG-E8减少了浸润中性粒细胞的数目。8.权利要求1-7中任一项的方法，其中施用MFG-E8减轻脑炎症和/或细胞凋亡。9.权利要求1-8中任一项的方法，其中施用MFG-E8减少和/或预防脑组织的死亡。10.权利要求1-9中任一项的方法，其中受试者的存活机会增加。11.一种制备用于预防和/或治疗脑缺血症的药物组合物的方法，所述方法包括以有效地预防和/或治疗脑缺血症的量在药物组合物中配制乳脂球表皮生长因子-因子VIII(MFG-E8)。12.权利要求1-11中任一项的方法，其中所述MFG-E8是重组人MFG-E8(rhMFG_E8)。13.权利要求12的方法，其中所述rhMFG-E8具有与人MFG-E8(hMFG-E8)(SEQ ID NO:1)具有至少95%的同一性的氨基酸序列。14.权利要求12的方法，其中所述rhMFG-E8具有与人MFG-E8(hMFG-E8)(SEQ ID NO:1)具有至少99%的同一性的氨基酸序列。15.权利要求12的方法，其中所述rhMFG-E8具有与人MFG-E8(hMFG-E8)(SEQ ID NO:1)相同的氨基酸序列。16.权利要求1-15中任一项的方法，其中所述rhMFG-E8是非糖基化的。17.一种药物组合物，其包含以用于预防和/或治疗脑缺血症的剂型存在的乳脂球表皮生长因子-因子VIII (MFG-E8)和药学上可接受的载体。18.—种药品，其包含在药学上可接受的载体中配制的乳脂球表皮生长因子-因子VIII (MFG-E8);和提供关于施用MFG-E8以预防和/或治疗脑缺血症的说明的包装说明书。19.权利要求17的药物组合物或权利要求18的药品，其中所述MFG-E8是重组人MFG-E8(rhMFG-E8)。20.权利要求19的药物组合物或药品，其中所述rhMFG-E8具有与人MFG-E8(hMFG_E8)(SEQ ID NO:1)具有至少95%的同一性的氨基酸序列。21.权利要求19的药物组合物或药品，其中所述rhMFG-E8具有与人MFG-E8(hMFG_E8)(SEQ ID NO:1)具有至少99%的同一性的氨基酸序列。22.权利要求19的药物组合物或药品，其中所述rhMFG-E8具有与人MFG-E8(hMFG_E8)(SEQ ID NO:1)相同的氨基酸序列。23.权利要求17-22中任一项的药物组合物或药品，其中所述rhMFG-E8是非糖基化的。24.乳脂球表皮生长因子-因子VIII(MFG-ES)用于制备用于预防和/或治疗脑缺血症的药剂的用途。25.一种重组人MFG-E8(rhMFG-E8)，其具有与人MFG-E8(hMFG-E8) (SEQ ID NO:1)具有至少95%的同一性的氨基酸序列，其中所述rhMFG-E8是非糖基化的。26.权利要求25 的 rhMFG-E8，其中所述 rhMFG_E8 具有与人 MFG-E8 (hMFG_E8) (SEQ IDNO:1)具有至少99%的同一性的氨基酸序列。27.权利要求25 的 rhMFG-E8，其中所述 rhMFG_E8 具有与人 MFG-E8 (hMFG_E8) (SEQ IDNO:1)相同的氨基酸序列。28.一种预防和/或治疗受试者的缺血/再灌注后炎症和/或器官损伤的方法，包括以有效地预防和/或治疗炎症和/或器官损伤的量给受试者施用重组人乳脂球表皮生长因子-因子 VIII (rhMFG-E8)，其中所述 rhMFG_E8 具有与人 MFG-E8 (hMFG_E8) (SEQ ID NO:1)具有至少95%的同一性的氨基酸序列，并且其中所述rhMFG-E8是非糖基化的。29.权利要求28的方法，其中所述rhMFG-E8具有与人MFG-E8(hMFG-E8)(SEQ ID NO:1)具有至少99%的同一性的氨基酸序列。30.权利要求28 的方法，其中所述rhMFG-E8具有与人MFG-E8(hMFG-E8)(SEQ ID NO:1)相同的氨基酸序列。31.权利要求28-30中任一项的方法，其中所述方法阻止或减少肿瘤坏死因子_α、白细胞介素_6、白细胞介素-1 β、天冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、乳酸或乳酸脱氢酶中的一种或多种的血清升高。32.权利要求28-31中任一项的方法，其中所述受试者的存活机会增加。33.权利要求28-32中任一项的方法，其中所述炎症被预防或治疗。34.权利要求28-33中任一项的方法，其中所述器官损伤被预防或治疗。35.权利要求34的方法，其中所述器官是胃肠道、肝、肺、肾、心脏、脑、脊髓或受挤压的肢体中的一个或多个。36.权利要求28-33中任一项的方法，其中所述缺血/再灌注是胃肠道、肝、肺、肾、心脏、脑、脊髓或受挤压的肢体中的一个或多个的缺血/再灌注。37.一种治疗患有脓毒症的受试者或处于发生脓毒症的风险中的受试者的方法，所述方法包括给所述受试者施用有效地减小脓毒症的生理作用的量的重组人乳脂球表皮生长因子-因子VIII(rhMFG-E8)，其中所述rhMFG-E8具有与人MFG-E8(hMFG-E8) (SEQ ID NO:1)具有至少95%的同一性的氨基酸序列，并且其中所述rhMFG-E8是非糖基化的。38.权利要求37的方法，其中所述rhMFG-E8具有与人MFG-E8(hMFG-E8)(SEQ ID NO:1)具有至少99%的同一性的氨基酸序列。39.权利要求37的方法，其中所述rhMFG-E8具有与人MFG-E8(hMFG-E8)(SEQ ID NO:1)相同的氨基酸序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：王平，
申请(专利权)人：范斯坦医药研究院，
类型：发明
国别省市：美国;US