抗‑GITR抗体制造技术

本发明专利技术涉及抗‑GITR抗体。具体地，提供了针对人GITR的抗体及其应用，例如，用于治疗增生性障碍和免疫障碍。

【技术实现步骤摘要】
抗-GITR抗体本申请是申请日为2010年8月31日的中国专利申请201080049756.5“抗-GITR抗体”的分案申请。
本专利技术概括地涉及对糖皮质激素诱导的TNF受体(GITR)特异性的抗体及其应用。更具体地，本专利技术涉及识别人GITR并调节其活性的人源化抗体，所述活性尤其为在免疫障碍和增生性障碍中的活性。
技术介绍
糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR，TNFR超家族的一个成员)在先天性和适应性免疫系统的许多组分中表达(参见，例如，Hanabuchi等人(2006)Blood107：3617-3623；和Nocentini和Riccardi(2005)Eur.J.Immunol.2005.35：1016-1022)。在T细胞活化后，它的膜表达增加(Hanabuchi，同上；和Nocentini和Riccardi，同上)；它的触发会共活化效应性T淋巴细胞，并调节调节性T细胞(Treg)活性(参见，例如，McHugh，等人(2002)Immunity2002.16：311-323；Shimizu，等人(2002)Nat.Immunol..3：135-142；Ronchetti，等人(2004)Eur.J.Immunol.34：613-622；和Tone，等人(2003)Proc.Natl.Acad.Sci.USA100：15059-15064)。GITR会被GITR配体(GITRL)活化，所述配体主要在APC上表达，且已经提出，其通过它的细胞质结构域来递送信号，尽管需要进一步研究来确定生化信号传递(Nocentini，同上；Ronchetti，同上；Suvas，等人(2005)J.Virol.79：11935-11942；和Shin，等人(2002)Cytokine19：187-192)。GITR活化会增加对肿瘤和病毒感染的抗性，参与自身免疫过程／炎症性过程，并调节白细胞外渗(Nocentini同上；Cuzzocrea，等人(2004)J.Leukoc.Biol.76：933-940；Shevach等人(2006)Nat.Rev.Immunol.6：613-618；Cuzzocrea，等人(2006)J.Immunol.177：631-641；和Cuzzocrea等人(2007)FASEBJ.21：117-129)。需要改进的用于治疗免疫障碍和增生性障碍(例如，肿瘤和癌症)的方法和组合物，其中使用调节GITR活性的试剂。优选地，这样的激动剂对它的靶分子具有高亲和力，且能够在相对低剂量时刺激GITR信号传递。优选地，这样的方法和组合物对GITR是高度特异性的，且不会干扰其它受体的活性。优选地，这样的方法和组合物采用这样的激动剂：所述激动剂适用于修饰细胞毒性的有效负载向靶细胞的递送，而且也适用于非细胞毒性的应用。优选地，这样的方法和组合物采用这样的抗体：所述抗体被修饰成，当施用给有此需要的受试者时，会限制它们的抗原性。附图说明图1显示了DTA-1(对mGITR特异性的；参见，例如，Shimizu，等人(2002)NatureImmunol.3：135-142)和局部辐照的联合治疗的协同效应。“CR”是指完全消退。图2显示了通过Naismith和Sprang(1998)TrendsBiochem.Sci.23：74-79所述的方法测得的GITR的模块。粗体残基指示如下测定的构象DTA-1-样表位。具体实施方式通过提供GITR的激动剂，例如人源化的抗-GITR抗体，本专利技术满足了本领域的这些需要和其它需要。在一个方面，本专利技术提供了结合人GITR的结合化合物，诸如抗体或其片段，包括人源化的或嵌合的重组抗体，其包含：抗体轻链可变结构域或其抗原结合片段，其具有至少一个或多个选自SEQIDNO：56-88的CDR；和重链可变结构域，其具有至少一个或多个选自SEQIDNO：23-55的CDR。在其它实施方案中，本专利技术的结合化合物包含前述2个段落中描述的轻链可变结构域和重链可变结构域或其抗原结合片段。在有些实施方案中，结合化合物包含框架区，其中所述框架区的氨基酸序列是所有的或基本上所有的人免疫球蛋白氨基酸序列。在有些实施方案中，所述轻链可变结构域包含选自SEQIDNO：12-22的序列或其变体。在有些实施方案中，所述重链可变结构域包含选自SEQIDNO：1-11的序列。在另一个实施方案中，结合化合物包含在本段中描述的轻链可变结构域和重链可变结构域或其抗原结合片段。