一种快速检测大黄种子中抗氧化成分的方法技术

本发明专利技术涉及一种快速检测大黄种子中抗氧化成分的方法，该方法包括以下步骤：⑴将大黄种子粉碎后得到大黄种子粉末；⑵将大黄种子粉末用甲醇进行提取，过滤后得到大黄种子提取液；⑶大黄种子提取液经高效液相色谱色谱柱分离，分离的成分先流经第一个紫外检测器后作为样品，该样品与第二个泵中作为流动相泵入的质量浓度为10~200mg/L的抗氧化剂1,1-二苯基-2三硝基苯肼在反应环中衍生后，进入第二个紫外检测器中，然后将第一个紫外检测器和第二个紫外检测器所记录的色谱图进行比对，当第二个紫外检测器所记录的色谱图中出现倒峰的化合物时，该化合物即为提取物中的抗氧化成分。 本发明专利技术简单、快速，可以实现对大黄种子中抗氧化成分进行有效性的评价。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及，该方法包括以下步骤：⑴将大黄种子粉碎后得到大黄种子粉末；⑵将大黄种子粉末用甲醇进行提取，过滤后得到大黄种子提取液；⑶大黄种子提取液经高效液相色谱色谱柱分离，分离的成分先流经第一个紫外检测器后作为样品，该样品与第二个泵中作为流动相泵入的质量浓度为10~200mg/L的抗氧化剂1,1-二苯基-2三硝基苯肼在反应环中衍生后，进入第二个紫外检测器中，然后将第一个紫外检测器和第二个紫外检测器所记录的色谱图进行比对，当第二个紫外检测器所记录的色谱图中出现倒峰的化合物时，该化合物即为提取物中的抗氧化成分。?本专利技术简单、快速，可以实现对大黄种子中抗氧化成分进行有效性的评价。【专利说明】
本专利技术涉及一种快速检测抗氧化成分的方法，尤其涉及。
技术介绍
中药大黄为寥科大黄属植物唐古特大黄(Rheum tanguticum Maxim, ex Balf.)、掌叶大黄(Rheum p a lmatum Linn.)或药用大黄(Rh.0f f icinale Baill.)的干燥根及根茎。唐古特大黄又名君木扎(藏名)、鸡爪大黄，属青海省道地药材，生于林缘、林下沟谷或灌丛，海拔230(T4200m，另在甘肃南部、西藏东北部、四川西北部等也有分布。掌叶大黄主产于甘肃、青海、西藏、四川等地,主要为栽培,产量最大。药用大黄主产于四川、贵州、云南、湖北、陕西等地，栽培或野生。药材种子是药材生产和发展的源头，是决定中药材质量的内在因素，是发展优质中药材生产的科学前提。药用植物种类繁多，其种子由于遗传、生境等原因会出现千差万别的形态。目前，对于大黄种子的研究主要集中在发芽率、千粒重、净度、含水量等质量检验指标上，大黄种子资源丰富，其中抗氧化方面未见报道。I, 1- 二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基法已成为国际上较为公认的一种抗氧化活性测定方法，被频繁地用于生物活性物质的体外抗氧化活性评价研究方法中。DPPH在有机溶剂中是一种稳定的自由基，其孤电子在517nm附近有强吸收(呈深紫色)，当自由基清除剂存在时，孤电子被配对，吸收消失或减弱，因此通过测定吸收减弱的程度，可评价该自由基清除剂的活性。但利用DPPH法仅能对提取物中总抗氧化活性进行分析，无法知道抗氧化活性成分，无法比较出各活性物质抗氧化活性的大小。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种简单、快速、准确的快速检测大黄种子中抗氧化成分的方法。为解决上述问题，本专利技术所述的，包括以下步骤: (1)将大黄种子粉碎至40-60目后，得到大黄种子粉末； ⑵将所述大黄种子粉末用其质量50-100倍的体积浓度为50%~100%的甲醇在功率为20(T300W的条件下超声提取2(T50min，过滤后得到大黄种子提取液； ⑶所述大黄种子提取液经高效液相色谱色谱柱分离，分离的成分先流经第一个紫外检测器后作为样品，该样品与第二个泵中作为流动相泵入的质量浓度为1(T200 mg/L的抗氧化剂1，1-二苯基-2三硝基苯肼在反应环中衍生后，进入第二个紫外检测器中，然后将所述第一个紫外检测器和所述第二个紫外检测器所记录的色谱图进行比对，当所述第二个紫外检测器所记录的色谱图中出现倒峰的化合物时，该化合物即为提取物中的抗氧化成分。所述步骤⑶中高效液相色谱检测方法是指流动相A为甲醇，流动相B体积浓度为0.1%的乙酸水溶液；流速为0.6?1.2 mL/min，流动相条件为:0 min?28 min，35%A?43%A，65%B?57%B;28 min ?50 min，43%A?60%A，57%B?30%B。所述步骤⑶中反应环的长度为5?25米。所述步骤⑶中第一个紫外检测器检测波长为254 nm ;第二个紫外检测器检测波长为 517 nm。