五味子甲素在制备拮抗甲醛细胞毒性的产品中的新用途制造技术

本发明专利技术公开了五味子甲素在制备拮抗甲醛细胞毒性的产品中的新用途，五味子甲素可以拮抗甲醛诱导的细胞死亡和凋亡，提高细胞生存率。本发明专利技术公开了五味子甲素在制备抑制甲醛诱导的细胞死亡率升高的产品中的应用。五味子甲素在拮抗甲醛细胞毒性中具有重要作用，对防治甲醛引起的疾病具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
五味子甲素在制备拮抗甲醛细胞毒性的产品中的新用途
本专利技术涉及一种中药单体在制备拮抗甲醛细胞毒性的产品中的新用途；特别涉及五味子甲素在制备拮抗甲醛细胞毒性的产品中的新用途，属于中药单体的新药用用途。
技术介绍
甲醛分子式为H2CO，是一种无色、有强烈刺激性气味的挥发性有机化合物，是室内外空气污染的代表性污染物之一。根据甲醛存在的空间可分为外源性甲醛及内源性甲醛。外源性甲醛多指由人类活动而排放到环境中的甲醛，如发电、炼油、汽车尾气、涂料等，内源性甲醛是指在生物体内通过酶促反应和非酶促反应等方式产生的，以游离、可逆结合、不可逆结合等三种方式存在的甲醛。甲醛具有极大的毒性，可严重危害人体的健康。如外源性甲醛浓度过高可引起急慢性中毒，导致过敏性皮炎、黄疸、免疫力下降，肝细胞损伤等。而由于合成或降解代谢失衡导致内源性甲醛含量超标可引起衰老、神经细胞变性、肿瘤细胞分裂增殖等病理现象，如内源性甲醛的聚集可损伤神经系统，诱导动物和人的认知功能损伤障碍，是阿尔茨海默病、帕金森病等神经退行性疾病的潜在危险因子。因此，开发一种具有拮抗甲醛毒性的药物对防治上述疾病具有重要意义。五味子甲素(SchizandrinA)主要具有安神、保肝、抗癌、抗艾滋病、抗炎和免疫调节等药理作用，在拮抗甲醛方面的效用还没有文献报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种五味子甲素在制备拮抗甲醛细胞毒性的产品中的新用途，五味子甲素可以拮抗甲醛诱导的细胞死亡和凋亡，提高细胞生存率。本专利技术提供五味子甲素在制备抑制甲醛诱导的细胞死亡率升高的产品中的应用。五味子甲素在制备抑制甲醛诱导的细胞凋亡率升高的产品中的应用也属于本专利技术的保护范围。五味子甲素在制备拮抗甲醛诱导的细胞损伤的产品中的应用也属于本专利技术的保护范围。上述任一所述的应用中，所述细胞为离体的细胞；所述离体的细胞具体为SH-SY5Y细胞。五味子甲素在制备预防和/或治疗甲醛引起的疾病的产品中的应用也属于本专利技术的保护范围。上述任一所述的应用中，所述五味子甲素的分子式为C24H32O6。本专利技术证明五味子甲素在拮抗甲醛细胞毒性中具有重要作用，对防治甲醛引起的疾病具有重要意义。附图说明图1为五味子甲素拮抗甲醛诱导的细胞死亡。图2为五味子甲素拮抗甲醛诱导的细胞凋亡。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)购自中国医学科学院基础医学研究所基础医学细胞中心，产品目录号为3111C0001CCC000026。五味子甲素(分子式为C24H32O6，纯度:HPLC≥98％)购自北京恒元启天化工技术研究院，产品目录号为61281-38-7。细胞增殖-毒性检测试剂盒(CellCountingKit-8,CCK-8)购自DOJINDO东仁化学科技(上海)有限公司，产品目录号为CK04。AnnexinV-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒购自南京凯基生物科技发展有限公司，产品目录号为KGA1017。实施例1、细胞培养、接种与药物处理：一、将SH-SY5Y细胞培养于RPMI-1640全培养基(含有体积百分含量15％的灭活胎牛血清和1％双抗(100×青链霉素混合液中青霉素的含量为8000U/ml,链霉素的含量为8mg/ml)中，放入37℃，5％CO2培养箱中孵育，每2天进行一次传代。