在其它实施方案中，本专利技术的结合化合物包含：基本上由选自SEQIDNO：91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111的序列组成的轻链可变结构域或其抗原结合片段，和／或基本上由选自SEQIDNO：90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110的序列组成的重链可变结构域或其抗原结合片段。在一个实施方案中，本专利技术涉及抗体，所述抗体能够在交叉阻断试验中阻断本专利技术的结合化合物与人GITR的结合。在不同的实施方案中，所述抗体能够阻断人GITR与包含本文公开的抗体36E5、3D6、61G6、6H6、61F6、1D8、17F10、35D8、49A1、9E5或31H6的CDR序列的抗体的结合。在另一个实施方案中，本专利技术涉及结合化合物，其能够阻断GITR-介导的活性，这样的活性包括、但不限于：原初CD4+T细胞增殖试验的共刺激。在有些实施方案中，本专利技术的结合化合物另外包含重链恒定区，其中所述重链恒定区包括γ1、γ2、γ3或γ4人重链恒定区或其变体。在不同的实施方案中，所述轻链恒定区包括λ或κ人轻链恒定区。在不同的实施方案中，本专利技术的结合化合物是多克隆的、单克隆的、嵌合的、人源化的或全人抗体或其片段。本专利技术也预见到，所述抗原结合片段是选自Fab、Fab’、Fab’-SH、Fv、scFv、F(ab’)2和双体的抗体片段。本专利技术包括一种增强人受试者的免疫应答的方法，所述方法包括：给有此需要的受试者施用有效地刺激GITR信号传递的量的对GITR特异性的抗体(或其抗原结合片段)。在有些实施方案中，对GITR特异性的抗体是人源化的或嵌合的抗体。在其它实施方案中，所述免疫应答是抗感染应答或抗病毒应答。在某些实施方案中，所述GITR抗体或其抗原结合片段与TGFβ抗体或局部辐射共同施用。本专利技术包括一种分离的核酸，其编码本专利技术的结合化合物的抗体实施方案的多肽序列。所述核酸可以是在表达载体中，其可操作地连接至所述载体转染的宿主细胞识别的控制序列上。也包括包含所述载体的宿主细胞和生产多肽的方法，所述方法包括：在表达所述核酸序列的条件下培养宿主细胞，从而生产多肽，并从宿主细胞或培养基回收多肽。本专利技术提供了由保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)的杂交瘤生产的抗体或其抗原结合片段，其中所述杂交瘤选自：PTA-9889、PTA-9890、PTA-9891、PTA-9892、PTA-9893、PTA-10286、PTA-10287、PTA-10288、PTA-10289、PTA-10290和PTA-10291。本专利技术包括结合人GITR蛋白的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段会识别跨人GITR蛋白(SEQIDNO：89本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种结合人GITR的结合化合物，其包含：a)抗体轻链可变结构域或其抗原结合片段，其具有SEQ ID NOs: 56、67和78的3个CDR序列；和b)抗体重链可变结构域或其抗原结合片段，其具有SEQ ID NOs: 23、34和45的3个CDR序列。

【技术特征摘要】
2009.09.03 US 61/239667;2010.02.24 US 61/307767;201.一种特异性结合人GITR的分离的抗体，其包含：a)轻链免疫球蛋白可变区，其包含SEQIDNO:105中描述的氨基酸序列所示的轻链免疫球蛋白可变区的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，其中氨基酸31是Q，并且氨基酸57是Q；和b)重链免疫球蛋白可变区，其包含SEQIDNO:104中描述的氨基酸序列所示的重链免疫球蛋白可变结构区的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3。2.一种分离的核酸，其编码如权利要求1所述的分离的抗体的轻链可变区和重链可变区。3.一种表达载体，其包含如权利要求2所述的核酸，所述核酸可操作地连接到当用所述载体转染宿主细胞时所述宿主细胞识别的控制序列上。4.一种宿主细胞，其包含如权利要求3所述的表达载体。5.一种生产抗体的方法，所述方法包括：在表达核酸序列的条件下，在培养基中培养如权利要求4所述的宿主细胞，从而生产包含轻链和重链可变...

【专利技术属性】
技术研发人员：XM谢拜，GP埃尔马科夫，DJ霍奇斯，LG普雷斯塔，
申请(专利权)人：默沙东公司，
类型：发明
国别省市：美国;US