本专利技术与现有技术相比具有以下优点: 1、由于本专利技术采用DPPH-HPLC法在线测定大黄种子中抗氧化成分，而该法具有所用试剂量少、高通量检测、自动化程度高、检测时间短、灵敏度和特异性较高等特点，因此，适宜测定大黄种子中抗氧化成分，从而实现对大黄种子进行药理作用的有效性评价。2、由于本专利技术采用DPPH-HPLC法在线测定大黄种子中抗氧化成分，而该法只需比较进入第一及第二检测器后的色谱图即可判断抗氧化成分。如图1。比较色谱图中各个色谱峰，其中色谱图中色谱峰A、B、C、D、E、F、G、H的峰对应的进入第二检测器后的色谱图为倒峰，说明化合物A、B、C、D、E、F、G、H为抗氧化成分。3、本专利技术简单、快速，易于推广。【专利附图】【附图说明】下面结合附图对本专利技术的【具体实施方式】作进一步详细的说明。图1为本专利技术第一个检测器和第二个检测器所记录的色谱图进行比对图。【具体实施方式】实施例1 ，包括以下步骤: ⑴将大黄种子粉碎至40目后，得到大黄种子粉末。⑵将大黄种子粉末用其质量50倍的体积浓度为50%的甲醇在功率为200W的条件下超声提取50min，过滤后得到大黄种子提取液。⑶大黄种子提取液经高效液相色谱色谱柱分离，分离的成分先流经第一个紫外检测器后作为样品，该样品与第二个泵中作为流动相泵入的质量浓度为10 mg/L的抗氧化剂1，1- 二苯基-2三硝基苯肼在反应环中衍生后，进入第二个紫外检测器中，然后将第一个紫夕卜检测器和第二个紫外检测器所记录的色谱图进行比对，当第二个紫外检测器所记录的色谱图中出现倒峰的化合物时，该化合物即为提取物中的抗氧化成分。其中: 高效液相色谱检测方法是指流动相A为甲醇，流动相B体积浓度为0.1%的乙酸水溶液；流速为 0.6 mL/min，流动相条件为:0 min ?28 min，35%A?43%A，65%B?57%B ;28 min ?50min,43%A?60%A，57%B?30%B。反应环的长度为5米。第一个紫外检测器检测波长为254 nm ;第二个紫外检测器检测波长为517 nm。实施例2 —种快速检测大黄种子中抗氧化成分的方法，包括以下步骤: ⑴将大黄种子粉碎至60目后，得到大黄种子粉末。⑵将大黄种子粉末用其质量100倍的体积浓度为80%的甲醇在功率为300W的条件下超声提取30min，过滤后得到大黄种子提取液。⑶大黄种子提取液经高效液相色谱色谱柱分离，分离的成分先流经第一个紫外检测器后作为样品，该样品与第二个泵中作为流动相泵入的质量浓度为100 mg/L的抗氧化剂1，1- 二苯基-2三硝基苯肼在反应环中衍生后，进入第二个紫外检测器中，然后将第一个紫外检测器和第二个紫外检测器所记录的色谱图进行比对，当第二个紫外检测器所记录的色谱图中出现倒峰的化合物时，该化合物即为提取物中的抗氧化成分。其中: 高效液相色谱检测方法是指流动相A为甲醇，流动相B体积浓度为0.1%的乙酸水溶液；流速为 0.8 mL/min，流动相条件为:0 min ?28 min，35%A?43%A，65%B?57%B ;28 min ?50min,43%A?60%A，57%B?30%B。反应环的长度为10米。第一个紫外检测器检测波长为254 nm ;第二个紫外检测器检测波长为517 nm。实施例3 —种快速检测大黄种子中抗氧化成分的方法，包括以下步骤: ⑴将大黄种子粉碎至40目后，得到大黄种子粉末。⑵将大黄种子粉末用其质量100倍的体积浓度本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速检测大黄种子中抗氧化成分的方法，包括以下步骤：⑴将大黄种子粉碎至40~60目后，得到大黄种子粉末；⑵将所述大黄种子粉末用其质量50~100倍的体积浓度为50%~100%的甲醇在功率为200~300W的条件下超声提取20~50min，过滤后得到大黄种子提取液；⑶所述大黄种子提取液经高效液相色谱色谱柱分离，分离的成分先流经第一个紫外检测器后作为样品，该样品与第二个泵中作为流动相泵入的质量浓度为10~200 mg/L的抗氧化剂1,1‑二苯基‑2三硝基苯肼在反应环中衍生后，进入第二个紫外检测器中，然后将所述第一个紫外检测器和所述第二个紫外检测器所记录的色谱图进行比对，当所述第二个紫外检测器所记录的色谱图中出现倒峰的化合物时，该化合物即为提取物中的抗氧化成分。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：董琦，谭亮，胡风祖，肖远灿，迟晓峰，耿丹丹，
申请(专利权)人：中国科学院西北高原生物研究所，青海中科高原生物科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：青海;63