二、五味子甲素采用DMSO溶解，配制成3个浓度梯度的储备液，分别为5mM，10mM，20mM。甲醛采用RPMI-1640培养基(基础培养基，不含双抗和血清)稀释，制备成300mM的储备液。三、实验分组：共分为5组，分别为正常对照组、模型组、五味子甲素低浓度组、五味子甲素中浓度组、五味子甲素高浓度组。(一)各组的处理如下：将SH-SY5Y细胞培养于RPMI-1640全培养基中(含有体积百分含量10％的灭活胎牛血清和1％双抗(100×青链霉素混合液中青霉素的含量为8000U/ml,链霉素的含量为8mg/ml)，待细胞达到80％融合状态时，消化细胞并接种于96孔细胞培养板中(1×105个/ml，每孔100μl)，贴壁培养24h后，按试验分组加入含有相应药物的RPMI-1640基础培养基。具体为正常对照组加入RPMI-1640基础培养基(不含血清和双抗)，模型组及五味子甲素组中加入甲醛使其终浓度为300μM。低、中、高浓度五味子甲素组中五味子甲素的终浓度分别为5μM，10μM，20μM(将步骤二的五味子甲素及甲醛的高浓度储备液采用RPMI-1640基础培养基稀释1000倍的方法加入各组细胞中)。(二)CCK8细胞活性分析将各组细胞在37℃，5％CO2培养箱中培养24h后于各孔中加入10μlCCK-8溶液(细胞增殖-毒性检测试剂盒(CellCountingKit-8,CCK-8)自带)，孵育2h后采用酶标仪(Tecan200PRO，450nm)检测其光密度(opticaldensity，OD)值，得到OD450。五味子甲素拮抗甲醛诱导的细胞死亡结果如图1所示。图1中，Control：正常对照组；FA：模型组；SchA–5:五味子甲素低浓度组；SchA–10:五味子甲素中浓度组；SchA–20:五味子甲素高浓度组。图1中，**代表P＜0.01，与模型组(FA)相比。图1表明，5-20μM的五味子甲素可有效拮抗甲醛诱导的体外细胞毒性，呈浓度依赖性的提高受损细胞的活力。(三)AnnexinⅤ-PE/7-AAD试剂盒检测细胞凋亡将各组细胞在37℃，5％CO2培养箱中培养24h后，加0.25g/100ml胰酶(不含EDTA)消化，用PBS洗涤细胞两次(每次洗涤的条件为2000rpm，离心5min)，各组收集105个细胞，分别用含5μl7-AAD染液的BindingBuffer(二者均是凯基AnnexinV-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒自带)50μl混匀细胞，室温、避光反应5min，加入450μlBindingBuffer混匀，加入1μlAnnexinV-PE(AnnexinV-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒自带)混匀，室温、避光反应5min，流式细胞仪上机检测。五味子甲素拮抗甲醛诱导的细胞凋亡如图2所示。图2中，(A)Control：正常对照组；(B)FA：模型组；(C)SchA–5:五味子甲素低浓度组；(D)SchA–10:五味子甲素中浓度组；(E)SchA–20:五味子甲素高浓度组。图2表明，正常对照组、模型组、五味子甲素低浓度组、五味子甲素中浓度组和五味子甲素高浓度组的细胞凋亡率分别为17.7％、48.4％、35％、29％和22％。表明，5-20μM的五味子甲素可呈浓度依赖性的拮抗甲醛诱导的体外细胞凋亡。本文档来自技高网...

【技术保护点】
五味子甲素在制备抑制甲醛诱导的细胞死亡率升高的产品中的应用。

【技术特征摘要】
1.五味子甲素在制备抑制甲醛诱导的细胞死亡率升高的产品中的应用；所述产品为非预防和/或治疗阿尔茨海默病的产品。2.五味子甲素在制备抑制甲醛诱导的细胞凋亡率升高的产品中的应用；所述产品为非预防和/或治...

【专利技术属性】
技术研发人员：黎巍威，王学美，宋宜祥，王琳琳，赫荣乔，郭浩，
申请(专利权)人：北京大学第一医院，
类型：发明
国别省市：北京;11